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连续性血液净化对急性重症胰腺炎早期诱导的肠黏膜屏障功能障碍的影响
目的 研究连续性血液净化(continuous blood purification,CBP)对急性蕈症胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)早期诱导的肠黏膜屏障功能障碍的作用.方法以26例行持续静静脉血液滤过(continuous veno-venous hemofiltration,CVVH)的早期SAP患者作为研究对象.所有患者行CVVH 24 h,以血清D-乳酸、二胺氧化酶(diamine OXidase,DAO)和内毒素水平以及肠黏膜上皮细胞的通透性作为评价肠黏膜屏障功能的指标.分别在治疗前和治疗6、12和24 h时采集静脉血.同时培养人Caco-2细胞,建立单层肠黏膜上皮细胞模型并与SAP患者CVVH各时间点的血清混合培养,电阻仪测定跨细胞电阻以反映其通透性的变化,荧光显微镜观察骨架蛋白(纤维状肌动蛋白)的分布和表达.结果 CVVH治疗后急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ显著改善.与正常对照组比较,SAP患者血清二胺氧化酶、D-乳酸和内毒素水平及通透性明显增高(P<0.01),骨架蛋白模糊,部分断裂,细胞间连接松散.CVVH治疗后SAP患者血清二胺氧化酶、D-乳酸和内毒素水平明显下降(P<0.01),肠黏膜上皮细胞的高通透性和骨架蛋白解聚得以减轻.结论 SAP患者早期存在肠黏膜屏障功能障碍.CBP不仅改善全身机能状况而且对SAP诱导的肠黏膜屏障功能障碍具有保护作用.这种作用与清除炎症因子并改善上皮细胞骨架蛋白的重排有关.
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C3胞外酶抑制乙醇诱导的肠黏膜屏障功能紊乱
目的：探讨RhoA特异性抑制剂C3胞外酶对乙醇诱导的肠上皮细胞通透性增加过程中的抑制作用。方法予乙醇及C3胞外酶作用肠上皮细胞屏障后，测定跨上皮细胞电阻值（TEER），分析肠上皮细胞屏障的通透性的变化。应用Western blot检测紧密连接跨膜蛋白occludin的表达；应用免疫荧光染色法检测紧密连接蛋白occludin表达和分布。结果予C3胞外酶预处理后，可显著抑制乙醇诱导的TEER值降低及occludin(S/IS)比值的增加，同时可部分恢复细胞膜上occludin的表达。结论 RhoA特异性抑制剂C3胞外酶可抑制乙醇诱导肠上皮细胞屏障通透性增加的过程。
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乙醇对肠黏膜屏障功能的影响及作用机制
目的 探讨乙醇对肠上皮细胞屏障功能的影响及作用机制.方法 将不同浓度的乙醇与肠上皮细胞株Caco-2细胞共培养4h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法及乳酸脱氢酶法(LDH)检测细胞存活率.应用Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障模型,不同浓度乙醇溶液处理后,测定其跨上皮细胞电阻值(TEER)及荧光黄透过率的变化.应用蛋白印迹法及免疫荧光染色法检测紧密连接蛋白occludin的表达和分布.结果 乙醇浓度≤5％时,不影响Caco-2细胞的生存率.乙醇诱导肠上皮细胞屏障通透性增加,呈浓度-时间依赖性；乙醇作用后,细胞膜上occludin表达逐渐降低,60 min时达低值,细胞膜上呈点状分布,此后部分可逐渐恢复,趋势与TEER值及荧光黄透过率一致.结论 乙醇可破坏细胞间紧密连接蛋白,进而诱导肠上皮细胞屏障通透性增加.
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ROCK参与乙醇诱导肠上皮细胞屏障通透性增加
目的 探讨Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK)参与乙醇诱导的肠上皮细胞屏障通透性增加的作用.方法 应用ROCK特异性抑制剂Y-27632预处理Caco-2细胞后,测定跨上皮细胞阻抗值(TEER)及荧光黄透过率,分析肠上皮细胞屏障的通透性的变化.应用Western blot的方法检测肌球蛋白轻链(MLC)、p-MLC及紧密连接相关蛋白(occludin)的表达.结果 Y-27632显著抑制乙醇诱导的TEER值降低、荧光黄透过率升高、p-MLC/MLC及occludin(S/IS)比直的增加.结论 ROCK参与乙醇诱导肠上皮细胞屏障通透性增加.
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肠道转运Caco-2细胞单层模型的建立及验证评价
目的 建立Caco-2细胞单层模型用于药物转运研究.方法 按照常规的细胞培养方法,将Caco-2细胞接种到Millicell小室内(接种密度1×105个·mL-1),培养21d.定期用细胞电位仪监测跨上皮细胞电阻(TEER),评价细胞单层的紧密性与完整性；通过荧光黄转运实验检查Caco-2细胞单层模型细胞旁路转运通透性；通过普萘洛尔转运实验验证Caco-2细胞单层模型跨细胞被动转运通透性.结果 培养21 d后,TEER值达到(981±123)Ω·cm2,荧光黄和普萘洛尔的表观通透系数分别为0.33×10及16.7× 10-6cm·s-1.结论 本研究建立的Caco-2细胞单层模型紧密、完整,具有良好通透性,可用于药物转运研究.
关键词： Caco-2细胞单层 肠道转运模型 跨上皮细胞电阻 -
ML-7对酒精致肠黏膜屏障功能障碍的作用
目的 探讨MLCK特异性抑制剂ML-7对乙醇诱导的肠上皮细胞通透性的作用.方法 应用ML-7预处理Caco-2细胞后,测定跨上皮细胞电阻值(TEER)及荧光黄透过率,分析肠上皮细胞屏障的通透性的变化.应用Western blotting检测紧密连接相关蛋白(Occludin和ZO-1)的表达.结果 ML-7显著抑制乙醇诱导的肠上皮细胞屏障TEER值降低、荧光黄透过率升高、Occludin(S/IS)比值增加及ZO-1表达减少.结论 MLCK参与乙醇诱导肠上皮细胞屏障通透性增加的过程,揭示了乙醇引起肠上皮细胞屏障对大分子的通透性增加的部分机制.
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乙醇对肠黏膜屏障功能的影响及作用机制
目的 探讨乙醇对肠上皮细胞屏障功能的影响及作用机制.方法 将不同浓度的乙醇与肠上皮细胞株Caco-2细胞共培养4h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法及乳酸脱氢酶法(LDH)检测细胞存活率.应用Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障模型,不同浓度乙醇溶液处理后,测定其跨上皮细胞电阻值(TEER)及荧光黄透过率的变化.应用蛋白印迹法及免疫荧光染色法检测紧密连接蛋白occludin的表达和分布.结果 乙醇浓度≤5％时,不影响Caco-2细胞的生存率.乙醇诱导肠上皮细胞屏障通透性增加,呈浓度-时间依赖性；乙醇作用后,细胞膜上occludin表达逐渐降低,60 min时达低值,细胞膜上呈点状分布,此后部分可逐渐恢复,趋势与TEER值及荧光黄透过率一致.结论 乙醇可破坏细胞间紧密连接蛋白,进而诱导肠上皮细胞屏障通透性增加.
