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一成人型多囊肾家系的遗传检测及产前诊断
目的 对一常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)家系进行致病基因突变鉴定,并对先证者妻子首次妊娠进行产前诊断.方法 用聚合酶链式反应,通过微卫星标记进行基因定位、DNA序列测定,确定基因突变;用AS-PCR对家系其他患者成员进行突变点检测和筛查;联合应用突变检测和连锁分析进行产前诊断.结果 该家系中多囊肾疾病的致病基因为PKD2,突变为外显子5中c.1249C>T(p.R417X);胎儿产前诊断结果显示未获得致病突变.结论 该家系的致病突变为c-12A9C>>(p.R417X),成功进行了产前诊断.
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骨髓增殖性疾病JAK2V617F点突变研究
本研究旨在对bcr/abl融合基因阴性的骨髓增殖性疾病(MPD)病人进行JAK2V617F点突变检测,探讨该突变在此类病人中的发生率和临床意义.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测70例典型MPD病人bcr/abl融合基因,用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)检测样本JAK2V617F点突变,对有突变的病例进行测序验证.结果表明,慢性髓系白血病(CML)病人bcr/abl融合基因均为阳性,JAK2V617F突变为阴性;余bcr/abl融合基因均为阴性,JAK2V617F阳性率在真性红细胞增多症(PV)病人为75%,在原发性血小板增多症(ET)病人为30%,在特发性骨髓纤维化(IMF)病人为50%.JAK2V617F在CML和bcr/abl阴性MPD病人中的分布有显著性差异(p<0.05).结论:JAK2V617F可能为真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、特发性骨髓纤维化的特征性分子事件,可作为一个独立的分子指标用于此三类疾病的临床诊断.
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Jak2v617f点突变与原发性血小板增多症的临床相关性研究
为探讨iak2v617f点突变与原发性血小板增多症(primary thrombocythemia,PT)的临床相关性,回顾性统计66例PT患者的临床及实验室检查资料,应用等位基因特异性-聚合酶链反应(AS-PCR)检测jak2v617f点突变,分析比较iak2v617f点突变阳性与阴性两组患者的临床及实验室指标.结果显示:66例PT患者中27例存在jak2v617f点突变,突变率为41%.jak2v617f点突变阳性和阴性两组患者初诊时骨髓红系百分比为(26.9 4±9.4)%和(16.3±8.7)%(p<0.05),粒红比为2.9±1.8和5.2±2.9(p<0.05),初诊及随访过程中微血管障碍发生率为29.6%和5.1%(p<0.05),差异有统计学意义;骨髓粒系百分比、外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板计数及血栓事件发生率均无统计学差异.结论:AS-PCR检测原发性血小板增多症患者中jak2v617f点突变阳性率为41%,jak2v617f点突变阳性的原发性血小板增多症患者初诊时骨髓红系增生明显活跃.
关键词： 原发性血小板增多症 JAK2V617F点突变 AS-PCR -
特发性骨髓纤维化患者JAK2V617F和MPLW515L点突变及JAK2外显子12突变的研究
特发性骨髓纤维化(IMF)为慢性骨髓增殖性疾病(CMPD)的一种,缺乏特异性诊治.现在研究表明近一半的IMF患者存在JAK2V617F点突变,另外,MPLW515突变及JAK2外显子12突变的发现提示MPD除了JAK2V617F点突变以外存在其他的发病机制[1].本研究应用等位基因特异性-聚合酶链反应(AS-PCR)及基因测序检测30例IMF患者的JAK2V617F、MPLW515L点突变及JAK2外显子12突变,了解其在IMF患者中的发生情况.
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猪基源的肝素粗品及混淆品的AS-PCR及ARMS分子检测
本文建立了一种简便、准确的鉴别猪基源的肝素粗品及其混淆品的DNA分子鉴定方法.在对家猪、野猪及其他7种动物(均用于加工猪肝素粗品的混淆品)的mtDNA D-loop区进行序列分析的基础上,设计了专门用于鉴别猪基源肝素钠的AS-PCR(allele-specific PCR)引物及ARMS(amplification refractory mutation system)引物,对家猪、野猪及其他7种动物来源的肝素、肌肉或血液共49个样品的基源进行了分子检测.结果表明:AS-PCR及ARMS方法均可用于猪基源肝素粗品的快速鉴别.AS-PCR鉴别时的复性温度为54～56℃,ARMS引物鉴别时的复性温度更宽,为52～58℃.在用两种引物对肝素样品进行鉴别时,仅猪来源的肝素DNA模板能扩增得到约170 bp的扩增条带,而其他动物来源的肝素DNA模板在同样条件下无扩增产物.
关键词： 猪基源肝素钠 mtDNA D-loop区 AS-PCR ARMS 分子鉴别 -
JAK2-V617F突变初步研究
目的 用等位基因聚合酶链反应(AS-PCR)方法检测Bcr-abl阴性的骨髓增殖性肿瘤(MPN)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增生异常综合征/骨髓增殖性肿瘤(MDS/MPN)、急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、Bcr-abl阳性的慢性粒细胞白血病(CML)患者和正常健康人对照的外周血白细胞JAK2-V617F基因点突变情况,了解该突变在不同疾病中的表达,并建立敏感特异高效的JAK2-V617F突变的临床检测方法.方法 采用AS-PCR方法检测基因组中JAK2-V617F突变,并经基因测序确定.所有MPN患者均行骨髓活检了解其纤维增生度.结果 MPN各型中真性红细胞增多症(PV)阳性率为93.8%;原发性血小板增多症(ET)阳性率为60.0%;原发性骨髓纤维化(IMF)阳性率为0;MDS阳性率为4.5%;MDS/MPN阳性率为12.5%;AML、ALL、CML及正常对照均为阴性.MPN各型之间、MPN与其它疾病之间,阳性半差异有显著性(P＜0.05).JAK2-V617F突变阳性的PV及ET患者白细胞数较阴性患者高,差异有显著性(P＜0.05).且阳性患者骨髓纤维组织增生较阴性者明显,差异有显著性(P＜0.05).AS-PCR法检测阳性率高于直接测序法,差异有显著性(P＜0.05).结论 JAK2-V617F是检测MPN尤其是PV的分子遗传学标志,同时与白细胞数、骨髓纤维化程度成正相关,有助于临床诊断及疾病预后判断.AS-PCR法是检测JAK2-V617F突变的敏感、特异的方法,可以成功应用于临床检测.
关键词： JAK2-V617F突变 MPN MDS MDS/MPN AS-PCR -
KLF4基因表达与JAK2 V617F点突变的关联性研究
目的 检测骨髓增殖性疾病(MPDs)中JAK2 V617F点突变与锌指蛋白转录因子(KLF4 mRNA)表达,探讨JAK2 V617F点突变与KLF4 mRNA表达水平与BCR/ABL阴性的MPDs的关系.方法 用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)技术检测4组JAK2 V617F点突变,根据结果分为阴性、阳性.反转录特异性聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测4组KLF4 mRNA的表达水平.结果 BCR/ABL阴性的MPDs的62例患者中JAK2 V617F 基因突变慢性特发性骨髓纤维化(IMF)中有5例,阳性率55.56%(5/9), 原发性血小板增多症(ET)中有15例,阳性率57.69%(15/26),真性红细胞增多症(PV)中有23例,阳性率88.46%(23/26),慢性嗜中性白血病1例.慢性粒细胞性白血病(CML)、急性白血病(AL)、对照组均没有阳性病例.KLF4 mRNA在每例样本中均有表达.KLF4 mRNA表达水平在PV组显著高于其他3组(P＜0.05).结论 BCR/ABL融合基因阴性的MPDs患者存在高频率JAK2 V617F点突变,KLF4 mRNA在PV患者中高表达.JAK2 V617F突变导致了KLF4基因表达的增高.JAK2 V617F突变阳性的ET患者,易出现并发症.AS-PCR是一种简单、有效检测JAK2 V617F突变方法.
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比格犬黑皮质素受体3基因A167T对体质量性状的影响
背景:MC3R基因突变是引起体质量增加的重要因素之一.目的:分析比格犬MC3R基因突变与体质量性状的关系.方法:抽取112只比格犬血液,记录体质量数据,然后提取DNA;采用AS-PCR技术对MC3R基因A167T侠点进行分析,并克隆测序.观察比格犬MC3R基因T167A的基因型分布及其与体质量的关系.结果与结论:167位点表现为A、T2个等位基因和AA、AT及TT 3种基因型;T167A碱基置换对犬体质量有显著影响(P<0.05).表明MC3R基因突变可致犬体质量增加,可作为犬体质量标记的候选基因.
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JAK2V617F点突变与骨髓增殖性疾病的临床相关性研究
目的:研究JAK2V617F点突变与骨髓增殖性疾病(myeloproliferative disease,MPD)的临床相关性,为MPD的基因学诊断及靶向治疗提供理论依据.方法:应用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)检测JAK2V617F点突变.结果:102例的MPD患者中包括慢性粒细胞白血病(CML)患者9例、真性红细胞增多症(PV)患者21例、原发性血小板增多症(ET)患者37例、特发性骨髓纤维化(IMF)患者16例和分类不明的骨髓增殖性疾病( uMPD)患者19例,JAK2V617F突变阳性率依次为11％、71.4％、51.4％、75.0％、78.9％.结论:JAK2V617F点突变有助于不同类型MPD的诊断,在MPD疾病的诊断中起重要作用.
关键词： 骨髓增殖性疾病 JAK2V617F点突变 AS-PCR -
改良AS-PCR引物对ABO基因分型的影响
目的 通过改进AS-PCR引物,提高ABO基因型分型正确率.方法 把引物P1 3'末端第5位碱基由G改为C,其分型图谱与改进前进行对比分析.结果 改进AS-PCR引物后,OO型非特异产物减少,避免了将OO型误判为AO型.结论 引物P1 3'末端第5位碱基由G改为C后,可有效防止OO型被误判为AO型.
