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非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷小鼠肾包膜下患者来源前列腺癌异种移植模型的建立
目的 建立非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(nonobese diabetic/severe combined immunodeficiency,NOD/SCID)小鼠肾包膜下患者来源的前列腺癌异种移植模型,为前列腺癌病因学研究和个体化药物治疗提供理想的工具. 方法 2012年10月至2013年8月选取20只NOD/SCID小鼠.4～6周龄.体质量28～30 g.采用完全随机分组法分为4组,每组5只,分别将4例前列腺癌根治术后新鲜癌组织经显微外科手术移植到NOD/SCID小鼠肾包膜下,每组对应1例前列腺癌组织.移植术后8～12周,在麻醉状态下,解剖小鼠肾脏,观察肿瘤生长情况.切除成瘤肾脏,采用HE染色检查进行组织学诊断.采用兔抗人抗体进行免疫组化染色检测PSA、α-甲酰基辅酶A消旋酶(α-methylacyl CoA racemase,AMACR/P504S)和细胞核中P63蛋白的表达情况. 结果 前列腺癌组织在NOD/SCID小鼠肾包膜下成活率为95％ (19/20).成活的前列腺癌组织为实体状、白色、隆出肾脏表面,伴有血管生成.镜下表现:腺体结构紊乱或被癌细胞破坏,前列腺癌细胞增殖旺盛,细胞核浓染,或呈多形性,可见异常分裂象.免疫组化染色检测示P504S阴性,P63显示腺腔基底膜消失或破坏,PSA强阳性,证实为人源性前列腺癌组织. 结论 采用显微外科技术在NOD/SCID小鼠肾包膜下建立患者来源的前列腺癌异种移植模型具有可靠的成活率.该模型较完整地保存了前列腺癌的异质性,再现了前列腺癌细胞亚群的生物学特性,是可靠的动物模型.
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靶向RhoA基因的shRNA对卵巢上皮性癌裸鼠移植瘤的影响及作用机制
目的 探讨靶向RhoA基因的短发夹状RNA(shRNA)对卵巢上皮性癌(卵巢癌)裸鼠移植瘤的影响及可能的抗肿瘤作用机制.方法 建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,应用随机数字表法将荷瘤裸鼠随机分为3组,即实验组(予携带靶向RhoA基因的shRNA慢病毒液治疗)、阴性对照组(予携带针对随机无关序列的shRNA慢病毒液治疗)、空白对照组(予磷酸盐缓冲液),比较3组裸鼠的移植瘤生长情况,包括移植瘤生长速度、肿瘤体积、肿瘤质量；光镜下观察3组裸鼠移植瘤及主要器官组织的病理形态学特征.采用实时荧光定量PCR技术、免疫组化SP法和蛋白印迹法检测移植瘤组织中RhoA mRNA和蛋白的表达；脱氧核苷酸末端转移酶介导的核苷酸缺口末端标记(TUNEL)法检测3组裸鼠移植瘤细胞的凋亡情况[以凋亡指数(AI)表示].结果 (1)自治疗开始的第9天起,实验组裸鼠移植瘤的生长速度滞后于阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).治疗结束后10d,实验组裸鼠的移植瘤体积为(338±114) mm3,小于阴性对照组和空白对照组[分别为(1190 ±332)和(1101±396) mm3],分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01)；实验组裸鼠平均肿瘤质量为(0.23 ±0.11)g,低于阴性对照组和空白对照组[分别为(0.79 ±0.19)、(0.74±0.17)g],分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).而阴性对照组裸鼠移植瘤的生长速度、移植瘤体积、肿瘤质量分别与空白对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).光镜下观察,实验组肿瘤细胞呈大片坏死区域且核同缩多见,而阴性对照组和空白对照组肿瘤细胞无明显变化.(2)实验组裸鼠移植瘤组织中,RhoA mRNA的表达水平为0.30±0.05,低于阴性对照组的0.95±0.06和空白对照组的1.00±0.11,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01)；RhoA蛋白的表达水平为0.14±0.06,低于阴性对照组的0.78±0.14和空白对照组的0.75 ±0.13,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01)；实验组肿瘤细胞的AI为(20.9±3.4)％,高于阴性对照组的(5.2±2.0)％和空白对照组的(6.0±2.1)％,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).而阴性对照组裸鼠移植瘤组织中RhoA mRNA和蛋白的表达水平及AI分别与空白对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 靶向RhoA基因的shRNA在体内有效下调卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中RhoA基因的表达,抑制卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长,其机制可能与促进细胞凋亡有关.
关键词： 卵巢肿瘤 异种移植模型抗肿瘤试验 ρA GTP结合蛋白质 RNA 小分子干扰 基因疗法 -
Bufalin通过细胞外信号调节激酶／P 90核糖体S6激酶2通路对人食管癌细胞裸鼠移植瘤增殖及凋亡的影响
目的探讨bufalin通过细胞外信号调节激酶（ ERK）／P90核糖体S6激酶2（ RSK2）通路对裸鼠移植瘤增殖及凋亡的影响。方法建立裸鼠食管癌细胞移植瘤模型，并分为模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin 高剂量组、PD98059组和联合用药组，观察bufalin对裸鼠食管癌移植瘤的影响，显微镜下观察各组移植瘤的组织学表现。采用原位末端转移酶标记技术（ TUNEL）检测各组移植瘤的凋亡指数，采用实时定量PCR法检测各组移植瘤组织中ERK、RSK2 mRNA的表达，采用Western blot和免疫组化法检测移植瘤组织中ERK、RSK2、糖原合成激酶3β（ GSK3β）、Bad 及其磷酸化水平。结果模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的裸鼠肿瘤体积分别为（1．758±0．181）cm3、（1．680±0．150）cm3、（1．285±0．134）cm3、（0．873±0．095）cm3、（0．815±0．108）cm3和（0．530±0．104）cm3。 HE染色显示，各组移植瘤组织均有不同程度的坏死，以联合用药组为明显。 TUNEL法显示，模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的凋亡指数分别为（6．0±0．6）％、（11．0±0．7）％、（19．1±0．9）％、（25．1±1．4）％、（20．0±1．2）％和（17．1±0．7）％，以bufalin高剂量组凋亡指数高。实时定量PCR检测显示，模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的ERK mRNA的ΔCt值分别为0．270±0．084、0．293±0．081、0．596±0．224、0．857±0．183、0．868±0．187和1．313±0．282；RSK2 mRNA的ΔCt值分别为0．340±0．062、0．337±0．071、0．642±0．226、0．915±0．170、0．923±0．176和1．413±0．269，ERK和RSK2 mRNA表达均呈降低趋势。 Western blot和免疫组化检测显示，各组ERK、RSK2、Bad蛋白水平的差异均无统计学意义（均P＞0．05）；模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的 p?ERK蛋白相对表达量分别为0．721±0．094、0．695±0．095、0．555±0．080、0．388±0．052、0．341±0．060和0．235±0．056，免疫反应评分中位数分别为8、8、6、4、5和3分。模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的p?RSK2蛋白相对表达量分别为0．613±0．085、0．612±0．084、0．427±0．089、0．305±0．056、0．258±0．051和0．158±0．058，免疫反应评分中位数分别为8、8、5、3、3和1分。模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的GSK3β蛋白相对表达量逐渐升高，p?GSK3β和p?Bad蛋白相对表达量均呈降低趋势，bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组与模型组比较，差异均有统计学意义（均P＜0．05）。结论 bufalin 对裸鼠食管癌移植瘤有明显的抑制作用。 bufalin可通过抑制ERK、RSK2的磷酸化水平抑制移植瘤的生长，通过抑制GSK3β的失活而抑制肿瘤的增殖，通过下调p?Bad的表达而发挥促凋亡作用。
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视网膜母细胞瘤动物模型的研究进展
视网膜母细胞瘤(RB)动物模型研究的进展加快了对RB生物学特性及其治疗方案研究的步伐.目前主要有转基因模型和异种移植瘤模型两大类.RB转基因模型经历了从LH-β-Tag模型到选择性基因敲除模型的发展过程.RB异种移植瘤模型包括眼内移植瘤模型和皮下移植瘤模型.转基因模型和异种移植瘤模型各有其优缺点,二者的结合为进一步研究RB的发生发展机制以及探索更有效的诊断治疗方案奠定了基础.本文就RB动物模型的研究进展及其在评价治疗方案中的应用进行综述.
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黏着斑激酶表达下调对人结肠癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用
结论 FAK shRNA抑制FAK表达能抑制裸鼠移植瘤的生长,增强瘤体对5-FU的敏感性,有效逆转其多细胞耐药.FAK介导结肠癌多细胞耐药的机制可能与FAK-Akt-NF-κB信号通路的激活有关.
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氯化两面针碱体外和体内的抗肿瘤作用
目的 观察氯化两面针碱(NC)的抗肿瘤作用.方法 采用MTT法观察NC体外对肿瘤细胞存活的影响.移植性S180肉瘤模型小鼠,ip给予NC,每天1次,共10 d,测瘤重,计算抑瘤率,并在电镜下观察移植瘤细胞的超微结构.腹水型H22肝癌模型小鼠,sc给予NC,每天1次,共10 d,观察小鼠的存活时间,计算生命延长率.结果 体外给予NC 0.625, 1.25, 2.5, 5.0和10.0 mg·L-1可浓度依赖性地降低人鼻咽癌细胞CNE1、人肺癌细胞SPC-A-1和人乳腺癌细胞MDA-MB-231等9种肿瘤细胞的存活率,作用48 h平均IC50为(3.33±0.28)mg·L-1.体内给予NC 2.5, 5.0和10.0 mg·kg-1对小鼠S180肉瘤的抑瘤率分别为 1.95%, 27.3%和42.9%,对腹水型H22肝癌小鼠的生命延长率分别为35.7%, 71.4%和85.7%.电镜下可见NC 10.0 mg·kg-1组S180移植瘤细胞核染色质浓缩并边缘化,核碎裂,胞浆空泡化明显.结论 NC体内外应用均具有明显的抗肿瘤作用.
关键词： 氯化两面针碱 抗肿瘤药 异种移植模型抗肿瘤试验 -
建立脑肿瘤裸小鼠原位移植模型的方法探讨
目的 探讨建立脑肿瘤裸小鼠原位移植模型的方法.方法 于脑立体定向仪辅助定位下,分别将经体外培养的脑肿瘤干细胞球(SU-1和SU-2)和人多形性胶质母细胞瘤细胞系单细胞悬液缓慢注射至裸小鼠右侧尾状核;徒手将SHG44细胞皮下移植瘤组织块、人多形性胶质母细胞瘤体外细胞系移植成功获得的颅内肿瘤组织块和肺癌脑转移瘤组织块接种于裸小鼠右侧尾状核,HE染色检测不同来源肿瘤细胞致瘤率.结果 细胞悬液注射法致瘤率为100%(45/45).肿瘤组织块直接移植法致瘤率分别为:SHG44细胞皮下移植瘤为93.33%(14/15),人多形性胶质母细胞瘤体外细胞系移植瘤为98.46%(128/130),肺癌脑转移瘤为72.31%(47/65);裸小鼠死亡率为1.41%(3/213).形成的可移植性肿瘤分为侵袭性明显和不明显两种类型,与亲本肿瘤特征一致.结论 两种移植方法均可成功制备包括脑肿瘤干细胞在内的人胶质瘤裸小鼠原位移植模型,反映了亲本肿瘤基本的致瘤性和侵袭性特征.细胞悬液注射法操作时间较长,但为体外培养的单个细胞和细胞球移植所必须;肿瘤组织块直接移植法可用于临床肿瘤、可移植性肿瘤的直接接种,操作时间短、效率高,适用于批量实验.
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类器官在前列腺癌相关研究中的作用探索
类器官作为新一代临床前肿瘤模型，其建立对于揭示肿瘤生物学特性及探索对肿瘤患者有效的治疗方法具有重要意义。前列腺来源的类器官临床前肿瘤模型更是在前列腺肿瘤生物学特性研究和抗肿瘤药物筛选中发挥了巨大作用。当前普遍且成熟用于构建临床前前列腺肿瘤模型的方式有2种：一种是前列腺肿瘤细胞株培养，另一种是人源性前列腺肿瘤组织异种移植。这2种模型在前列腺癌基础研究与抗前列腺肿瘤药物筛选方面具有很高价值，但仍存在诸多无法回避的问题与劣势。新研究构建的第三类临床前肿瘤模型——类器官或可解决当前2种模型所存在的弊端。本文就类器官在前列腺癌相关研究中作用的研究进展作一综述。
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Toonaciliatin A在体内外抑制胃癌MKN45细胞增殖并诱导细胞凋亡
目的:探讨中药单体Toonaciliatin A体内外对人胃癌MKN45细胞增殖和凋亡的影响.方法:体外培养MKN45细胞,采用不同质量浓度的Toonaciliatin A(15、30、60μg/mL)分别处理48 h,MTT法检测细胞增殖活性;Annexin V-FITC/PI法染色后流式细胞仪检测细胞凋亡率.建立人胃癌MKN45细胞的BALB/c裸鼠移植瘤模型,采用不同剂量的Toonaciliatin A(10、20、40 mg/kg)给药21 d,检测移植瘤质量及裸鼠体质量;免疫组织化学法检测各组移植瘤组织中caspase-3蛋白的表达水平.结果:Toonaciliatin A体外可有效抑制MKN45细胞增殖,并诱导MKN45细胞凋亡,药物处理组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,Toonaciliatin A给药组移植瘤质量明显降低(P<0.05).Toonaciliatin A体内可诱导移植瘤组织中caspase-3蛋白表达增加(P<0.05).结论:Toonaciliatin A体内外能有效抑制胃癌MKN45细胞增殖并诱导细胞凋亡.
关键词： 胃肿瘤 抗肿瘤药 植物 柠檬苦素类 异种移植模型抗肿瘤试验 ToonaciliatinA -
毒蕈碱型胆碱受体拮抗剂抑制小细胞肺癌生长及血管生成的体内研究
目的:探讨毒蕈碱型胆碱受体3(muscarinic cholinergic receptor 3,M3R)拮抗剂4-二苯乙酰氧基-N-甲基-哌啶甲碘化物(4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine methiodide,4-DAMP)对裸鼠体内小细胞肺癌生长和血管生成的影响.方法:RT-PCR及蛋白质印迹法检测人小细胞肺癌细胞株SBC3中M3RmRNA及蛋白的表达.建立人小细胞肺癌SBC3细胞的裸鼠移植瘤模型,随机分为4组,分别腹腔注射0.9％氯化钠溶液(对照组)和不同剂量(0.5、1和2 mg/kg)的4-DAMP,每天给药1次,连续15 d.每2d测量1次肿瘤体积;给药结束后处死裸鼠,测量肿瘤质量并计算抑瘤率.实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测各组肿瘤组织中M3R和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) mRNA和蛋白的表达水平.免疫组织化学法检测VEGF表达和微血管密度(microvessel density,MVD).结果:人小细胞肺癌SBC3细胞表达M3R mRNA及其蛋白.成功建立人SBC3细胞的裸鼠移植瘤模型,并用不同剂量(0.5～2 mg/kg)的4-DAMP给药后,发现裸鼠体内移植瘤的体积均比对照组明显减小(P值均＜ 0.05),剥离肿瘤的质量也明显减少(P值均＜ 0.01),0.5、1和2 mg/kg 4-DAMP给药组的抑瘤率分别为15.82％、33.50％和55.06％.0.5～2 mg/kg 4-DAMP给药组肿瘤组织中M3R和VEGF的mRNA及蛋白表达水平均明显下调(P值均＜ 0.05),MVD也明显下调(P值均＜0.05).结论:M3R拮抗剂4-DAMP可以抑制裸鼠体内小细胞肺癌的生长和新生血管生成.
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黄芩苷诱导人结肠癌细胞周期阻滞和凋亡的体内外研究
目的:探讨黄芩苷在体内外对结肠癌细胞凋亡和细胞周期的影响,以及其可能的分子作用机制.方法:不同质量浓度(0、50、100、200、400和800 μg/mL)的黄芩苷分别作用人正常结直肠黏膜FHC细胞和人结肠癌HCT116细胞48 h后,倒置显微镜下观察细胞形态变化,并采用MTT法检测各组细胞活力变化.FCM法检测黄芩苷干预后结肠癌HCT116细胞凋亡率和细胞周期分布的变化;同时,采用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(poly ADP-ribose polymerase-1,Parp-1)、X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)、核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)、caspase 3、p53、Bcl-2和Bax,以及细胞周期相关蛋白cyclin D1和cyclin B1表达水平的变化.此外,通过构建结直肠癌HCT116细胞的原位移植瘤小鼠模型,观察黄芩苷灌胃治疗后小鼠体质量以及体内肿瘤生长体积的变化,并应用TUNEL法检测黄芩苷对移植瘤小鼠体内肿瘤细胞凋亡的影响.结果:与黄芩苷未处理的对照组相比,50～800 μg/mL黄芩苷对结肠癌HCT116细胞活力有明显的抑制作用(P值均＜0.05).而且黄芩苷对正常结直肠黏膜细胞FHC的半数抑制浓度(half maximal inhibitoryconcentration,IC50)值明显高于HCT116细胞(P＜0.01).200和400 μg/mL黄芩苷处理后,结肠癌HCT116细胞的凋亡率明显升高(P值均＜ 0.01);50和100 μg/mL黄芩苷作用48 h后,Parp-1和caspase 3剪切体蛋白的表达水平比对照组均明显升高(P值均＜ 0.01),而XIAP、NF-κB和Bcl-2蛋白的表达水平均明显降低(P值均＜0.05).100和200 μg/mL黄芩苷处理后,HCT116细胞周期阻滞在G1期(P值均＜ 0.01);50和100 μg/mL黄芩苷作用48 h后,cyclin D1和cyclin B1蛋白的表达水平均明显降低(P值均＜0.01).黄芩苷可以抑制小鼠原位移植瘤的生长(P＜0.01),并促进肿瘤细胞凋亡,但是对小鼠体质量无明显影响(P＞0.05).结论:黄芩苷在体内外均可以明显抑制结肠癌HCT116细胞的生长活性,诱导细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于G1期.
关键词： 结肠肿瘤 黄芩苷 细胞凋亡 细胞周期 异种移植模型抗肿瘤试验 -
微RNA-21表达下调可抑制人结肠癌SW620细胞在裸鼠体内的生长
目的:探讨反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASOs)下调微RNA-21(microRNA-21,miR-21)表达对高侵袭性人结肠癌SW620细胞在裸鼠体内生长的影响.方法:首先建立人结肠癌SW620细胞的裸鼠荷瘤模型,并于肿瘤局部分别注射p-miR-21-ASOs重组质粒或p-Cont对照质粒,然后观察裸鼠体内肿瘤的生长变化.末次注射5d后,处死裸鼠,剥取肿瘤组织,测量各组肿瘤组织的大小和质量.采用HE染色法观察肿瘤组织形态学变化;TUNEL法检测肿瘤局部细胞凋亡情况;免疫组织荧光法检测肿瘤组织中增殖核抗原Ki-67蛋白的表达变化;实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织中miR-21成熟体的表达,以及细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)2、CDK3、CDK4和CDK6的表达变化;蛋白质印迹法检测磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-PKB,又称为p-Akt)和磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinase,p-ERK)的表达水平.结果:与p-Cont对照组相比,p-miR-21-ASOs质粒转染组的肿瘤生长缓慢(P＜0.05),剥离肿瘤的质量明显减少(P＜0.01),肿瘤组织中可见大片坏死区域,而且肿瘤细胞中miR-21成熟体的表达水平明显下调(P＜0.01).miR-21表达下调后,肿瘤组织中Ki-67的表达量明显减少(P＜0.01),而相对凋亡细胞数明显增多(P＜0.05);并且,细胞周期相关分子CDK2、CDK3、CDK4和CDK6的表达均明显下调(P值均＜0.001),Akt和ERK蛋白的磷酸化水平也均明显下调(P值均＜0.05).结论:ASOs下调miR-21表达可显著抑制人高侵袭性结肠癌细胞在裸鼠体内的生长,提示miR-21可作为结肠癌基因治疗的一个潜在新靶标.
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2,3',4,5'-四甲氧基二苯乙烯对子宫内膜癌异种移植瘤生长的抑制作用
目的:探讨2,3',4,5'-四甲氧基二苯乙烯(2,3',4,5'-tetramethoxystilbene,TMS)对子宫内膜癌异种移植瘤生长的抑制作用及其分子机制,并评价其不良反应.方法:建立人子宫内膜癌Ishikawa细胞的裸鼠异种移植瘤模型,随机分为TMS组及对照组:TMS组皮下注射10 mg·kg-1·d-1的TMS,对照组皮下注射等体积的食用橄榄油.用药后测量肿瘤体积和质量,以及裸鼠体质量和各脏器湿重;HE染色法检测裸鼠体内各实质脏器的损伤;免疫组织化学法检测移植瘤组织中细胞色素P4501B1 (cytochrome P4501B1,CYP1B1)、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)及磷酸化ERK (phospho-ERK,p-ERK)蛋白的表达情况.结果:皮下注射TMS后,裸鼠体内子宫内膜癌移植瘤的体积(P＜0.001)和质量(P=0.03)均明显降低,而裸鼠的饮食、行为、精神状态、大小便和体质量(P=0.275)变化不明显.两组血清中白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酐和尿素氮水平均无明显变化(P值均＞ 0.05),而且各组裸鼠体内各脏器组织形态均未发现明显病变.移植瘤组织中CYP1B1、ERK和p-ERK蛋白的表达均为弱阳性.结论:TMS对子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤生长具有明显的抑制作用,但荷瘤动物没有明显的不良反应.
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共载紫杉醇与顺铂的温度敏感性水凝胶对宫颈癌的抗肿瘤作用
目的:制备同时荷载紫杉醇(paclitaxel,PTX)和顺铂(cisplatin,DDP)的水凝胶药物体系PDMP[polyethylene glycol-polycaprolactone-polyethylene plycol (PECE)/DDP+methoxypolyethylene glycols-polycaprolactone (MPEG-PCL)/PTX],探讨其在动物体内对宫颈癌的抗肿瘤作用,以及可能的作用机制.方法:通过固体分散法制备MPEG-PCL/PTX胶束,然后与PECE水凝胶和DDP溶液混合,合成PDMP凝胶药物.采用高效液相色谱法、激光粒径分析仪和流变仪检测PDMP凝胶药物的理化性质.建立宫颈癌HeLa细胞的裸鼠移植瘤模型,随机分为4组:对照组(0.9％氯化钠溶液)、单纯载体组(PECE+MPEG-PCL)、游离药物组(PTX+DDP)和PDMP凝胶药物组;每组12只.通过瘤内注射的方式进行给药后,观察各组荷瘤裸鼠的肿瘤生长情况;并在给药第10天时,每组处死6只裸鼠,取出肿瘤组织,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67的表达水平,并采用FCM法检测肿瘤细胞的周期分布及凋亡情况.继续培养剩余的每组6只荷瘤裸鼠,观察其生存时间.结果:PDMP凝胶药物制备成功.与其他组相比,PDMP凝胶药物能明显抑制裸鼠体内肿瘤的生长(P值均＜ 0.05),延长荷瘤裸鼠的生存时间(P值均＜ 0.05);PDMP凝胶药物作用能明显降低肿瘤组织中Ki-67的阳性表达率(P值均＜ 0.05),引起G1期细胞阻滞(P值均＜0.05),同时提高肿瘤细胞的凋亡率(P值均＜ 0.05).结论:PDMP凝胶药物可能是一种适合宫颈癌原位治疗的有效的用药体系.
关键词： 宫颈肿瘤 顺铂 紫杉醇 水凝胶 异种移植模型抗肿瘤试验 -
慢病毒介导的VCAM-1基因沉默对人舌鳞癌裸鼠移植瘤生长的影响
目的:探讨慢病毒介导的血管细胞黏附分子1 (vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)基因沉默对裸鼠体内人舌鳞癌细胞移植瘤生长的抑制作用.方法:构建人舌鳞癌Tca-8113细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为干扰组、阴性对照组和空白对照组,分别瘤内注射含VCAM-1-shRNA的慢病毒颗粒、含无关序列的慢病毒颗粒或0.9％氯化钠溶液.然后,观察移植瘤的生长情况,绘制移植瘤生长曲线.注射3周后处死裸鼠,称量各组移植瘤质量,并计算抑瘤率.采用HE染色法观察各组移植瘤细胞形态学特征;免疫组织化学法检测移植瘤组织中VCAM-1蛋白的表达水平以及肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD),并分析二者之间的相关性.结果:干扰组裸鼠移植瘤的生长速度明显小于阴性对照组和空白对照组(P值均＜ 0.05),抑瘤率可达50.0％.3组裸鼠移植瘤组织切片均符合鳞状细胞癌的特征,无明显差异.干扰组移植瘤组织中VCAM-1蛋白的相对表达量及MVD值均明显低于阴性对照组和空白对照组(P值均＜0.01).VCAM-1蛋白表达与MVD呈正相关性(r=0.834,P＜0.05).结论:慢病毒介导的VCAM-1-shRNA干扰能通过沉默荷人舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤中VCAM-1基因的表达,抑制移植瘤生长及血管生成,提示VCAM-1有望成为口舌腔鳞癌基因治疗的新靶点.
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血根碱对人胃癌细胞GTL-16移植瘤的抑制作用及其机制探讨
目的:观察血根碱(sanguinarine,SAN)在动物体内的抗肿瘤作用,并初步探讨其可能的机制.方法:将人胃癌GTL-16细胞接种于BALB/c雄性裸鼠皮下,建立荷瘤动物模型;并随机分为3组,每组14只,分别用0.9％氯化钠溶液(作为对照组)、2.5和5.0 mg/kg SAN隔天灌胃7次.实验期间观察小鼠一般情况,测量肿瘤大小;28d后处死小鼠,测量肿瘤体积并称质量;采用HE染色法对肿瘤组织进行病理学观察;蛋白质印迹法测定肿瘤组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达情况.结果:SAN治疗组小鼠的肿瘤生长明显慢于对照组.用药结束时,SAN组的小鼠肿瘤体积和质量均明显小于对照组,且5.0 mg/kg SAN组的肿瘤体积和质量小;3组之间两两比较的差异均有统计学意义(均P＜ 0.01).组织病理学观察发现,SAN用药显著减少了肿瘤细胞堆积和对表皮的浸润;SAN治疗组肿瘤组织中EGFR蛋白表达水平也显著低于对照组(均P＜0.05).结论:SAN可明显抑制胃癌GTL-16细胞移植瘤小鼠体内的肿瘤生长,推测这可能与下调肿瘤组织中EGFR的表达有关.
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下调hnRNP A2/B1基因表达对骨肉瘤MG-63细胞生长的影响及其机制
目的:通过下调核内不均一核糖核蛋白A2/B1 (heterogeneous-nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)的表达,探讨该基因对骨肉瘤MG-63细胞体内外生长的作用及其分子机制.方法:将细胞分为空白对照组(未转染)、阴性对照组(转染阴性对照质粒)和hnRNP A2/B1下调组(转染shRNA-hnRNP A2/B1干扰质粒).质粒转染骨肉瘤MG-63细胞后,观察绿色荧光蛋白的表达,以鉴定转染效果.采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测3组细胞中hnRNP A2/B1、磷酸化的AktThr308(phosphorylated AktThr308,p-AktThr308)、p-AktSer473及Akt下游分子p21、p27、cleaved caspase-3和Bcl-2的表达变化;MTT法和FCM法分别检测各组细胞的增殖活力、周期分布和早期凋亡率.将阴性对照组和hnRNP A2/B1下调组细胞分别接种入同一裸鼠的对称部位皮下组织,观察移植瘤生长情况,并采用免疫组织化学法检测各组移植瘤组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和Ki-67的表达.结果:阴性对照组和hnRNP A2/B1下调组细胞中均有绿色荧光蛋白表达,说明质粒转染成功.与空白对照组和阴性对照组相比,hnRNP A2/B1下调组中hnRNP A2/B1、p-AktThr308、p-AktSer473和Bcl-2表达水平显著降低(P值均＜ 0.05),且p21、p27和cleaved caspase-3表达水平明显升高(P值均＜ 0.05);hnRNP A2/B1下调组细胞活力明显降低(P＜0.05),细胞周期阻滞于G1期(P＜0.01),S期细胞比例降低(P＜0.01),同时细胞的早期凋亡率升高(P＜0.001).动物体内研究证实,hnRNP A2/B1下调组裸鼠移植瘤体积明显小于阴性对照组(P＜0.05),并且hnRNP A2/B1下调组移植瘤组织中PCNA和Ki-67的表达水平明显降低(P值均＜0.05).结论:下调hnRNP A2/B1基因表达能够抑制骨肉瘤细胞的生长,其机制可能涉及Akt信号通路的调控.
关键词： 骨肉瘤 核内不均一核糖核蛋白A-B组 细胞增殖 细胞凋亡 异种移植模型抗肿瘤试验 -
连翘根醇提物对食管癌移植瘤生长的体内抑制作用
目的:探讨连翘(Forsythia suspensa)根醇提物对食管癌细胞在裸鼠体内生长的抑制作用.方法:应用MTT法检测连翘根醇提物对食管癌TE-1、TE-13、Yes-2和Eca-109细胞增殖的抑制作用.构建食管癌TE-13细胞的裸鼠移植瘤模型,分为2组:治疗组每只裸鼠腹腔注射50 mg/kg连翘根醇提物,对照组注射相同体积的0.9％氯化钠溶液.用药后,观察2组裸鼠成瘤情况,并测量肿瘤体积和质量;TUNEL染色法分析裸鼠肿瘤组织的细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达变化;苏木精-伊红染色法分析裸鼠肺和肝组织的形态学变化.结果:连翘根醇提物对几种食管癌细胞均具有明显的生长抑制作用(P＜0.01),且对TE-13细胞的抑制作用呈时间和剂量依赖性(P＜0.01).连翘根醇提物治疗组的肿瘤平均体积和质量均明显低于对照组(P＜0.05).连翘根醇提物治疗组裸鼠肿瘤组织内凋亡细胞的数量较对照组明显增加(P＜0.05).与对照组相比,治疗组裸鼠肿瘤组织中Bcl-2蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05),Bax蛋白表达水平则明显升高(P＜0.05).连翘根醇提物治疗组和对照组裸鼠的肝和肺均无明显的组织形态学改变.结论:连翘根醇提物对裸鼠体内食管癌移植瘤的生长具有抑制作用,该作用可能与诱导食管癌细胞凋亡有关.
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组织因子途径抑制物-2对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成的影响
目的:探讨组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)对人肝癌Hep3B细胞株裸鼠皮下移植瘤生长以及肿瘤血管生成的作用.方法:将TFPI-2稳定表达的Hep3B细胞(Hep3B-TFPI-2组)、转染空载体PCDNA3.1的Hep3B细胞(Hep3B-V组)及未进行转染的Hep3B细胞(Hep3B-P组)分别接种于裸鼠皮下,待皮下成瘤后,每隔3d测量1次肿瘤大小,并绘制出肿瘤体内生长曲线.3周后处死裸鼠,测定肿瘤体积,提取组织中总RNA和蛋白,实时荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR,RFQ-PCR)检测肿瘤组织中TFPI-2和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的mRNA水平;蛋白质印迹法检测肿瘤组织中TFPI-2和VEGF蛋白表达水平;免疫组织化学法检测肿瘤组织中TFPI-2蛋白表达水平和肿瘤微血管密度(micro vessel density,MVD).结果:Hep3B-TFPI-2组终肿瘤体积明显小于Hep3B-V组和Hep3B-P组(P＜0.05).Hep3B-TFPI-2组肿瘤组织的TFPI-2 mRNA表达丰度和蛋白水平明显高于其余2组(P＜0.05);而Hep3B-TFPI-2组VEGF mRNA表达丰度和蛋白水平明显低于其余2组,与2个对照组相比,VEGF蛋白表达抑制率分别为19.8％和23.5％ (P＜0.05).Hep3B-TFPI-2组MVD计数明显低于其余2组(P＜0.05).结论:TFPI-2能抑制人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长和肿瘤血管生成.
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大黄素诱导裸鼠体内白血病K562细胞凋亡过程中PI3K/AKT通路相关分子表达的变化
目的:观察大黄素作用后裸鼠体内白血病K562细胞PI3K/AKT信号通路的分子变化,以探讨大黄素是否依赖PI3K/AKT信号通路参与K562细胞凋亡发生.方法:建立裸鼠K562细胞皮下移植瘤模型,腹腔连续给药12 d后,处死裸鼠,称取瘤体质量,计算抑瘤率.采用HE染色和透射电子显微镜观察肿瘤细胞的凋亡情况.应用RT-PCR法检测肿瘤组织中PI3K、AKT和FoxO3a的mRNA表达水平.蛋白质印迹法检测肿瘤组织中PI3K、AKT和FoxO3a蛋白的表达水平.结果:低、中、高剂量组大黄素作用后肿瘤相对体积(V/V<,0>)分别为8.90_+0.24、5.62±0.17和2.06±0.31,与0.9%氯化钠溶液对照组(V/V<,0>为11.83±0.47)相比,大黄素处理组的肿瘤体积明显缩小,差异具有统计学意义(P<0.01).光学显微镜和电子显微镜观察发现,大黄素能够诱导K562细胞发生明显的凋亡.RT-PCR结果表明,不同剂量的大黄素能够引起PI3K和AKT mRNA的表达下调,而FoxO3a mRNA表达上调,且有剂量依赖性.蛋白质印迹法结果表明,大黄素处理组移植瘤组织中PI3K、AKT蛋白表达水平明显降低,而FoxO3a蛋白水平明显升高.结论:大黄素能够明显抑制人白血病K562细胞裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与其抑制PI3K/AKT信号转导通路有关.
