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乳腺癌和非癌组织中DLC1基因及蛋白表达与Ki-67的关系
目的:探讨乳腺癌和非癌组织中DLC1表达及其与Ki-67的相互关系.方法:应用原位杂交技术和免疫组织化学EnVision两步法,检测52例乳腺浸润性导管癌和42例非癌组织(包括癌旁乳腺组织20例和乳腺纤维腺瘤22例)中DLCl-mRNA、DLC1和Ki-67的表达.结果:DLC1-mRNA和蛋白在乳腺癌中的阳性率(50%和57.7%)低于非癌乳腺组织(90.5%和92.9%),差异有统计学意义(X2=17.518和10.729,P<0.01).DLC1-mRNA与蛋白的表达呈正相关(rs=0.379,P<0.01).Ki-67在乳腺癌中的阳性率为61.5%,而在非癌组织中均呈阴性表达,两者差异有显著统计学意义(X2=39.186,P<0.01).乳腺癌中DLCl与Ki-67的表达呈负相关(rs=-0.507,P<0.01).结论:DLC1-mRNA和蛋白在乳腺癌中呈低表达或缺失,提示其与乳腺癌的发生、发展有关,DLC1有抑制乳腺癌细胞增殖的功能,可作为乳腺癌新的分子标记物.联合检测DLC1和Ki-67在乳腺癌中的表达,有望成为估价乳腺癌生物学行为的参考指标.
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乳腺癌中DLC1和DLC1-mRNA2的表达及其临床意义
目的:探讨乳腺癌中肝癌缺失基因1(deleted in liver cancer-1,DLC1)和DLC1-mRNA2的表达及其临床意义.方法:应用原位杂交技术和免疫组织化学En Vision 二步法,检测52例乳腺浸润性导管癌和42例非癌乳腺组织(包括癌旁乳腺组织20例和乳腺纤维腺瘤22例)中DLC1和DLC1-mRNA2的表达,分析乳腺癌中DLC1和DLC1-mR.NA2的表达与患者年龄、肿瘤大直径、组织学分级、腋窝淋巴结转移和TNM分期等临床病理参数的相关性.统计学处理分别采用x2检验、Fisher's 精确概率法和Spearman等级相关分析.结果:52例乳腺癌(腋窝淋巴结有转移的33例,无转移的19例)患者年龄30～77岁,平均年龄49.5岁,术前均未接受放疗及化疗.DLC1和DLC1-mRNA2在乳腺癌和非癌乳腺组织中的阳性表达率分别为(57.7%,50%)和(92.9%,90.5%),DLC1和DLC1-mRNA2在乳腺癌中的表达率显著低于非癌乳腺组织(x2=14.717,P=0.000;x2=17.518,P=0.000),差异均有显著统计学意义(P<0.001).乳腺癌中DLC1和DLC1-mRNA2的表达与组织学分级(rs=-0.811,P=0.000;rz=-0.422,P<0.05)、腋淋巴结转移(rs=-0.410,P<0.01;rs=-0.445,P<0.01)和TNM分期(rs=-0.319,P<0.05;rs=-0.405,P<0.05)均呈负相关;DLC1-mRNA2的表达与肿瘤大直径(rs=-0.347,P<0.05)亦呈负相关.DLC1与肿瘤大直径(rs=0.073)和DLC1、DLC1-mRNA2的表达与患者年龄(rs=0.077;rs=0.008)的相关性均无统计学意义(P>0.05).结论:DLC1蛋白和DLC1-mRNA2在乳腺癌中呈低表达或失表达,在乳腺癌的恶性演进中扮演着重要角色.检测乳腺癌中DLC1和DLC1-mRNA2的表达,结合相关临床病理参数,可作为判断乳腺癌生物学行为和预后的一个参考指标.
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miR-19a在结肠癌中高表达以及通过靶定DLC1促进结肠癌细胞增殖
目的:探讨miR-19a在结肠癌组织中的表达对结肠癌细胞系SW620和SW480增殖的影响,以及其靶基因的确定和功能性研究.方法:实时荧光定量PCR检测miR-19a的表达.噻唑蓝(MTT)比色实验和克隆形成实验检测SW620和SW480细胞的增殖活性.生物信息学预测、荧光报告载体实验以及实时荧光定量PCR和western blot验证miR-19a下游靶基因.结果:miR-19a在结肠癌组织中表达增强(P＜0.01).miR-19a可以增强结肠癌细胞系SW620和SW480增殖能力.DLC1是miR-19a的候选靶基因,过表达miR-19a可以同时在mRNA和蛋白水平上抑制DLC1基因的表达(P＜0.01),反之抑制miR-19a的表达后DLC1的表达则升高(P＜0.01).过表达DLC1后,SW620和SW480细胞的活性和克隆形成能力减弱(P＜0.01).结论:DLC1是miR-19a的直接靶基因,miR-19a通过抑制DLC1的表达而促进结肠癌细胞的增殖.
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乳腺癌和非癌组织中DLC1基因及蛋白表达与Ki-67的关系
目的 探讨乳腺癌和非癌组织中DLC1表达及其与Ki-67的相互关系.方法 应用原位杂交技术和免疫组织化学EnVision两步法,检测52例乳腺浸润性导管癌和42例非癌组织(包括癌旁乳腺组织20例和乳腺纤维腺瘤22例)中DLC1-mRNA、DLC1和Ki-67的表达.结果 DLC1-mRNA和蛋白在乳腺癌中的阳性率(50%和57.7%)低于非癌乳腺组织(90.5%和92.9%),差异有统计学意义(χ~2＝17.518和10.729,P＜0.01).DLC1-mRNA与蛋白的表达呈正相关(r_s=0.379,P＜0.01).Ki-67在乳腺癌中的阳性率为61.5%,而在非癌组织中均呈阴性表达,两者差异有显著统计学意义(χ~2=39.186,P＜0.01).乳腺癌中DLC1与Ki-67的表达呈负相关(r_s=-0.507,P＜0.01).结论 DLC1-mRNA和蛋白在乳腺癌中呈低表达或缺失,提示其与乳腺癌的发生、发展有关,DLC1有抑制乳腺癌细胞增殖的功能,可作为乳腺癌新的分子标记物.联合检测DLC1和Ki-67在乳腺癌中的表达,有望成为估价乳腺癌生物学行为的参考指标.
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抑癌基因Deleted in Liver Cancer 1在人胶质瘤细胞株中的作用及机制
目的 探讨抑癌基因DLC1表达的isoform 1及isoform 2两个亚型在人胶质瘤细胞株中的表达、功能及机制.方法 KT-PCK方法检测体外培养的胶质瘤细胞株U87-MG和SHG-44中DLC1 isoform 1,2的mRNA水平;10μM 5-aza-2'-de-oxycytidine(5'-AzA)或者共含有500 nM trichostatin A(TSA)处理细胞36 h,检测DLC1 isoform 1,2的表达;MTT方法检测转染DLC1 isoform 2及没有GAP活性的isoform 2突变体DLC1-K714E表达质粒对胶质瘤细胞株U87-MG和SHG-44增殖的影响.结果 在U87-MG细胞株中没有检测到DLC1 isoform 1;在SHG-44中检测到微量的DLC1 isoform 1,5'-AZA或者共含有TSA处理使其表达上调;DLC1 isoform 2在上述细胞株都能检测到,5'-AZA或者共含有TSA处理细胞未改变其表达水平:过表达DLC1 isoform 2及其突变体DCL1-K714E促进U87-MG和SHG-44细胞株增殖.结论 DLC1 isoform 1在胶质瘤细胞株中不表达或低表达,可能原因是由于不转录或者启动子发生甲基化.DLC1 isofonn 2有一定的表达水平.高表达的DLC1 isoform 2促进胶质瘤细胞增殖.且不依赖GAP活性.
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大鼠肝癌组织中DLC1、ASC、p16和DLK1基因甲基化状态与肝癌的关系
目的 探讨大鼠肝癌组织中DLC1、ASC、p16和DLK1基因启动子区甲基化状态与肝癌发生的关系.方法 55只Wistar雄性大鼠随机分为黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)实验组(35只)和空白对照组(20只),用AFB1诱发大鼠肝癌并建立大鼠实验动物肝癌模型.用甲基化特异性PCR(MS-PCR)技术和琼脂糖凝胶电泳方法检测大鼠肝癌组织及正常肝脏组织中DLC1、ASC、p16和DLK1基因启动子区的甲基化情况,分析4个基因的甲基化状态与肝癌发生的关系.结果 在实验第52周可见大鼠肝脏发生典型的肝癌病理学改变,实验诱发大鼠肝癌模型制作成功.MS-PCR技术检测显示在大鼠肝癌组织中DLC1、ASC、p16和DLK1基因启动子区的甲基化率分别为83.3％、93.3％、86.7％和10.0％,在大鼠正常肝脏组织中的甲基化率分别为14.3％、35.7％、21.4％和85.7％,二者比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).琼脂糖凝胶电泳法检测显示4种基因甲基化均为阳性.结论 大鼠肝癌组织中DLC1、ASC、p16基因启动子区高度甲基化,DLK1基因启动子呈低甲基化水平,提示DLC1、ASC、p16和DLK1基因启动子区的异常甲基化与大鼠肝癌发生的关系密切.
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DLC1与RhoA表达影响乳腺癌细胞转移能力的初探
目的 检测在不同转移能力乳腺癌细胞株中DLC1、RhoA的表达,探讨DLC1、RhoA对乳腺癌细胞株转移能力的影响.方法 Transwell小室实验比较乳腺癌MCF-7细胞及乳腺癌MDA-MB-231细胞的转移能力,免疫细胞化学法及Western Blot检测DLC1与RhoA在两细胞株中的表达.结果 Transwell小室实验示乳腺癌MCF-7细胞的迁移、侵袭能力低于乳腺癌MDA-MB-231细胞(P均＜0.05),免疫细胞化学法和Western Blot检测DLC1在乳腺癌MDA-MB-231细胞的表达均低于乳腺癌MCF-7细胞(P均＜0.05),而RhoA在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达均高于乳腺癌MCF-7细胞(P均＜0.05).结论 DLC1能抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移,RhoA可促进乳腺癌细胞的侵袭和转移,乳腺癌细胞侵袭和转移能力可能与DLC1介导的RhoA-ROCK信号通路有一定相关性.
关键词： DLC1 RhoA RhoA-ROCK通路 乳腺癌细胞 转移
