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肌球蛋白轻链激酶促进卵巢癌迁移机制的研究
目的：研究肌球蛋白轻链激酶（MLCK）在卵巢癌转移中的作用。方法培养人卵巢癌细胞株SKOV3，分别感染空白对照病毒、MLCK ShRNA病毒。细胞克隆形成试验检测细胞增殖情况；Boyden小室进行迁移能力的检测；Western blot方法检测相关蛋白的表达水平。结果 Boyden小室试验显示下调内源性的MLCK抑制了卵巢癌细胞的迁移能力（P＜0.05），细胞克隆形成试验及MTT试验显示其对卵巢癌细胞的生长未见有明显影响。蛋白质免疫印迹结果显示，下调内源性MLCK后，MMP2的表达降低，同时p65的核转录明显减少。细胞内转入DN-IκB质粒后，对细胞迁移能力的抑制与下调MLCK的相似。结论 MLCK可以通过调节NF-κB的活化水平及MMP2的表达水平，从而调节卵巢癌细胞的迁移能力。
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不同剂量黄连对脾虚大鼠胃黏膜病理形态及CaM/MLCK mRNA表达水平的影响
目的:观察不同剂量黄连水煎液对脾虚大鼠胃黏膜病理变化和胃窦平滑肌组织CaM/MLCKmRNA表达水平的影响.方法:采用利血平腹腔注射法建立脾虚证大鼠模型,共造模14 d.受试大鼠随机分为6组,即空白对照组,模型组,多潘立酮组,黄连高、中、低剂量组,每组10只.除空白对照组外,其余各组采用利血平腹腔注射法建立脾虚证大鼠模型.造模结束后,黄连各组灌服不同剂量黄连水煎液(给药剂量分别为5 g·kg-1,2.5g·kg-1,1.25 g·kg-1),多潘立酮组灌服多潘立酮水溶液,正常组和模型组则用等体积生理盐水对照灌胃,持续14 d.HE黏膜染色观察胃黏膜病理变化,Real-time PCR法检测大鼠胃窦平滑肌组织CaM、MLCK mRNA表达水平.结果:脾虚模型组胃黏膜萎缩变薄,皱襞低平,出现胃黏膜中断,水肿明显,脂肪及胶原纤维组织增生.黄连高、中、低剂量组胃黏膜中段、水肿等病理现象均不同程度减轻,脂肪及胶原纤维组织增生也减少.与空白对照组比较,模型组胃窦平滑肌组织CaM和MLCK mRNA含量均显著下降(P ＜0.001);与模型组比较,黄连高、中、低剂量组CaM mRNA含量均显著升高(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,多潘立酮组、黄连高、中剂量组MLCK mRNA含量均显著升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论:一定剂量黄连可能通过保护胃黏膜,增加胃黏膜组织CaM/MLCK mRNA的表达调控“Ca2+-CaM-MLCK”实现“健胃”作用.
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清开灵对小鼠脑微血管内皮细胞缺氧损伤MLCK基因转录的影响
目的:研究清开灵对小鼠脑微血管内皮细胞缺氧损伤MLCK基因转录的影响.方法:细胞分为正常对照组(有糖Earle液)、模型组(缺氧缺糖模拟缺血:无糖Earle液,37℃,5％ CO2,1％O2培养24 h)、清开灵低、中、高浓度组(缺氧缺塘+清开灵1％、2％、4％),在37℃、5％ CO2培养箱中培养24 h后经MTT比色法检测细胞活力、荧光定时定量PCR检测MLCK基因转录.结果:缺氧缺糖24 h后微血管内皮细胞活性降低(P＜0.05)、MLCK基因转录被抑制(P＜0.05);清开灵1％、2％、4％组均抑制了缺糖缺氧条件下微血管内皮细胞活性的降低(P＜0.05),清开灵4％组降低MLCK的表达(P＜0.05).结论:缺糖缺氧条件下微血管内皮细胞活性降低.清开灵通过抑制MLCK的表达,恢复BBB的部分屏障功能.
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子宫肌瘤组织中肌球蛋白轻链激酶和硫酸基转移酶2A1表达量与细胞侵袭、上皮间质转化的相关性
目的 研究子宫肌瘤组织中肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、硫酸基转移酶2A1 (SULT2A1)表达量与细胞侵袭、上皮间质转化的相关性,为临床提供参考.方法 选择2014年5月-2016年12月在宁波开发区中心医院手术切除的子宫肌瘤患者为研究对象,收集子宫肌瘤组织和正常子宫肌组织,采用荧光定量PCR试剂盒测定MLCK、SULT2A1的mRNA表达量,采用酶联免疫吸附试剂盒测定MLCK、SULT2A1及细胞增殖、凋亡、侵袭、上皮间质转化相关基因的蛋白表达量.结果 子宫肌瘤组织中MLCK的mRNA表达量以及MLCK、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、生存素(Survivin)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、趋化因子受体-4 (CXCR4)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP7、MMP9、N-钙黏蛋白(N-cad-herin)、波形蛋白(Vimentin)、Snail的蛋白表达量均显著高于正常子宫肌组织,SULT2A1、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、自杀相关因子(Fas)、Fas配体(FasL)、Rb、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、E-cadherin的mRNA表达量以及SULT2A1的蛋白表达量均显著低于正常子宫肌组织;子宫肌瘤组织中Bcl-2、Survivin、PCNA、SDF-1、CXCR4、MMP2、MMP7、MMP9、N-cadherin、Vimentin、Snail的蛋白表达量与MLCK的蛋白表达量呈正相关,与SULT2A1的蛋白表达量呈负相关,Bax、Fas、FasL、Rb、PTEN、E-cadherin的蛋白表达量与MLCK的蛋白表达量呈负相关,与SULT2A1的蛋白表达量呈正相关.结论 子宫肌瘤组织中MLCK的高表达以及SULT2A1低表达会促进细胞的增殖、侵袭及上皮间质转化.
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不同刺激量针刺关元穴对寒凝类痛经模型大鼠的影响
目的：观察不同的针刺刺激量施于关元穴对寒凝类痛经模型大鼠子宫组织中收缩素受体（ OTR）及肌球蛋白轻链激酶（ MLCK）含量的影响。方法将处于动情间期3月龄的SD雌性大鼠32只，随机分为盐水组、寒凝类痛经模型组24只，造模成功后将寒凝类痛经模型组又分为模型组、刺激量A组和刺激量B组，每组8只。除盐水组外，模型组、刺激量A组和刺激量B组均采用全身冷冻法结合苯甲酸雌二醇注射法造模。盐水组和模型组不予针刺，刺激量A组予以粗针、深刺、行手法；刺激量B组予以细针、浅刺、不施手法。采用荧光定量PCR方法检测大鼠子宫组织中缩宫素受体（ OTR）的含量。采用ELISA（酶联免疫法）测量大鼠子宫组织中MLCK的含量。结果与盐水组比较，模型组的子宫收缩波个数、波峰峰值、活动度及MLCK水平均升高（ P﹤0.01）；与模型组比较，刺激量A组的子宫收缩波个数明显减少（ P﹤0.05）、MLCK含量明显降低（ P﹤0.01），刺激量B组的OTR mRNA相对表达量降低（ P﹤0.05）；与刺激量A组比较，刺激量B组收缩波个数增多（ P﹤0.05）、OTR mRNA相对表达量降低（ P﹤0.01）。结论不同刺激量针刺关元穴对寒凝类痛经模型大鼠的效应有所不同，粗针、深刺、行手法的效应较强于细针、浅刺、不行手法的针刺效应，提示针刺的刺激量也是决定针刺疗效的因素之一。
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用加味四君子汤治疗脾虚型功能性消化不良的效果探讨
目的：探讨用加味四君子汤治疗脾虚型功能性消化不良（FD）的临床效果。方法：对2013年1月～2015年1月期间我院收治的70例脾虚型FD患者的临床资料进行回顾性研究。我们将这70例患者随机分为观察组和对照组，每组各有35例患者。这些患者入院后，我们对其均进行了基础治疗。在此基础上，为对照组患者使用西药进行常规治疗，为观察组患者使用加味四君子汤进行治疗。治疗结束后，比较两组患者的治疗效果。结果：在进行治疗前，两组患者的症状积分相比差异不具有显著性（P＞0.05）。两组患者胃窦及空肠内平滑肌细胞MLCK的水平相比差异均不具有显著性（P＞0.05）。进行治疗后，两组患者的症状积分均有所降低，且观察组患者的症状积分明显低于对照组患者，二者相比差异具有显著性（P＜0.05）。观察组患者胃窦、空肠内平滑肌细胞MLCK的水平均明显高于对照组患者，二者相比差异具有显著性（P＜0.05）。观察组患者治疗的总有效率明显高于对照组患者，二者相比差异具有显著性（P＜0.05）。结论：用加味四君子汤治疗脾虚型FD的效果显著。此治疗方法值得在临床上推广应用。
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肌球蛋白轻链激酶CaM结合位点突变体对肌球蛋白ATP酶活性的影响
目的:探讨肌球蛋白轻链激酶(MLCK)钙调蛋白(CaM)结合位点突变体对肌球蛋白ATP酶活性的影响.方法:构建牛胃重组全长野生型MLCK CaM结合位点突变型蛋白(△CaM/MLCK);孔雀绿方法检测△CaM/MLCK对肌球蛋白的Mg2+-ATP酶活性的影响.结果:在无Ca2+/CaM存在时,随着△△CaM/MLCK浓度的增加,非磷酸化肌球蛋白的Mg2+-ATP酶活性明显增加;而磷酸化肌球蛋白的Mg2+-ATP酶活性明显降低.结论:△CaM/MLCK对肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性的影响表明MLCK具有非激酶活性.
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ML-7对酒精致肠黏膜屏障功能障碍的作用
目的 探讨MLCK特异性抑制剂ML-7对乙醇诱导的肠上皮细胞通透性的作用.方法 应用ML-7预处理Caco-2细胞后,测定跨上皮细胞电阻值(TEER)及荧光黄透过率,分析肠上皮细胞屏障的通透性的变化.应用Western blotting检测紧密连接相关蛋白(Occludin和ZO-1)的表达.结果 ML-7显著抑制乙醇诱导的肠上皮细胞屏障TEER值降低、荧光黄透过率升高、Occludin(S/IS)比值增加及ZO-1表达减少.结论 MLCK参与乙醇诱导肠上皮细胞屏障通透性增加的过程,揭示了乙醇引起肠上皮细胞屏障对大分子的通透性增加的部分机制.
