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p120-连环蛋白在不同膀胱癌细胞株中的表达及对膀胱癌BIU-87细胞增殖、侵袭和黏附能力的影响
目的：探讨p120-连环蛋白在膀胱癌BIU-87和T24细胞株中的表达水平，分析p120-连环蛋白下调对膀胱癌BIU-87细胞增殖、侵袭和黏附能力的影响。方法2010年8月至2011年5月，采用实时定量PCR和蛋白质印迹技术检测膀胱癌BIU-87和T24细胞株中p120-连环蛋白的表达水平。将膀胱癌 BIU-87细胞分为3组：未转染组，转染p120-连环蛋白siRNA 组和转染control siRNA组，应用siRNA方法沉默BIU-87细胞中p120-连环蛋白基因表达，采用噻唑盐法和克隆形成实验检测p120-连环蛋白siRNA对BIU-87细胞生长率的影响，Transwell小室法检测BIU-87细胞侵袭能力的变化，细胞黏附人工重组基底膜实验检测BIU-87细胞黏附能力的变化。结果 p120-连环蛋白在膀胱癌BIU-87和T24细胞株中均有表达，在BIU-87细胞株中的表达水平（0．11±0．39）显著高于T24细胞株（0．48±0．17），差异有统计学意义（P＜0．05）。噻唑盐法检测BIU-87细胞的增殖能力，转染p120-连环蛋白siRNA组的生长增殖率（182．7±13．4）％显著高于转染control siRNA组的（95．5±9．9）％和未转染组的100．0％，差异有统计学意义（ P＜0．05）。转染p120-连环蛋白siRNA组BIU-87细胞侵袭数量[（217．5±15．9）个]明显高于转染 control siRNA 组[（105．4±10．1）个]和未转染组[（92．7±8．3）个]，差异有统计学意义（ P＜0．05）。转染 p120-连环蛋白 siRNA 组 BIU-87细胞的黏附能力（57．3±6．4）％明显低于转染control siRNA组（98．1±11．0）％和未转染组100．0％，差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论 p120-连环蛋白在恶性度低的膀胱癌细胞中表达水平高，其表达下调可促进膀胱癌细胞的增殖和侵袭，抑制膀胱癌细胞的黏附。
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抑制蛋白激酶C对口腔鳞癌细胞迁移和侵袭的影响
目的:利用舌癌细胞系HN4,探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)、P120-连环蛋白(P120-catenin,P120ctn)和E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)在口腔鳞癌中的相互关系及其在肿瘤细胞侵袭和转移中的作用机制.方法:采用质粒pGFP-V-RS-P120ctn shRNA转染HN4,使HN4中P120ctn的表达显著降低,再使用星孢菌素(staurosporine,STS)抑制PKC的表达,进行PKC、P120ctn和E-cad mRNA和蛋白水平的检测;通过Transwell细胞侵袭及细胞迁移试验等方法,检测PKC被抑制前、后肿瘤细胞迁移和侵袭能力的变化.采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析.结果:当PKC被STS抑制时,HN4/shP120ctn细胞中P120ctn的表达显著升高,E-cad的表达也随之升高,肿瘤细胞的迁移和侵袭能力显著降低(P均＜0.05).结论:PKC可能参与了P120ctn和E-cad表达的调节,与细胞黏附的调控有关,进而在HN4细胞的迁移和侵袭过程中发挥作用.
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p120-连环蛋白对大鼠急性肝衰竭的保护作用
目的 探讨p120-连环蛋白(p120cnt)表达对急性肝衰竭(ALF)内皮损伤和炎性激活的影响,分析p120cnt的抗炎效应是否可以通过对Epac1信号通路的调控来发挥作用.方法 查询GenBank中大鼠p120cnt cDNA文库,设计引物,PCR扩增目的基因,琼脂糖电泳鉴定结果.经酶切、连接克隆至带绿色荧光蛋白(GFP)的表达载体,转化E.Coli JM109并筛选阳性菌落,提取重组质粒后酶切,测序验证,确保表达框无误.选择健康雄性Wistar大鼠36只,按随机数字表法分为正常对照组、ALF模型组、质粒转染+ALF建模组,每组12只.脂多糖(LPS)联合D-GalN法构建ALF动物模型,使用裸质粒流体力学基因转染法转染大鼠,肝组织切片荧光显微镜观察转染是否成功.以上处理12 h后处死大鼠取肝组织切片进行HE染色及TUNEL分析,评估各组肝细胞坏死程度;半定量RT-PCR评估各组肝组织p120cnt mRNA及Epac1 mRNA表达水平.结果 PCR扩增目的基因,1.2％琼脂糖电泳显示目的基因约2800 bp.真核表达重组体pCMV/p120ctn提取质粒后酶切,酶切产物基因测序显示质粒构建正确.基因转染后大鼠肝组织切片内可见大量GFP表达说明转染已成功.大鼠肝组织切片HE染色及TUNEL分析说明质粒转染+ ALF建模组肝细胞坏死严重程度低于ALF模型组.大鼠肝组织p120cntmRNA表达强弱顺序为:正常对照组＞质粒转染+ ALF建模组＞ALF模型组(均P＜0.01).大鼠肝组织Epac1 mRNA表达强弱顺序为:质粒转染+ ALF建模组＞ALF模型组＞正常对照组(P＜0.05或P＜0.01).结论 p120cnt存在对ALF的抗炎作用和肝保护作用;p120cnt对肝组织急性炎症的抑制效应与上调Epac1基因表达有关.
关键词： p120-连环蛋白 急性肝衰竭 环磷酸腺苷活化交换蛋白1 内皮细胞 -
P120ctn在口腔鳞癌中的表达及其与细胞黏附的关系
目的:对比口腔鳞癌(oral squamous-cell carcinoma,OSCC)与口腔正常黏膜中P120-连环蛋白(P120-catenin,P120ctn)和E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)的表达,观察P120ctn和E-cad的表达与口腔鳞癌临床病理参数之间的关系以及它们之间的相互关系.方法:选用人正常口腔黏膜组织26例OSCC标本49例,采用免疫组化方法检测P120ctn和E-cad的表达.结果:在口腔鳞癌中P120ctn和E cad的正常表达率显著低于它们在正常口腔黏膜组织中的正常表达(P＜0.05).有淋巴结转移组和肌层浸润组的OSCC组织P120ctn及E-cad的正常表达显著低于无淋巴结转移组和黏膜及黏膜下层浸润组(P＜0.05).OSCC组织中Pl20ctn异常表达组的E-cad正常表达率显著低于P120ctn正常表达组(P＜0.05),P120ctn与E-cad高度相关(P＜0.01).结论:P120ctn和E-cad在OSCC中的表达具有相关性,且随组织病理改变而改变.
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P120ctn基因沉默及过表达对口腔鳞癌细胞迁移和侵袭的影响
目的:利用舌癌原发灶和转移淋巴结细胞系HN4和HN12,通过沉默和过表达P120连环蛋白(P120-catenin,P120ctn)基因,观察P120ctn的表达对E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)表达和口腔鳞癌迁移和侵袭能力的影响.方法:采用质粒pGFP-V-RS-P120ctn shRNA转染P120ctn高表达的HN4细胞,使HN4中P120ctn的表达显著降低,采用质粒pCMV6-AC-GFP-P120ctn转染HN12,使HN12过表达P120ctn,进行P120ctn和E-cad mRNA和蛋白水平的检测,并通过Transwell细胞迁移及侵袭试验检测转染前后肿瘤细胞迁移和侵袭能力的变化.结果:用质粒转染HN4细胞后发现,随着P120ctn表达的显著降低,E-cad的mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞迁移和侵袭能力显著提高.反之,HN12细胞被转染后发现,过表达P120nn的HN12细胞E-cad的蛋白表达水平也显著提高,细胞迁移和侵袭能力显著降低(P＜0.05).结论:在OSCC细胞系中P120ctn的表达与E-cad相关,可能参与了细胞粘附的调控,进而在口腔鳞癌细胞的迁移和侵袭过程中发挥作用.
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P120 ctn/E-cad 在口腔鳞癌细胞迁移和侵袭中的功能
目的：分析P120-连环蛋白（P120-catenin，P120ctn）和E-钙粘蛋白（E-cadherin，E-cad）在口腔鳞癌（oral squamous-cell cancer，OSCC）细胞迁移和侵袭中的功能。方法：采用实时荧光定量PCR、Western blot检测HN4（人舌癌原发灶细胞）和HN12（人舌癌转移淋巴结细胞）中P120ctn、E-cad的mRNA和蛋白表达，通过Transwell细胞侵袭及细胞迁移试验等方法检测HOK（人口腔黏膜角化上皮细胞）、HN4和HN12细胞的迁移和侵袭能力。结果：HN4细胞中P120ctn和E-cad的mRNA和蛋白表达水平明显高于HN12，低于HOK细胞，差异均有统计学意义（P＜0．05）。HN4细胞的侵袭和转移能力显著高于HOK细胞，低于HN12细胞，差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论：在OSCC细胞中P120 ctn与E-cad的表达下调，可能抑制了OSCC细胞的侵袭和转移。
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P120ctn基因沉默促进舌癌细胞上皮-间质转化
目的 探索P120-连环蛋白(P120ctn)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)上皮-间质转化(EMT)中的作用.方法 采用质粒pGFP-V-RS-P120ctn shRNA转染人舌鳞癌细胞(TSCCA),采用实时荧光定量聚合酶链反应、Western blot检测细胞中P120ctn、E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cad)和波形蛋白(Vim)的mRNA和蛋白表达的变化,通过Transwell细胞侵袭及细胞迁移试验检测转染前、后细胞迁移和侵袭能力的变化.结果 用质粒pGFP-V-RS-P120ctn shRNA转染TSCCA后发现,随着P120ctn表达的明显降低,E-cad的mRNA和蛋白表达水平明显降低,N-cad和Vim的mRNA和蛋白表达水平明显升高,细胞迁移和侵袭能力明显提高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 在OSCC中P120ctn可能通过调控EMT标记物E-cad的表达参与EMT的发生,调节肿瘤的侵袭和转移.
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连环蛋白家族的新成员——p120-连环蛋白
目的 介绍连环蛋白家族新成员p120-连环蛋白(p120-catenin,p120ctn)及其在肿瘤研究中的进展.方法 查阅近年来国内、外有关对p120ctn研究的文献并作综述.结果 ①p120ctn参与钙黏蛋白-连环蛋白复合体的形成,参与细胞生长、增殖和黏附连接;②调控Rho GTP酶的活性,促进细胞运动性;③与核内转录因子Kaiso结合形成Kaiso-p120ctn复合体,参与基因转录的调控;④参与血管内皮生长因子诱导的血管新生过程;⑤参与炎症、细胞恶变以及肿瘤侵袭、转移过程.结论 p120ctn作为连环蛋白家族中的一个新成员,依靠它的细胞定位参与多种生物过程,从分子水平深入了解p120ctn的生物学功能及作用机理,有利于从p120ctn的异常改变判断肿瘤的发生和发展,为肿瘤的预防和治疗提供新的手段.
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P120-连环蛋白介导钙黏蛋白转换促进口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的实验研究
目的 探索P120-连环蛋白(P120ctn)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞钙黏蛋白转换中的作用及其对肿瘤细胞迁移和侵袭的影响.方法 采用质粒pGFP-V-RS-P120ctn shRNA转染OSCC细胞株TSCCA,采用实时荧光定量聚合酶链反应、Western blot检测细胞中P120ctn、E-钙黏蛋白(E-cad)和N-钙黏蛋白(N-cad)的mRNA和蛋白表达的变化,通过Transwell细胞侵袭及细胞迁移实验检测转染前后细胞迁移和侵袭能力的变化.结果质粒pGFP-V-RS-P120ctn shRNA转染TSCCA细胞后,P120ctn表达明显降低,E-cad的mRNA和蛋白表达水平也明显降低,而N-cad的mRNA和蛋白表达水平明显提高,细胞迁移和侵袭能力也明显提高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论在OSCC中P120ctn可能通过介导钙黏蛋白转换来调节肿瘤的浸润和转移过程.
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PKC、P120ctn和E- cad在口腔鳞癌中的表达
目的:观察P120- 连环蛋白(P120- catenin,P120ctn)、E- 钙粘蛋白(E- cadherin,E- cad)与蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在口腔鳞癌(oral squamous- cell carcinoma,OSCC)中的表达.方法:选用人正常口腔黏膜组织16 例和OSCC标本51 例,采用免疫组化方法(IHC)检测PKC、P120ctn和E- cad的表达.结果:在口腔鳞癌中P120ctn、E- cad的异常表达率显著高于它们在正常口腔黏膜组织中的表达,PKC的阳性表达率显著高于其在正常口腔黏膜组织中的表达(均P<0.05).有淋巴结转移的OSCC组织中P120ctn、E- cad的异常表达率和PKC的阳性表达率显著高于无淋巴结转移组(均P<0.05).P120ctn和E- cad的异常表达与PKC的阳性表达高度相关(均P<0.01).结论:PKC、P120ctn和E- cad在OSCC中的表达具有相关性.
