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肝细胞生长因子激活物抑制因子-1基因对前列腺癌PC-3细胞自噬的影响
目的 观察肝细胞生长因子激活物抑制因子-1(HAI-1)基因过表达诱导前列腺癌PC-3细胞发生自噬性的现象,初步探讨其发生的可能机制.方法 采用重组质粒pcDNA3.1-HAI-1转染PC-3细胞,并设空载体为对照组.转染72 h后提取细胞总RNA和蛋白,以实时定量RT-PCR检测HAI-1、自噬标志物(LC3-B)基因表达的变化,Western印迹方法检测LC3-B蛋白表达水平的变化,透射电子显微镜及细胞免疫荧光测定仪观察细胞超微结构及自噬水平.结果 与对照组相比,LC3-B的表达明显增多(3.42±0.29,P<0.05);透射电子显微镜观察可见,前列腺癌PC-3细胞质内有大量自噬体和自噬溶酶体.结论 HAI-1基因可诱导前列腺癌PC-3细胞发生自噬.
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TFPI-2/KD1的克隆表达及其生物学性质研究
目的 克隆表达人组织因子途径抑制物-2(hTFPI-2)Kunitz结构域1(KD1)基因.方法 提取健康女性正常分娩胎盘中总RNA,采用RT-PCR法合成hTFPI-2全长cDNA后行PCR扩增,以扩增得到的hTFPI-2/KD1基因片段与原核表达载体pET22b进行连接并转化E.coli DH5α,获得重组质粒pET22bhTFPI-2/KD1.将重组质粒pET22b-hTFPI-2/KD1转化至E.coli BL21,获得重组菌株E.coli BL21[pET22b-hTFPI-2/KD1].以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和蛋白质印迹分析,并利用Ni2+-NTA柱进行亲和层析纯化,采用发色底物法和明胶酶谱法分别检测hTFPI-2/KD1抑制胰蛋白酶和基质金属蛋白酶(MMP)的活性.结果 核酸序列测定显示克隆的hTFPI-2/KD1基因序列与理论序列相符.SDS-PAGE和蛋白质印迹分析显示E.coli BL21[pET22b-hTFPI-2/KD1]诱导表达产物相对分子质量与预期相符,经纯化后获得了完整的hTFPI-2/KD1蛋白,发色底物法和明胶酶谱法检测显示其具有抑制胰蛋白酶、MMP-2和MMP-9的活性.结论 通过原核表达系统成功获得高效表达并具有生物活性的hTFPI-2/KD1,为进一步研究其功能奠定了基础.
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有氧运动对肥胖儿童血清脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂及网膜素-1水平的影响
目的:探讨有氧运动对肥胖儿童血清脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂( Vaspin )及网膜素-1(Omentin-1)水平的影响。方法选取45例肥胖儿童作为观察组,对其采取有氧运动减肥治疗,2个月为一疗程。以30例健康体检儿童作为正常对照。酶联免疫法检测患者治疗前后血清Vaspin、Omentin-1水平,并观察治疗前后体重指数(BMI)、腰围(WC)、臀围(HC)和腰臀比(WHR)变化。结果治疗前观察组肥胖儿童体重、BMI、WC、HC、WHR及血清Vaspin、TG、TC、LDL-C水平均显著高于正常组( P<0.05), Omentin-1及HDL-C水平低于正常组( P<0.05);治疗后观察组儿童体重、BMI、WC、HC、WHR及血清Vaspin、TG、TC、LDL-C水平显著降低( P<0.05),Omentin-1及HDL-C水平显著升高( P<0.05)。相关性分析显示肥胖儿童血清Vaspin水平与BMI指数、WC、WHR、TG呈正相关( P<0.05);而Omentin-1与BMI指数、WC、TG呈负相关,与HDL-C呈正相关( P<0.05)。结论肥胖儿童存在血清Vaspin、Omentin-1水平异常;有氧运动可以显著调节二者水平,减轻体重。
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慢性丙型肝炎感染的新疗法:一项来自临床试验证据的系统综述
一、背景
1.目前治疗靶点:虽然聚乙二醇干扰素联合利巴韦林(PEG/RIB)作为标准的丙型肝炎病毒(HCV)治疗已有多年,但AASLD新的指南建议对于HCV 基因型1的患者可加用NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶抑制剂Boceprevir或Telaprevir作为“佳的治疗”。
在宿主基因中IL-28B有不同多态性的患者可有不同的持久病毒学应答(SVR)率。因此,IL-28B rs12979860 CC基因型的患者SVR率是其等位基因为T患者的2倍。然而,在感染基因型2和3的HCV患者中IL-28并不是很重要。
2.新疗法:超过40个用于HCV治疗的新方案正处于临床试验中。目前进行研究的有四个主要领域:(1)基于临床观察研究的药物应用;(2)改善和修饰利巴韦林或干扰素为基础的治疗;(3)修饰宿主应答;(4)直接抗病毒药物( DAA)的开发。 -
AAT在冠心病与非冠心病患者中的比较研究
目的:α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,AAT)是循环中含量颇丰的一种丝氨酸蛋白酶抑制剂。其可通过抑制体内多种蛋白酶的活性调节免疫和炎症反应。冠心病是炎症反应参与的过程。而AAT在其中的作用尚不清楚。本研究以探明AAT水平与冠心病之间的关系为目的。
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四项血清指标联合检测对冠心病危险分层的诊断价值
目的 探讨D-二聚体、分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)、脂联素与内脏脂肪组织源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(VASPIN)联合检测在冠心病临床诊断中的应用.方法 选择老年冠心病患者240例,其中急性心肌梗死(AMI)组80例、不稳定性心绞痛(UAP)组80例、稳定性心绞痛(SAP)组80例.另选取健康体检者80例为对照组.分析4项指标的差异及其与Gensini积分的相关性.结果 4组D-二聚体、SFRP5、脂联素与VASPIN水平及Gensini积分比较,差异有统计学意义(P<0.01).与对照组比较,SAP组、UAP组和AMI组D-二聚体及Gensini积分明显升高,SFRP5、脂联素及VASPIN水平明显降低(P<0.05).SAP组和UAP组D-二聚体及Gensini积分水平显著低于AMI组,SFRP5、脂联素及VASPIN水平明显高于AMI组(P<0.05);SAP组D-二聚体水平及Gensini积分明显低于UAP组,SFRP5、脂联素及VASPIN水平明显高于UAP组(P<0.05).Spearman相关性分析结果显示,SFRP5、脂联素及VASPIN水平与Gensini积分呈明显的负相关(r=-0.662,r=-0.532,r=-0.848,P<0.01),D-二聚体与Gensini积分呈正相关(r=0.526,P=0.003).4项指标联合检测敏感性明显高于各项指标单独检测(P<0.05).结论 4种指标联合检测可为老年冠心痛类型鉴别诊断和疾病严重程度评估的重要依据.
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胃癌及癌旁组织中分泌性白细胞蛋白酶抑制因子SLPI的表达
维持胃黏膜的正常结构依赖于胃黏膜细胞的凋亡和增殖的动态平衡,这一平衡的失调被认为是胃癌发生及发展的重要机制.分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(secretory leukocyte peptidabe inhibitor,SLPI)属于Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂家族,具有调控细胞分化增殖的能力[1].本研究拟通过对胃癌患者组织标本中SLPI表达水平的研究,评价其在胃癌发生、发展中的作用.
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丙型肝炎病毒NS3-4A蛋白酶靶向抗病毒治疗及耐药研究进展
丙型肝炎病毒(HCV)基因组的高度变异性使得HCV感染易呈慢性化,并极大地增加了肝硬化和肝癌的发病风险.效仿HIV蛋白酶抑制剂临床应用中取得的巨大成功,NS34A丝氨酸蛋白酶成为抗HCV感染小分子药物研发的重要靶点.此文围绕HCV NS3-4A蛋白酶抑制剂研发的新进展、抗病毒活性、药代动力学特性、不良反应及抗药性突变进行了综述.
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甲磺酸加贝脂抑制人肝癌HepG2细胞增殖及相关机制
甲磺酸加贝脂(gabexate mesilate,GM)是一种人工合成的丝氨酸蛋白酶抑制剂,近年来有文献报道将GM用于直肠癌、胰腺癌等肿瘤治疗的探索性研究,初步显示GM可能是一种新型的基质金属蛋白酶抑制剂[1-2].我们探索GM在体外对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.
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体外循环心脏手术中应用抑肽酶的副作用
抑肽酶是从牛肺中提取的非特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制内源性凝血系统、纤溶系统,保护血小板的数量和功能,显著地减少术中、术后出血及输血量.抑肽酶自60年代开始用于心血管外科,给药途径和剂量初多不一致,近来倾向于大剂量--麻醉诱导后静脉注入2×106KIU,预充液内加入2×106KIU,5×105KIU/h术中持续静脉滴注;小剂量--用药途径同上,量减半;仅在预充液内加入2×106KIU[1].但人们在应用中逐渐发现它有许多副作用,有些还相当严重,现将其副作用综述如下.
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宫颈鳞状细胞癌发生和演进中Maspin表达及其意义的研究
目的:观察肿瘤转移抑制基因Maspin(mammary-serpin)在宫颈鳞状细胞癌和癌前病变组织中的表达,探讨其在宫颈鳞癌发生、演进中的作用及其意义.方法:运用免疫组织化学Envision二步法检测Maspin在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈鳞癌组织的表达情况,进行统计学分析,并比较与宫颈鳞癌临床病理特征的关系.结果:Maspin在正常宫颈组织、CIN和宫颈鳞癌中阳性表达率分别为100.0%、87.5%、50.0%,表达呈逐级下降,宫颈鳞癌与前两者间差异有统计学意义,P<0.01.正常宫颈组织和CIN以细胞质表达为主,宫颈鳞癌以胞核、胞质表达为主,在部分高级别CIN和微小浸润性宫颈癌表达呈异质性,基底区和浸润灶组织阳性信号减弱或缺失.Maspin的表达与宫颈癌的临床分期,肿瘤浸润深度、淋巴结转移及患者的生存时间呈负相关.结论:Maspin表达的下调可能在宫颈鳞癌的发生和演进过程中起一定作用,是观察宫颈CIN进展的一种潜在的有用标志,并与宫颈鳞癌浸润转移和生存密切相关,有望作为判断宫颈癌预后有价值的生物学指标.
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丝氨酸蛋白酶及其抑制剂研究新进展
该文综述了丝氨酸蛋白酶组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、尿激酶型纤溶酶原激活剂((u-PA)和凝血酶及其同源性抑制剂PAI-1、Neuroserpin和PN-1的表达以及在神经系统疾病中的作用,讨论了t-PA及其抑制剂Neuroserpin在神经系统中的作用,旨在为人类急性脑损伤的治疗提供新的思路.
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Neuroserpin在神经系统疾病中的实验研究进展
Neuroserpin(NSP)是一种轴突选择性的神经丝氨酸蛋白酶抑制剂[1].在成人中枢神经系统内,它主要存在于新大脑皮质、海马结构、嗅球和杏仁核,而在大多数丘脑核、尾状核、壳核和小脑细胞中相对缺乏[2].
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烟曲霉菌诱导大鼠呼吸道上皮细胞IKKα调控maspin蛋白表达的初步研究
目的 研究烟曲霉诱导大鼠呼吸道上皮细胞时是否存在IκB激酶-α(IκB kinase-α,IKKα)调控maspin蛋白表达下调.方法 体外培养大鼠呼吸道上皮细胞(rat bronchial epithelial cells,REC),制备灭活的烟曲霉菌菌丝(Aspergillus fumigatus hyphae,AFH)悬液诱导REC细胞,以磷酸盐缓冲液(PBS)为对照,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测REC中maspin基因的表达,并通过免疫细胞化学技术观察maspin蛋白及IKKα在REC的表达情况.进一步制备浓度依次增高的AFH1~3悬液诱导REC细胞,Western Blot技术检测REC的maspin和IKKα蛋白表达.采用SPSS13.0软件进行方差分析和两变量的相关性分析.结果 RT-PCR检测显示AFH组与对照组的maspin蛋白的mRNA相对表达量分别为0.128±0.059和2.972±0.353,差异具有统计学意义(t=15.883 P<0.05).免疫细胞化学结果显示,maspin蛋白在两组中均表达,其中AFH组呈弱阳性,而对照组呈中度阳性,综合计分两组差异有统计学意义(t=3.721 P<0.05);IKKα显色在AFH组中度阳性,在对照组弱阳性,综合计分差异有统计学意义(t =6.825 P<0.05).Western Blot结果maspin 与β-actin的灰度比值对照组为0.912±0.023,AFH1~3组分别为0.607±0.030、0.476±0.019、0.416±0.017,组间差异有统计学意义(F=281.91,P<0.05),且任意两组比较差异均有统计学意义;IKKα与β-actin灰度比值对照组为0.624 ±0.012,AFH1 ~3组分别为0.739±0.020、0.778±0.010、0.927 ±0.017,组间差异有统计学意义(F=200.91,P<0.05),且任意两组比较差异均有统计学意义.两变量相关性分析结果显示,maspin蛋白表达与IKKα蛋白表达呈负相关关系(r=-0.911,P<0.05).结论 AFH诱导大鼠REC中IKKα表达上调并伴有maspin蛋白表达下调.
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腺病毒介导的组织途径抑制因子2基因抑制喉鳞状细胞癌生长的实验研究
目的研究腺病毒介导的组织途径抑制因子2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)基因对喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)生长的抑制作用. 方法扩增并鉴定携带人TFPI-2的重组腺病毒(adenoviruses-TFPI-2,Ad-TFPI-2).建立喉鳞癌荷瘤裸鼠动物模型,治疗组9只裸鼠瘤周注射Ad-TFPI-2的重组腺病毒2×1011空斑形成单位(plaque-forming units, PFU)共3次,对照组9只裸鼠瘤周注射等量的空载体,观察治疗结束后1周两组肿瘤质量和体积的差异.运用透射电镜观察肿瘤形态学变化;运用免疫组化方法检测肿瘤组织中增殖核抗原的表达. 结果扩增后的Ad-TFPI-2的病毒滴度为2.8×1012PFU/ml.Ad-TFPI-2治疗组裸鼠肿瘤平均体积和质量分别为(1.20±0.34)cm3和(1.52±0.39)g,明显小于空载体对照组的(2.08±0.52)cm3和(2.67±0.47)g(P<0.01).透射电镜观察到Ad-TFPI-2治疗组肿瘤呈凋亡改变,免疫组化结果显示Ad-TFPI-2治疗组的增殖细胞核抗原指数(54.9%±12.4%)明显低于对照组(75.8%±11.2%,P<0.01). 结论瘤周注射携带人TFPI-2的重组腺病毒可抑制裸鼠体内喉鳞癌的生长.
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色素上皮源性因子抑制眼新生血管的研究现状
色素上皮源性因子(PEDF)是丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族成员之一,有多种生物学功能,是眼组织中有效的新生血管抑制剂。本文概述了PEDF的基因、蛋白结构、在眼组织的分布,重点阐述了PEDF抑制眼新生血管的作用和临床应用前景。
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丝氨酸蛋白酶抑制剂和血管内皮生长因子基因在口腔鳞癌中的表达
丝氨酸蛋白酶抑制剂(head and neck serine proteinase inhibitor,Headpin)是一种新发现的肿瘤抑制基因.我们应用逆转录PCR技术检测口腔鳞癌患者的癌、癌旁及相应正常口腔黏膜中Headpin和血管内皮生长因子( ,VEGF) mRNA的表达,探讨其在口腔鳞癌癌变中的意义.
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口腔疣状癌Maspin基因表达研究
Maspin 是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂,其基因位于染色体18q21.3-q23,在肿瘤生长、浸润和转移过程中起重要作用.我们应用RT-PCR和免疫组化技术检测口腔疣状癌Maspin基因的表达,并与鳞癌对比,初步探讨其在疣状癌癌变中的意义.
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乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义
目的 探讨乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂(marray serine proteinase inhibitor,Maspin)在口腔鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系.方法 应用免疫组织化学方法 对口腔鳞状细胞癌45例的癌组织及其癌旁上皮组织标本行Maspin蛋白含量的半定量测定,与各临床病理指标采用SPSS 13.0统计学软件进行统计学分析.结果 Maspin蛋白在口腔鳞状细胞癌组织中的表达(弱阳性31%,强阳性31%)显著低于癌旁上皮组织(弱阳性13%,强阳性87%),P=0.001;口腔鳞状细胞癌组织中Maspin蛋白的表达与淋巴结转移(P=0.038)、术后转移(P=0.004)呈负相关,与总体生存状况呈正相关(P=0.014).结论 Maspin蛋白的检测对口腔鳞状细胞癌患者判断预后具有重要价值.
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乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂在口腔鳞状细胞癌亚细胞中的表达及意义
目的 检测乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂(mammary serine proteinase inhibitor,Maspin)在口腔鳞状细胞癌亚细胞中的表达,观察其与口腔鳞状细胞癌患者临床病理特征之间的关系,以期为临床提供参考.方法 应用免疫组织化学方法对45例口腔鳞状细胞癌的癌组织标本行Maspin蛋白含量的半定量测定,统计其亚细胞定位表达,并与各临床病理指标进行统计学分析.结果 Maspin蛋白在口腔鳞状细胞癌胞核中表达的强阳性率为24%(11/45),弱阳性率为11%(5/45),阴性率为64%(29/45),细胞核表达与肿瘤大小(P=0.019)、淋巴结转移(P=0.011)及术后转移(P=0.017)呈负相关,与患者术后的生存时间呈正相关(P=0.030);Maspin蛋白在口腔鳞状细胞癌胞质中表达的强阳性率为31%(14/45),弱阳性率为31%(14/45),阴性率为38%(17/45),细胞质表达与淋巴结转移(P=0.038)、术后转移(P=0.004)呈负相关,与患者术后的生存时间呈正相关(P=0.014).结论 Maspin蛋白在口腔鳞状细胞癌胞核或胞质中的表达对判断预后可能具有重要价值.