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AG490抑制Jak2-STAT3信号通路调控骨髓间充质干细胞迁移、矿化及骨缺损愈合的机研究
目的 探讨Jak2-STAT3信号通路抑制剂AG490对骨髓间充质干细胞(bone marrowmesenchymal stem cell,BMSC)迁移、矿化及骨缺损愈合的调控机制.方法 应用甲基噻唑基四唑(methyl-thiazolyl tetrazolium,MTT)实验、细胞划痕实验及Transwell实验检测AG490对小鼠来源的原代BMSC增殖和迁移能力的调控.荧光定量PCR和蛋白质印迹法研究AG490调控BMSC增殖和迁移的相关基因及通路机制.通过茜素红染色及碱性磷酸酶活性实验探究AG490对BMSC矿化及成骨向分化能力的影响.构建小鼠股骨缺损模型,研究AG490对骨缺损愈合的影响及机制.结果 细胞划痕实验中第1、2天实验组[(12.42±7.50)％,(41.8±2.6)％]的细胞迁移率均显著小于对照组[(55.5±9.9)％,(86.9±8.7)％](P=0.006,P=0.005),Transwell实验中实验组[(22.8±5.9)个]中单位视野细胞迁移数显著少于对照组[(58.3±6.6)个](P=0.000).实验组MMP-7(0.5±0.1)、MMP-9 (0.1 ±0.1)及CXCR4 (0.35±0.07)的相对基因表达量均显著少于对照组[(1.1±0.1),(1.06±0.33),(1.08±0.13)] (P=0.0000,P=0.0003,P=0.0000).蛋白质印迹法结果中实验组磷酸化Jak2、磷酸化STAT3的蛋白表达在AG490的作用下与对照组相比受到明显抑制.BMSC矿化诱导14d后,实验组的碱性磷酸酶相对活性(8.0±2.1)较对照组(35.7±1.8)受到显著抑制(P=0.0005),实验组较对照组矿化结节小且数量较少.体内实验中,术后第5周时,实验组的相对骨密度显著低于对照组(P=0.0004).HE染色及免疫组化染色可见实验组中骨缺损断端处磷酸化Jak2、磷酸化STAT3和碱性磷酸酶阳性细胞较对照组稍多.结论 AG490可通过抑制Jak2-STAT3信号通路抑制BMSC的增殖、迁移和矿化,从而调控骨缺损愈合.
关键词： 细胞迁移分析 Jak2-STAT3信号通路 骨折愈合 AG490 -
去甲肾上腺素和哌唑嗪对瘦素诱导肝星状细胞活化增殖和JAK2-STAT3信号通路及活性氧产生的影响
目的 研究去甲肾上腺素(NA)和哌唑嗪(Pz)对人肝星状细胞系(HSC-LX2)活化增殖、JAK2-STAT3信号通路及活性氧产生的影响.方法 体外培养HSC-LX2分为对照组(单纯HSC-LX2培养,不加任何药物)、模型组(100ng·mL-1瘦素)、低、中、高剂量组(1,10,100 μmol·L-1 NA)和联合组(100μmol·L-1 NA+ 10 mmol·L-1 PZ).处理24h后,用MTT法检测细胞增殖,用Western-blot检测p-JAK2和p-STAT3蛋白表达,用实时荧光聚合酶链式反应(RT-PCR)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、酪氨酸蛋白酶1B(PTP1 B) mRNA表达,用流式细胞术检测活性氧(ROS)水平.结果 对照组、模型组、低、中、高剂量组和联合组的光密度分另为(0.30±0.05),(0.48 ±0.06),(0.58 ±0.08),(0.69 ±0.11),(0.80±0.14),(0.60±0.10);p-JAK2蛋白表达量分别为(0.24 ±0.04),(0.40±0.06),(0.57 ±0.09),(0.66±0.11),(0.78 ±0.12),(0.53 ±0.08);p-STAT3蛋白表达量分别为(0.30±0.05),(0.43 ±0.07),(0.59±0.09),(0.71±0.11),(0.82 ±0.12),(0.61±0.09);α-SMA mRNA表达量分别为(0.77±0.12),(0.98 ±0.15),(1.22±0.20),(1.40±0.23),(1.59±0.25),(1.24±0.21);TTMP-1 mRNA表达量分别为(0.61 ±0.10),(0.70 ±0.11),(0.89±0.14),(1.03 ±0.15),(1.32 ±0.22),(0.91 ±0.15);PTP1B mRNA表达量分别为(0.92 ±0.14),(0.79 ±0.12),(0.62 ±0.09),(0.50 ±0.08),(0.38±0.06),(0.63±0.10);ROS分别为(14.25 ±2.31),(23.74±3.62),(31.12 ±5.13),(40.69 ±6.02),(51.54±7.45),(32.76 ±5.23),低、中、高剂量组和联合组的上述指标与模型组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),且联合组的上述指标和高剂量组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 去甲肾上腺素主要通过α1肾上腺素受体调控瘦素诱导的HSC-LX2增殖和氧化应激,激活JAK2-STAT3信号转导,并上调α-SMA、TIMP-1基因表达,下调PTP1B基因表达.
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加味四逆散对大鼠肝星状细胞株HSC-T6JAK2-STAT3信号通路的影响
目的 观察加味四逆散对大鼠肝星状细胞株HSC-T6 JAK2-STAT3信号通路的影响.方法 正常大鼠灌胃加味四逆散药物煎剂7d,制备含药血清;应用蛋白印迹试验检测加味四逆散对100mg/L瘦素刺激HSC-T6中JAK2、STAT3蛋白的表达水平.结果 加味四逆散作用6h后,JAK2、STAT3蛋白表达水平开始降低,且JAK2降低较为明显,24h STAT3降低明显.结论 加味四逆散能降低增殖后的肝星状细胞JAK2、STAT3蛋白表达,并阻断JAK2-STAT3经典通路的信号转导作用,这可能是加味四逆散抗肝纤维化的作用之一.
关键词： 加味四逆散 瘦素 肝星状细胞 Jak2-STAT3信号通路 -
加味四逆散及拆方对肝星状细胞JAK2-STAT3信号通路的影响
目的:观察复方加味四逆散及拆方的药物血清对肝星状细胞( HSC-T6 )JAK2-STAT3信号通路的影响.方法:用加味四逆散及拆方煎剂给正常Wistar大鼠灌胃7天,制备含药血清；培养肝星状细胞；用100ng/mL的瘦素刺激HSC-T6使其增殖；应用蛋白印迹试验检测各组药物血清对增殖后的肝星状细胞JAK2、STAT3蛋白的表达水平.结果:加味四逆散作用6h后,JAK2、STAT3蛋白的表达水平开始降低,且JAK2降低较为明显,24h STAT3降低为明显.加味四逆散各拆方组作用12h后,STAT3蛋白水平降低,且存在差异.结论:(1)加味四逆散全方及拆方均有降低增殖后的肝星状细胞JAK2、STAT3蛋白的表达.(2)加味四逆散全方阻断JAK2-STAT3通路信号转导的作用显著优于拆方的效果,综合运用比拆方有更好疗效.
关键词： 加味四逆散及拆方 肝星状细胞 Jak2-STAT3信号通路 -
保肝宁对瘦素刺激HSC增殖及其JAK2-STAT3信号通路影响的实验研究
目的 观察中药复方保肝宁对瘦素刺激肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖功能的作用及其对JAK2-STAT3,信号通路的影响.方法 给正常Wistar大鼠灌胃保肝宁煎剂7d,制备含药血清,用噻唑兰(MTT)比色法检测保肝宁对100ng/ml的瘦素刺激HSC-LX2增殖的影响;应用蛋白印迹试验检测保肝宁对100ng/ml的瘦素刺激HSC-LX2中的JAK2、STAT3蛋白的表达水平.结果 保肝宁组对瘦素刺激的HSC-LX2增殖有显著的抑制作用;保肝宁作用6h后,JAK2、STAT3蛋白表达水平开始降低,此时JAl2降低较为明显:24h时STAT3蛋白降低较为明显.结论 中药复方保肝宁有抑制瘦素促HSC-LX2增殖的作用,而JAK2-STAT3通路被阻断,JAK2、STAT3蛋白表达的降低可能是其发生的主要机制之一,而这一作用主要是通过阻断瘦素发生生物学效应的JAK2-STAT3经典通路,降低JAK2、STAT3蛋白表达来实现的.
关键词： 保肝宁 瘦素 肝星状细胞 Jak2-STAT3信号通路 -
隐丹参酮抑制恶性神经胶质瘤细胞C6增殖及对 JAK2-STAT3信号通路的影响
目的：评估隐丹参酮对恶性神经胶质瘤细胞C6的增殖作用及对 JAK2-STAT3信号通路的影响。方法使用MTT法评价隐丹参酮对C6细胞存活率的影响，使用hochest染色和BrdU插入法检测隐丹参酮对C6细胞凋亡和增殖的影响，使用Western blot 法检测隐丹参酮对C6细胞p-JAK2和p-STAT3（Tyr705）的影响。结果隐丹参酮显著抑制C6的生长和增殖（ P＜0.05），但不促进凋亡。隐丹参酮显著抑制p-STAT3（Tyr705）蛋白表达，但不影响p-JAK2。结论隐丹参酮是恶性神经胶质瘤C6的抗增殖剂，其作用机制与抑制STAT3信号有关。
关键词： 恶性神经胶质瘤 增殖 Jak2-STAT3信号通路 -
JAK2-STAT3信号通路在白介素-1β经动脉外膜给药致平滑肌细胞增殖迁移中的作用
目的 研究白细胞介素-1β经血管外膜给药导致动脉平滑肌细胞发生的改变及其与JAK2-STAT3信号通路的关系,明确JAK2-STAT3信号通路在血管增殖性病变中的作用.方法 6～8周龄SD雄性大鼠24只,分离左侧颈总动脉,实验组(n=18)血管外膜包裹含白介素-1β2.5μg的琼脂缓释悬液,对照组(n=6)包裹不含白介素的琼脂悬液,术后2、8、24、48 h,1、2周分别处死实验组大鼠3只,对照组1只,血管标本经切片HE染色观察形态,Westernblot法检测JAK2、STAT3、磷酸化JAK2以及磷酸化STAT3的表达,免疫组化标记定位磷酸化JAK2及磷酸化STAT3；另取SD雄性大鼠9只,分离两侧颈总动脉,左侧滴加JAK2抑制剂AG490缓释凝胶,右侧滴加等量空白凝胶后两侧均包裹等量白介素-1β,术后8、48 h,1周处死动物分别行HE染色及Western blot检测.结果 白介素-1β包裹血管外膜后出现血管平滑肌细胞的增殖、迁移,通道蛋白JAK2、STAT3在不同时间点出现不同程度的磷酸化,经Western blot检测并行灰度分析,p-JAK2相对灰度值对照组(0.337 ±0.216),8h组(1.764±0.513),1周组(0.451±0.229)；p-STAT3相对灰度值对照组(0.125±0.870),24h组(1.909±0.309),2周组(0.448±0.516),各组间有明显差异(P＜0.05).加用抑制剂后,8h组p-JAK2相对灰度值实验侧(0.085±0.031),对照侧(1.416±0.468),48 h组p-STAT3相对灰度值实验侧(0.460±0.065),对照侧(2.425±0.638),提示JAK2、STAT3的磷酸化水平被明显抑制(P＜0.05),平滑肌细胞变化程度下降.结论 炎性因子白细胞介素-1β经动脉外膜给药可致动脉平滑肌细胞增殖、迁移,这种改变与JAK2-STAT3信号通路有直接关系.
关键词： 平滑肌细胞 Jak2-STAT3信号通路 白细胞介素-1β -
JAK2-STAT3信号通路在舒芬太尼预处理诱导大鼠心肌保护效应中的作用
目的 探讨舒芬太尼预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响以及JAK2-STAT3信号通路的作用.方法 雄性SD大鼠60只,体质量250～300 g,随机均分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、舒芬太尼预处理组(SPC组)、舒芬太尼预处理联合JAK2激酶抑制剂组(S+A组)及JAK2激酶抑制剂组(A组).采用结扎冠状动脉左前降支的方法制作心肌缺血再灌注模型.SPC组于心肌缺血前股静脉泵注舒芬太尼1μg/kg,泵注5 min,间隔5 min,重复处理3次,总量共3 μg/kg;S+A组:舒芬太尼预处理前5 min给予JAK2激酶抑制剂AG490(1 mg/kg),缺血前30min舒芬太尼预处理;A组:缺血前35 min给予JAK2激酶抑制剂AG490(1 mg/kg).心肌缺血前30min(T0)、缺血前即刻(T1)、缺血30 min(T2)、再灌注30 min(T3)和再灌注120 min(T4)时记录心率(HR)和平均动脉压(MAP).再灌注120 min抽取动脉血,离心取血清测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH).实验结束时,各组取6只大鼠心脏测算心肌梗死面积,其余6只大鼠采用Western blot测定心肌组织磷酸化STAT3 (P-STAT3)的表达.结果 比较各组间不同时点HR的差异无统计学意义(P＞0.05).与S组相比,其余各组T2～T4时MAP降低(P＜0.05或P＜0.01);血清CK-MB和LDH活性明显增高(P＜o.01).与I/R组相比,SPC组MAP数值稍高,但差异无统计学意义;CK-MB和LDH活性降低(P＜0.01);心肌梗死范围减小(P＜0.01).与S组比较,I/R组和SPC组P-STAT3表达上调(P＜0.01),且SPC组上调高于I/R组(P＜0.01).结论 舒芬太尼预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制可能与激活JAK2-STAT3信号通路、上调P-STAT3的表达有关.
