首页 > 文献资料
-
脊髓灰质炎病毒三类检测方法的灵敏度比较
目的 对三种脊髓灰质炎病毒检测方法的灵敏度进行比较.方法 将Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型脊灰病毒标准株(TR株),从1×101倍系列稀释至1×107倍.选用三类方法对制备的脊灰病毒稀释液系列进行检测,比较不同检测方法的灵敏度,三类方法分别为:RD和L20B细胞分离脊灰病毒、肠道病毒通用引物EV1/EV2和脊灰病毒特异性引物UC11/UG1分别进行RT-PCR检测脊灰病毒核酸、三种商业性肠道病毒Realtime RT-PCR检测试剂盒检测脊灰病毒核酸.结果 RD和L20B细胞分离脊灰病毒的检测限可达脊灰病毒标准株的104倍稀释度;基于肠道病毒通用引物(EV1/EV2)和脊灰病毒通用引物(UC11/UG1)的两种普通RT-PCR检测限分别为103、102倍稀释度;达安、金豪、基因格三种商业性实时荧光RT-PCR试剂盒的检测限分别为:101、103、104倍稀释度.结论 RD和L20B两种细胞分离脊灰病毒的灵敏度并不亚于现有的核酸检测方法.目前部分商业性的肠道病毒通用型核酸检测试剂盒主要针对手足口设计,对脊灰病毒的检测灵敏度反而不够,应慎重选用.
-
钙信号在PBDE-47和PCB153联合诱导SH-SY5Y细胞凋亡中的作用
目的 探讨钙信号在2,2',4,4'-四溴联苯醚(2,2',4,4'tetrabremediphenyl ethers,PBDE-47)和2,2'4,4',5,5'六氯联苯(2,2',4,4',5,5'-hexachlorobiphenyl,PCB153)诱导人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞凋亡中的作用.方法 PBDE-47设3个剂量组(1、5、10 μmol/L),PCB153设1个剂量组(5 μmol/L),DMSO为溶剂对照组,PBDE-47与PCB153单独和联合染毒SH-SY5Y细胞24 h后,检测细胞存活率、胞内钙离子浓度[Ca2+]i、细胞凋亡率和Caspase3、Caspase12、Cytochrome C及死亡相关蛋激酶(DAPK)等钙信号通路相关基因mRNA表达水平.结果 与溶剂对照组相比,5、10 μmol/LPBDE-47染毒剂量组细胞存活率均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,1、5、10 μmol/L PBDE-47剂量组[Ca2+]i和细胞凋亡率均显著增加(P<0.05).PCB153可明显增加PBDE-47诱导的[Ca2+]i和细胞凋亡率,并存在交互作用(F=6.642,P<0.01;F=10.226,P<0.01).与对照组相比,PBDE-47可使上述基因mRNA表达水平均增强(P<0.05).PBDE-47和PCB153联合对Cytochrome C和Caspsse3 mRNA表达水平的影响均存在交互作用(P<0.05).结论 钙信号可通过3条经典凋亡通路参与PBDE-47诱导SH-SY5Y细胞的凋亡,PBDE-47和PCB153在诱导SH-SY5Y细胞凋亡过程中存在交互作用.
关键词： 钙离子浓度 细胞凋亡 Real time RT-PCR SH-SY5Y -
调节糖脂代谢紊乱中药多靶点筛选的研究
[目的]观察几种中药成分对人肝癌细胞株Hep-G2糖脂代谢相关基因,包括细胞血管生成素相关生长因子(AGF)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)、低密度脂蛋白受体(LDLR)和胰岛素受体底物20RS-2)mRNA的影响.[方法]培养人肝癌细胞株Hep-G2,以实时定量逆转录聚合酶链反应(Real Time RT-PCR)法检测中药成分对AGF、G-6-Pase、LDLR和IRS-2 mRNA的影响.[结果]小檗碱可以显著提高Hep-G2细胞AGF和LDLR mRNA的表达.姜黄素可以降低G-6-Pase mRNA的表达.[结论]小檗碱和姜黄素可能通过对糖脂代谢相关基因的调节而对糖尿病有一定的治疗作用.
-
相对定量real time RT-PCR检测Runx2 mRNA在甲状腺乳头状癌中的表达
目的:相对定量检测Runx2 mRNA在甲状腺乳头状癌和腺瘤中的表达,并探讨其在甲状腺乳头状癌的发生发展及与钙化的意义.方法:相对定量real time RT PCR检测14例甲状腺乳头状癌和14例甲状腺腺瘤中Runx2mRNA的表达.结果:癌组和腺瘤组的△CT值分别为2.395±0.302和5.028±1.179,两样本均数差别的t检验示两组之间差异有统计学意义(P＜0.01)；癌组和腺瘤组的2-△△CT分别为7.826±5.004和1,两样本均数差别的t检验示两组之间差异有统计学意义(P＜0.01).癌组和腺瘤组内以钙化分组△CT结果示P＞0.05,组间差异均无统计学意义.癌组按肿瘤大小＜1 cm和≥1 cm分组,△CT值分别为2.629±0.300和2.212±0.124,P＜0.05；2-△△CT值分别为167.33±33.823和221.69±18.843,P＜0.01.癌组和腺瘤组以及癌组内钙化分组TSH水平比较均P＞0.05.结论:Runx2在甲状腺乳头状癌中的表达高,并与癌大小有关,在较大的癌中表达较高.Runx2与微钙化的关系,可能与甲状腺乳头状癌内钙化灶的产生及癌的发生发展有关,在其他的恶性肿瘤(如乳腺癌、前列腺癌、骨肉瘤)也有相关研究.
关键词： Real time RT-PCR Runx2 甲状腺乳头状癌 砂粒小体 微钙化 -
人小细胞肺癌细胞H446 Snail基因表达及其在顺铂耐药中的作用
目的 观察锌指转录因子snail在耐顺铂(cisplatin,CDDP)的人小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)H446/CDDP细胞中的表达情况,探讨snail表达在人SCLC顺铂耐药中的作用.方法 培养H446细胞系和H446/CDDP细胞系,采用MTT法检测H446/CDDP的耐药指数；分别提取人SCLC顺铂耐药细胞H446/CDDP及其亲代细胞H446的mRNA及总蛋白,应用sybgreen实时荧光RT-PCR、Western blot方法检测snail mRNA及蛋白表达水平.结果 H446/CDDP细胞snail蛋白及mRNA表达水平较H446细胞显著性升高(P＜0.05).结论 SCLC的顺铂耐药性可能与snail表达水平增高有关.
-
连云港市2010年手足口病的病原学检测与分析
目的 对连云港市2010年手足口病例标本进行病原学检测,了解手足口病的感染情况,分析检测结果,为手足口病的预防和临床诊断提供科学依据.方法 采用Real Time RT-PCR方法对手足口病患者咽拭子、肛拭子标本进行肠道病毒(EV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒16型(CoxA16)特异性核酸的检测.结果 475例患者标本中EV71阳性率27.8％(132例),CoxA16阳性率20.0％(95例),其他肠道病毒阳性率7.8％(37例);全年的感染高峰是4～6月份,占全年的39.58％;发病年龄以低年龄组为主,0～3岁感染率为77.68％.结论 手足口病发病有明显的时间和年龄差异,连云港市手足口病病原以EV71和CoxA16为主,重症病例的病原以EV71为主,荧光定量RT-PCR可快速诊断手足口病病原.
关键词： 手足口病 肠道病毒 Real time RT-PCR -
HMGB1在非小细胞肺癌中的表达及与临床病理的关系
目的 检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,探讨其与临床病理学特征的关系.方法 采用Real time RT-PCR法及免疫组织化学染色法检测64例NSCLC组织及20例癌旁正常肺组织中HMGBl mRNA和蛋白表达,并分析与临床病理资料的关系.结果 NSCLC组织中HMGB1阳性率显著高于正常肺组织,HMGB1的平均光密度值和HMGB1 mRNA的相对转录水平均显著高于正常肺组织,差异均有统计学意义(P＜0.01).HMGB1在鳞癌组织中的平均光密度值显著高于腺癌组织,在有淋巴结转移NSCLC组织中的平均光密度值显著高于无淋巴结转移NSCLC组织,差异均有统计学意义(P＜0.01和P＜0.05).HMGB1在组织学低分化组表达高于高分化组,随着临床分期增高HMGB1表达升高.HMGB1在NSCLC组织中的表达与患者年龄、性别无关.结论 HMGB1高表达可能与NSCLC的发生、发展及预后不良有关,检测HMGB1表达水平对NSCLC早期诊断及预后的综合评价有一定指导意义.
-
Real time RT-PCR定量检测BDNF mRNA表达水平方法的建立
目的 建立real time 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测BDNF mRNA基因表达的方法.方法 提取脑缺血组织的总RNA,进行RT-PCR扩增BDNF mRNA特异性片段,扩增产物重组到质粒上并测序,建立real time RT-PCR检测BDNF mRNA表达水平方法.结果 重组的质粒经酶切和测序,目的 片段已插入到载体内,得到real time RT-PCR动力学曲线.结论 成功建立real time RT-PCR检测BDNF mRNA基因表达的方法.
关键词： BDNF mRNA 脑缺血 Real time RT-PCR -
IL-13和乙醇促进人肺成纤维细胞胶原的表达
目的:研究乙醇和/或白细胞介素13(IL-13)对人肺成纤维细胞(HFL-1)Ⅰ、Ⅲ型胶原α1链基因(COL1A1、COL3A1)以及Ⅰ型胶原蛋白(Co Ⅰ)表达的影响,探讨肺纤维化的机制.方法:培养HFL-1,通过实时定量荧光RT-PCR检测乙醇和/或IL-13对HFL-1细胞IL-13受体(IL-13Rα1、IL-13Rα2、IL-4Rα)mRNA、COL1A1 mRNA和COL3A1 mRNA表达的影响,ELISA的方法检测乙醇和/或IL-13对HFL-1分泌Co Ⅰ的影响.结果:单独低浓度乙醇(25、50、100、200mmol/L)作用HFL-1后,与对照组相比IL-13Rα1 mRNA与IL-4Rα mRNA水平比对照组显著增高(P<0.05),而IL-13Rα2 mRNA水平比对照组显著降低(P<0.05).单独低浓度乙醇(25、50、100、200 mmol/L)对HFL-1的COL1A1 mR-NA和COL3A1 mRNA表达无影响(P>0.05).IL-13(10、20、50μg/L)可以促进HFL-1的COL1A1 mRNA和COL3A1 mR-NA的表达(P<0.05),且存在浓度依赖性.乙醇(200 mmol/L)与IL-13(10、20、50μg/L)共同作用刺激HFL-1促进COL1A1 mRNA和COL3A1 mRNA的表达比IL-13(10、20、50μg/L)单独作用强(P<0.05).IL-13组(10、20、50μg/L)和乙醇(200 mmol/L)与IL-13(10、20、50μg/L)共同刺激组HFL-1均有Co Ⅰ的分泌,但共同刺激组HFL-1分泌Co Ⅰ量显著增加(P<0.05).结论:单独低浓度乙醇(25、50、100、200mmol/L)不影响HFL-1细胞的COL1A1和COL3A1表达,但可以影响HFL-1细胞IL-4Rα、IL-13Rα1和IL-13Rα2的表达,而乙醇与IL-13共同刺激与单独IL-13刺激相比对HFL-1的COL1A1和COL3A1以及Co Ⅰ的表达有显著的促进作用.
-
miR-224、miR-135a 在非小细胞肺癌中的表达及与临床病理的关系
目的:检测miR-224与miR-135a两种microRNA (miRNA)在非小细胞肺癌中的表达,探讨其与肺癌临床病理的关系.方法:采用Real time RT-PCR法对31例非小细胞肺癌组织及癌旁正常肺组织的miR-224与miR-135a进行定量分析,结果由2(-ΔΔCT)处理,并分析与临床病理资料的关系.结果:相对内参U6,miR-224在非小细胞肺癌组织中表达量为4.2761±0.8731,在正常肺组织中的表达量为0.8967±0.2154,两者相比P＜0.05,miR-135a在非小细胞肺癌组织中表达量为0.3551±0.0985,在正常肺组织中的表达量为1.7443±0.3125,两者相比P＜0.05.miR-224与miR-135a的表达与非小细胞肺癌的临床分期、病理分级密切相关.结论:miR-224高表达及miR-135a低表达与非小细胞肺癌的临床分期、病理分级密切相关,miR-224有可能作为非小细胞肺癌的重要肿瘤标志物.
-
TGF-β1与外阴癌变的关系
目的:研究转化生长因子-β1(TGF-β1)在外阴癌变过程中的表达及其临床意义.方法:采用real time RT-PCR及免疫组化方法检测60例外阴鳞癌组织、60例外阴上皮内瘤样病变及10例正常外阴组织标本中TGF-β1 mRNA及其蛋白的表达情况.结果:Real time PCR检测发现,TGF-β1在外阴鳞状细胞癌中的表达量明显低于在外阴上皮内瘤样病变及正常组织中的表达量,且差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组化结果显示,正常外阴皮肤组的TGF-β1表达阳性率高于外阴上皮内瘤样病变组及外阴鳞状细胞癌组,与两者相比有显著差异(P＜0.05).外阴上皮内瘤样病变及外阴鳞状细胞癌中TGF-β1表达的阳性率无显著差异(P＞0.05).TGF-β1的表达与外阴鳞状细胞癌患者的组织分化程度及肿瘤分期均无关(P＞0.05).结论:TGF-β1的表达可能与外阴癌变的过程有关,与外阴鳞状细胞癌的临床分期和病理类型无关.
关键词： 外阴鳞癌 TGF-β1 Real time RT-PCR 免疫组化
