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法舒地尔对肝星状细胞黏附、迁移及胞浆游离钙的影响及机制研究
目的 观察法舒地尔(fasudil)通过Rho/Rho激酶(ROCK)信号转导通路对肝星状细胞(HSC)黏附、迁移以及胞浆游离钙([Ca2+]i)的影响.方法 将培养的HSC分为5组:对照组;fasudil 12.5 μmol/L组;fasudil 25 μmol/L组;fasudil 50 μmol/L 组;fasudil 100 μmol/L 组.采用甲苯胺兰染色法测定细胞黏附率,Boyden Chamber小室测定HSC跨膜迁移数量,用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检验细胞[Ca2+]i,Western印迹检测HSC磷酸化肌球蛋白轻链[phosphorylated myosin light chain, p-MLC(Thr18/Ser19)]和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 Fasudil对HSC的黏附、迁移均具有抑制作用,随着浓度增加,抑制作用加强;fasudil与HSC共同培养后,HSC内[Ca2+]i无明显变化;fasudil抑制HSC的α-SMA表达,并且对Rho/ROCK信号转导通路关键信号分子p-MLC(Thr18/Ser19)的蛋白表达有抑制作用.结论 Fasudil通过抑制Rho/ROCK信号通路对细胞骨架的调节作用抑制HSC的黏附、迁移.
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苦参碱对人结肠癌SW620细胞增殖及RhoA基因表达的影响
目的：研究苦参碱对人结肠癌SW620细胞增殖及RhoA基因表达的影响。方法利用Cell Counting Kit-8检测不同浓度苦参碱对人结肠癌SW620细胞的增殖抑制作用,利用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT-PCR检测SW620细胞内RhoA mRNA表达的水平。结果苦参碱能明显抑制SW620细胞的增殖,呈现剂量和时间依赖性关系,随着浓度增加能使SW620细胞的凋亡率增加,并且使SW620细胞内RhoA mRNA表达下降。结论苦参碱能显著抑制人结肠癌SW620细胞的增殖,其作用机制可能与诱导细胞凋亡、下调RhoA mRNA的表达有关。
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胃肠道间质瘤中RhoA的表达及其临床意义
目的 探讨胃肠道间质瘤中RhoA的表达及其在胃肠道间质瘤(GIST)发生及发展中的作用.方法 应用免疫组化方法检测52例G IST标本中RhoA的蛋白水平表达.结果 RhoA蛋白在GIST组织中呈现高表达,RhoA蛋白变化与NIH分级、肿瘤侵袭转移及黏膜受侵密切相关(P＜0.05).结论 GIST中RhoA蛋白呈现高表达,并且可能在G IST发生发展中起重要作用.
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DLC1与RhoA表达影响乳腺癌细胞转移能力的初探
目的 检测在不同转移能力乳腺癌细胞株中DLC1、RhoA的表达,探讨DLC1、RhoA对乳腺癌细胞株转移能力的影响.方法 Transwell小室实验比较乳腺癌MCF-7细胞及乳腺癌MDA-MB-231细胞的转移能力,免疫细胞化学法及Western Blot检测DLC1与RhoA在两细胞株中的表达.结果 Transwell小室实验示乳腺癌MCF-7细胞的迁移、侵袭能力低于乳腺癌MDA-MB-231细胞(P均＜0.05),免疫细胞化学法和Western Blot检测DLC1在乳腺癌MDA-MB-231细胞的表达均低于乳腺癌MCF-7细胞(P均＜0.05),而RhoA在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达均高于乳腺癌MCF-7细胞(P均＜0.05).结论 DLC1能抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移,RhoA可促进乳腺癌细胞的侵袭和转移,乳腺癌细胞侵袭和转移能力可能与DLC1介导的RhoA-ROCK信号通路有一定相关性.
关键词： DLC1 RhoA RhoA-ROCK通路 乳腺癌细胞 转移 -
单增李斯特菌感染抑制HepG2细胞RhoA表达并促进其凋亡
目的 探讨单增李斯特菌(Lm)调控HepG2细胞的凋亡能力以及对Rho家族RhoA蛋白表达的影响.方法 常规方法培养HepG2细胞,分别以感染复数(MOI)=10和MOI=100接种Lm菌EGD株,共培养lh和20 h后收集培养物.异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率,反转录PCR检测HepG2细胞RhoA和caspase 3编码基因表达,分光光度法检测HepG2细胞活化的caspase 3水平,Western blot法检测HepG2细胞RhoA蛋白表达.结果 Lm的侵袭可促进HepG2细胞凋亡,下调HepG2细胞RhoA编码基因和蛋白表达,并上调caspase 3编码基因表达.结论 Lm感染促进宿主细胞凋亡,抑制宿主细胞RhoA表达.
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腺病毒介导的ING4基因抑制人脑胶质瘤细胞增殖迁移的机制研究
目的:观察ING4对人脑胶质瘤细胞株U251增殖及迁移的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:以Ad-INC4及腺病毒空载体转染U251细胞,RT-PCR法检测ING4基因的表达水平,Western blot法检测目的蛋白的表达.用MTT试验检测ING4对于U251细胞增殖的影响,通过Boyden Chamber试验检测其对U251细胞侵袭能力的影响.并用免疫印迹方法检测NGF、TrkA的表达变化,通过pull-down试验检测活性RhoA表达.结果:U251细胞感染Ad-ING4 48 h后,RT-PCR结果显示ING4在U251中过表达,且U251细胞的增殖及迁移能力受到明显抑制.免疫印迹方法显示感染AdING4的U251细胞中TrkA和NGF的表达降低,pull-down试验结果显示活性RhoA表达降低.结论:Ad-ING4可以抑制胶质瘤细胞株U251的增殖和迁移,这一作用可能是通过抑制NGF、TrkA和活性RhoA的表达实现的.
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辛伐他汀抑制RhoA蛋白表达、Rho GTPase 活性表达逆转兔心室重构
目的:在兔前后负荷增加心力衰竭模型,观察辛伐他订对心肌肥厚、心功能的影响,探讨辛伐他订抑制心肌肥厚、改善心功能的机制.方法:24只新西兰白兔分为4组,一组假手术组,为健康对照.2、3、4组通过破坏主动脉瓣和缩窄腹主动脉,增加左心室前、后负荷,建立慢性心力衰竭模型;2组:心力衰竭对照组;3组:心力衰竭早干预组,术后每天给与辛伐他汀5 mg/kg灌胃,观察8周;4组:心力衰竭晚干预组:手术4周后每天给与辛伐他汀5 mg/kg灌胃,观察4周.各组术后及观察结束时行超声心动图检查;Western blot分析心肌细白膜RhoA蛋白表达,[γ-32P]GTP结合分析检测Rho GTPase活性.结果:早干预组及晚干预组室间隔厚度(IVST)、左心室舒张期内径(LVIDd)、左心室后壁厚度(LVPwd)、左心室收缩期内径(LVIDs)、心脏质量(HW)、左心室质量(LVW)、心脏/体质量比(HW/BW radio)、显著低于心力衰竭对照组,射血分数(EF)、左室长轴缩短率(FS)显著高于心衰对照组.早干预组左心室/体质量比(LVW/BW radio)显著低于心力衰竭对照组.心力衰竭组心肌细胞膜RhoA蛋白表达、Rho GTPase活性明显高于健康对照组,辛伐他汀早干预组及晚干预组心肌细胞膜RhoA蛋白表达及Rho GTPase活性显著低于心力衰竭对照组.结论:辛伐他订通过抑制RhoA蛋白由胞浆转至新胞膜、抑制Rho GTPase活性而抑制心肌肥厚,改善心功能.
关键词： 辛伐他汀 心肌肥厚 RhoA Rho GTPases 心力衰竭 -
乙酰水杨酸在UVB诱导黑素细胞树突形态相关分子Rac1和RhoA表达中的作用
目的:探讨乙酰水杨酸(acetylsalicylic acid ASA)在UVB诱导黑素细胞树突形态相关分子Rac1和RhoA表达中的作用.方法:培养正常人表皮黑素细胞系PIG1细胞,将细胞以一定密度接种于平皿中,并随机分为三组,对照组、100mJ UVB照射组及UVB照射后ASA处理组.ASA处理24h后采用RT-PCR 检测Rac1和RhoA mRNA表达的变化及Western blot检测蛋白表达的变化.结果:PIG1细胞经100mJ UVB照射后与对照组相比,促进树突形成的Rac1表达较对照组明显增高,而抑制树突形成的RhoA表达下调;ASA处理可反转UVB照射对Rac1和RhoA的作用,Rac1表达较UVB照射组明显降低,而RhoA表达增高.结论:一定剂量UVB照射后,黑素细胞Rac1表达增高,RhoA表达下调;ASA可以抑制一定剂量UVB照射诱导的黑素细胞树突形态相关分子的改变.
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RhoA基因沉默抑制卵巢癌腹腔移植瘤恶性生物学行为的研究
目的:研究慢病毒介导RhoA基因沉默对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤生长、侵袭及转移等恶性生物学行为的影响.方法:21只裸鼠随机分为HO8910-RhoA-shRNA组、HO8910-RhoA-NC组和HO8910组,每组7只.细胞接种法建立人卵巢癌腹腔移植瘤模型,每2天测量腹围.4周后解剖裸鼠,大体观察,测定腹水量,统计肿瘤播散器官数及瘤结节数.称量瘤体重量,并计算抑瘤率.镜下观察,应用HE染色分析移植瘤病理形态学特点.实时荧光定量PCR和Western blot检测移植瘤RhoA mRNA和蛋白表达情况.TUNEL技术检测移植瘤凋亡指数(apoptotic index,AI).结果:与HO8910-RhoA-NC组和HO8910组比较,HO8910-RhoA-shRNA组裸鼠腹围增长明显滞后(P＜0.05),腹水量明显减少(P=0.01),肿瘤播散器官数、瘤结节数及瘤体重量均明显减少(P均＜0.001),抑瘤率达70.62％.RhoA基因mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P均＜0.001).凋亡指数AI明显升高(P ＜0.001).结论:慢病毒靶向沉默RhoA基因能显著抑制人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的恶性生物学行为.
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GDNF剪接体α-pro-GDNF在大鼠C6胶质瘤细胞中的表达及其意义
目的:探讨大鼠C6胶质瘤细胞中GDNF选择性剪接体的表达情况及意义.方法:通过检测C6胶质瘤细胞中GDNF基因△78位点剪接体α-pro-GDNF mRNA和β-pro-GDNF mRNA及其受体蛋白GFRα1、GFRα2、Ret和NCAM表达,结合介导肿瘤迁移相关蛋白RhoA、Cdc42、Rac1的表达情况,分析其相关关系.结果:(1)C6胶质瘤细胞中,可以检测到α-pro-GDNF和β-pro-GDNF的mRNA表达,且α-pro-GDNF mRNA表达水平比β-pro-GDNF高;与星形胶质细胞相比,α-pro-GDNF mRNA表达水平的增高趋势较β-pro-GDNF明显;(2)C6胶质瘤细胞中RhoA mRNA表达水平与α-pro-GDNF mRNA表达水平成显著正相关(R2=0.699,P＜0.05),Cdc 42 mRNA表达水平与α-pro-GDNF mRNA表达水平呈显著正相关(R2=0.803,P＜0.05),与β-pro-GDNF mRNA表达相关性不显著.结论:C6胶质瘤中α-pro-GDNF具有优先表达,可能与胶质瘤细胞的迁移具有相关性.
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急性高眼压大鼠视网膜RhoA的分布及表达
目的:探讨急性高眼压大鼠视网膜RhoA的分布及表达变化.方法:将56只SD大鼠随机分成正常对照组、急性高眼压后1,3,7d共4组,用免疫组化和半定量RT-PCR方法检测大鼠视网膜组织中的RhoA的分布及表达情况.结果:正常及急性高眼压后1d,RhoA主要分布于视网膜神经纤维层及神经节细胞层;3d分布于神经节细胞层及内丛状层;7d分布于神经节细胞层、内丛状层、内核层及外丛状层.半定量RT-PCR提示:在正常大鼠视网膜组织中,RhoA mRNA仅有微量表达,急性高眼压后1,3,7d,RhoA表达均显著高于正常组(P<0.05),7d组表达量高.结论:大鼠急性高眼压损伤后,视网膜RhoA蛋白的分布及表达显著增加,其在介导抑制性信号阻断轴突再生的抑制过程中发挥着重要作用.
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胃癌组织RhoA蛋白表达的意义
1 材料和方法1.1 材料 2006-03/2008-01临床及病理确诊胃癌患者137(男93,女44)例,年龄28～71(平均46.6)岁;均未接受化疗及放疗.TNM Ⅰ期49例,Ⅱ期37例,Ⅲ期28例,Ⅳ期23例;有淋巴结转移49例,无淋巴结转移88例.
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辛伐他汀在弥漫性轴索损伤后神经保护中的作用及其机制
目的 探索辛伐他汀预处理在弥漫性轴索损伤(DAI)后神经保护中的作用,并初步阐明可能的机制.方法 采用大鼠头颅瞬间旋转损伤装置制备大鼠DAI模型,模型制作前随机给予白开水或辛伐他汀[60 mg/(kg·d)]灌胃1周,DAI后24 h用改良神经功能缺损程度评分(mNSS)评估神经功能状态,处死并取脑,脑组织切片行HE染色、Mallory磷钨酸苏木素染色、淀粉样蛋白前体(APP)免疫组化染色及TUNEL染色,另外大鼠用于提取脑组织蛋白行RhoA活性检测.结果 DAI后大鼠都出现明显神经功能缺失,组织病理学可见神经元死亡,轴突断裂.辛伐他汀预处理后神经功能有明显改善,APP分数明显降低,TUNEL染色强度也有降低.RhoA活性检测结果显示DAI后RhoA活性升高,但此效应可被辛伐他汀抑制.相关性分析显示RhoA活性与APP分数及TUNEL结果都有显著相关性.实验前后大鼠的生理指标和血液生化指标无明显差异.结论 辛伐他汀可改善DAI后神经功能状态,且此作用与抑制RhoA活性有关.
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RhoA与胃癌关系的研究进展
研究发现部分胃癌组织中有小G蛋白RAS超家族成员A(RhoA)基因突变和RhoA蛋白的过表达,且RhoA在胃癌中的阳性表达与突变主要与胃癌的组织学类型相关.本文将RhoA在胃癌中浸润与转移、突变、诊疗与预后等方面进行综述,有可能为胃癌的早期诊断、临床诊疗和预后提供新的思路.
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ezrin蛋白在青海撒拉族和汉族胃癌中的表达及其生物学功能研究
目的 对ezrin蛋白在青海撒拉族和汉族胃癌中的表达及其生物学功能行相关研究.方法 用免疫组化法检测ezrin蛋白在胃癌组织和正常胃粘膜组织中的表达;MTT法检测胃癌细胞增殖;双荧光素酶及Western blot蛋白印迹法检测酶活性和蛋白表达情况.结果 ezrin蛋白在青海撒拉族和汉族胃癌组织中表达比正常胃黏膜组织高(P＜0.05),且均与胃癌分化程度、淋巴结转移有关(P＜0.05),而和年龄、性别无关(P＞0.05).ezrin蛋白对胃癌细胞增殖具有一定抑制能力,同时可以增加由RhoA(Ac)激活型诱导的荧光酶素.结论 ezrin蛋白表达水平与青海撒拉族和汉族胃癌易感性相关,且参与调节由RhoA诱导的细胞内信号途径,从而调节细胞极化、细胞骨架重组等功能.
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RhoA基因沉默对肝癌HepG2细胞增殖和迁移能力的影响
目的 构建RhoA-siRNA表达载体,研究其对肝癌HepG2细胞肿瘤生物学行为的影响.方法 利用pGenesil-1 质粒构建RhoA-siRNA表达载体,以脂质体法转染至肝癌HepG2细胞中建立稳定细胞系,并分为3组.转染 pGenesil-1-RhoA-siRNA 载体者为HepG2/RhoA-siRNA组,转染随机对照载体者为HepG2/control组,未转染的肝癌HepG2细胞作为HepG2组.Western blot检测RhoA-siRNA对其蛋白表达的抑制情况.分别采用MTT法、细胞划痕损伤和平板克隆形成实验检测转染细胞的增殖、迁移和生长潜能,流式细胞仪检测细胞周期变化.采用单凶素方差分析、x2检验比较各组差异.结果 3组细胞蛋白表达水平比较,HepG2/RhoA-siRNA组RhoA蛋白的表达明显下调(F=178.19,P<0.05).HepG2/control组和HepG2组细胞划痕损伤在48 h内愈合,而HepG2/RhoA-siRNA组则不能愈合.HepG2/RhoA-siRNA组克隆形成率低于HepG2组和HepG2/control组,分别为39%±3%、67%±5%、70%±6%,其差异有统计学意义(χ2=33.34,38.69,P<0.05).RhoA基因沉默显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖,细胞周期中G0/G1期细胞数量增多而S期细胞数量减少(F=70.46,76.57,P<0.05).结论 RhoA-siRNA表达载体能抑制肝癌HepG2细胞的增殖和迁移,可为肝癌的基因治疗提供新的方法.
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阿托伐他汀通过抑制RhoA活性减少非小细胞肺癌的增殖
目的 观察阿托伐他汀(ATV)对非小细胞肺癌(NSCLCs)细胞增殖的影响并探讨其机制.方法 用改进MTT法检测不同浓度ATV、RhoA特异性抑制剂C3转移酶(C3 transferase)、RhoA siRNA处理后A549细胞、H358细胞、Calu3细胞的增殖情况.用RhoA活性测定法观察C3 transferase及不同浓度、不同时间ATV处理后NSCLCs细胞的RhoA活性变化.用Lipofectamine2000转染RhoA siRNA,Western blot检测RhoA的蛋白表达.结果 ATV浓度依赖性(0.1～25.0 μmol/L)地抑制三株NSCLCs细胞增殖(P ＜0.05或P＜0.01).ATV浓度依赖性(0.1～25.0 μmol/L)和时间依赖性(12 ～96 h、48 ～96 h)地抑制不同NSCLCs细胞的RhoA活性(P＜0.05或P＜0.01).C3 transferase能显著降低三株NSCLCs细胞的RhoA活性并抑制NSCLCs细胞增殖(P＜0.01).RhoA siRNA在有效沉默RhoA蛋白表达后,也明显抑制NSCLCs细胞增殖(P＜0.01).但ATV联合应用C3 transferase或RhoA siRNA不能产生协同抑制效应,而与单用C3 transferase或RhoA siRNA的抑制增殖作用相似(P＞0.05).结论 ATV主要通过抑制RhoA活性从而抑制NSCLCs细胞增殖.
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上皮性卵巢癌细胞RhoA蛋白表达水平及意义
目的 探讨小分子G蛋白RhoA在上皮性卵巢癌细胞及正常卵巢细胞中的表达水平及RhoA与上皮性卵巢癌侵袭力的相关性. 方法 上皮性卵巢癌细胞HO8910PM、HO8910及正常卵巢上皮细胞HOSEA中RhoA蛋白表达水平采用免疫细胞化学法检测;Transwell小室体外侵袭试验测定3种细胞的体外侵袭能力. 结果 HO8910PM细胞中RhoA蛋白表达水平高,HO8910次之,HOSEA低(F= 35.73,p<0.01);3种细胞的侵袭能力以HO8910PM强,HO8910较弱,HOSEA无侵袭能力(F=105.80,p<0.01).RhoA蛋白表达水平与细胞侵袭能力呈正相关(r=0.89、0.84,p<0.05).结论 RhoA蛋白的表达与上皮性卵巢癌细胞的体外侵袭能力密切相关.RhoA蛋白可能作为重要因子参与上皮性卵巢癌的侵袭转移过程.
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RhoA和CDC42在急性白血病的表达异常及其意义
目的 检测急性白血病(AL)患者骨髓单个核细胞中RhoA和CDC42蛋白的表达水平,探讨Rho GTP酶相关的骨髓微环境与造血干细胞相互作用异常在白血病细胞恶性行为中的作用.方法 分离并制备54例AL患者及22名正常供者的骨髓单个核细胞的细胞裂解液,应用Western blotting方法,检测其中RhoA和CDC42蛋白的相对表达量,非配对t检验分析RhoA和CDC42蛋白在AL患者和正常供者中表达的差异,Spearman分析患者RhoA和CDC42基因的蛋白表达量与临床资料的相关性.结果 初治AL患者骨髓中RhoA和CDC42的蛋白表达水平显著高于健康人,其中急性髓系白血病M2、M3,及M5亚型患者的RhoA蛋白表达升高尤为显著,M3亚型患者的CDC42蛋白表达量升高为显著.结论 初治AL患者骨髓中RhoA和CDC42表达显著上调,提示Rho GTP酶介导的白血病细胞迁移活跃导致骨髓微环境相互作用异常在白血病发生中起作用.
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RhoA基因在食管癌组织中的表达及其与肿瘤临床病理特征的关系
目的：研究RhoA在食管癌组织中的表达水平，以及探讨RhoA与食管癌临床病理的关系。方法：收集40例食管癌病人手术切除的癌组织、癌旁组织及正常组织，采用实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹法（Western-blot）检测RhoA mRNA和蛋白的表达水平。结果：RhoA mRNA及蛋白在食管正常组织、癌旁组织、癌组织中表达逐步增强，差异具有统计学意义（P＜0.05）。RhoA mRNA和蛋白与食管癌的TNM分期、浸润程度、淋巴结转移有关（P＜0.05），而与性别、年龄、肿瘤类型及分化程度均无显著差异（P＞0.05）。结论：RhoA 在食管癌中过表达，与食管癌的发生发展密切相关，并可能在食管癌的侵袭及转移过程中起重要作用。
