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HCV IRES介导荧光素酶小鼠体内表达模型的建立
HCV内部核糖体起始位点 (internal ribosomal entry site, IRES)含有40S核糖体的有效结合部位和与内部翻译起始因子eIF-3的结合部位,以内部起始方式调控介导HCV蛋白的翻译启动,在翻译调控中具有重要作用[1],是反义寡核苷酸、核酶和siRNA等药物治疗的重要靶位.王小红等[2]曾构建了CMV启动子启动转录的HCV IRES调控荧光素酶表达载体pHCV-neo4,建立了转基因细胞模型.获得了在细胞水平上对HCV有明显抑制作用的反义寡核苷酸.而在动物水平上的评价却无合适的模型.我们进一步采用水动力转染法将pHCV-neo4表达载体转染到小鼠体内,在小鼠肝脏检测到荧光素酶的高水平表达,可作为体内瞬时评价以HCV IRES为靶位的抗HCV药物活性的小鼠模型.
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中枢神经系统对腺病毒载体的免疫应答
腺病毒载体(adenoviral vector,AdV)在介导体内基因转染方面所表现出的多方面的优势,使得这一载体系统正在成为神经再生、神经示踪研究以及神经肌肉疾病基因治疗的实验研究中具魅力的载体之一[1-3].虽然神经系统被认为是免疫豁免(immunological privilege)器官,然而AdV转染神经系统后所激发的对该载体的免疫应答常导致其携带的目的基因不能在体内长时间高水平表达,甚至引起转染细胞的破坏,致使这一载体系统的应用在很大程度上受到限制[4,5].为探索AdV在神经系统高效和安全给予方法以及使转染基因获得治疗水平的长期表达,很有必要详细分析研究神经系统对AdV的免疫应答机制以及探索新的免疫调控策略.
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一种双抗体夹心ELISA检测热休克融合蛋白方法的建立
MUC1蛋白在乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌等多种肿瘤细胞都呈现高水平表达.MUC1蛋白的表位肽VNTR,是诱生MUC1特异性免疫应答的靶点;采用MUC1 VNTR多肽研制出的生物制剂能刺激小鼠抑制表达MUC1肿瘤细胞的生长[1].
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B型利钠肽在非体外循环下冠状动脉旁路移植术中的临床应用价值
B型利钠肽(BNP)作为近年发现的心肌标志物,其机制作用以及临床价值越来越受到关注.在扩张性心肌病中,心室肌有较高的BNP表达.Goetze等[1]学者通过对心脏外科搭桥手术患者心肌活检,显示冠心病且不伴有左室充血性扩张的患者,心室中同样会有BNP mRNA的高水平表达,且与外周血中BNP浓度有显著相关性.
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胰腺移植物ICAM-1的表达及信号转导的因素
目的:探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)抑制剂对细胞间黏附因子-l(ICAM-1)在大鼠胰腺移植物的表达及转导信号的影响.方法:采用大鼠胰十二指肠移植模型,实验组给予NE抑制剂(ONO-5046,10 mg/kg).体外实验检测NE及多种相关试剂对大鼠内皮细胞ICAM-lmRNA表达的影响及基因转导信号的调控作用.结果:对照组胰腺移植物中ICAM-]mRNA呈高水平表达,而实验组经ONO-5046处理后明显下调其表达,有显著性差异.NE刺激大鼠内皮细胞上调ICAM-lmRNA表达水平,而ONO-5046则明显抑制其表达;特异性钙离子载体增强该细胞的ICAM-1mRNA表达,相反,磷脂酶C抑制剂、钙离子螯合剂及核因子κB抑制因子则下调NE诱导的ICAM-lmRNA表达水平.结论:NE增强ICAM-l在胰腺移植物的表达与细胞钙离子内流及磷脂酶C的信号转导有关.
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正常及实验性肝纤维化大鼠肝脏中的金属蛋白酶组织抑制因子-1
目的:了解金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在正常及实验性肝纤维化大鼠肝组织中的定位及表达状态.方法:用人血白蛋白免疫攻击的方法制备实验性免疫性肝纤维化大鼠模型,以正常大鼠为对照.采用免疫组化法及原位杂交技术分别检测肝脏中TIMP-1 mRNA和相关抗原表达,同时用PCR技术检测肝脏中TIMP-1基因水平.结果:实验组肝脏中TIMP-1相关抗原表达在肌成纤维细胞、成纤维细胞,以汇管区及纤维间隔中明显,阳性信号位于细胞胞质中,未见细胞核表达.原位杂交检测结果也展示了上述相同的分布和定位.正常大鼠肝组织中可见TIMP-1基因表达,但表达水平极低.实验组肝组织中TIMP-1呈高水平表达.结论:在肝纤维化中,成纤维细胞及肌成纤维细胞是TIMP表达的主要细胞.随着病损肝脏中肝纤维化程度的加重,TIMP-1基因表达水平随之增高.
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Kai1/CD82 在不同转移潜能大肠癌细胞系的表达
目的:探讨Kai1/CD82的表达与大肠癌转移潜能的相关性.方法:采用免疫组织化学方法,检测Kail/CD82在大肠癌细胞系LoVo、HR8348、HCT116、HT29与SW480细胞的表达.结果:Kail/CD82在LoVo、HR8348与HCT116细胞系呈低水平表达,在HT29与SW480细胞系则呈高水平表达.结论:Kail/CD82的表达与结直肠癌细胞转移潜能密切相关.
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系统性红斑狼疮可溶性内皮细胞蛋白C受体的研究
系统性红斑狼疮(SLE)是一种原因未明的自身免疫性疾病.其病理标志是反复发作的广泛的血管损害.SLE的血管损害分为两大类:炎症性和非炎症性(即血栓性),在临床上表现为大小血管血栓形成,局部缺血坏死及血管炎,许多患者同时具有这两种血管损害,其形成的确切机制尚不明确.新近发现的血管内皮细胞蛋白C受体(EPCR)在体内抗凝和炎症反应方面起着重要作用.国外文献初步报道可溶性EPCR(sEPCR)在SLE患者血浆中呈高水平表达[1],但其在SLE中的作用及意义尚未明确,为此我们检测了55例SLE患者血浆sEPCR水平,并进一步分析其临床意义.
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肝细胞肝癌细胞间粘附分子-1 mRNA表达的研究
寻找甲胎蛋白(AFP)以外更新、更敏感的血清标记物是肝癌研究中的重要课题。近年有关细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和肝细胞肝癌(HCC)的研究提示,ICAM-1在HCC病人组织及血清中(cICAM-1)呈高水平表达〔1,3〕。本研究通过检测HCC组织中ICAM-1信使核糖核酸(ICAM-1 mRNA)的表达,探讨血清中高水平ICAM-1与HCC组织中ICAM-1 mRNA的相互关系,为cICAM-测定在HCC早期诊断及术后复发监测中的作用寻找理论依据。 1.材料与方法:1998年6月至1999年3月在我院行外科手术或经肝穿病理证实为肝细胞癌样本22例。男性19例,女性3例,年龄29~70岁,中位年龄48岁。肿瘤直径3.5~20.8 cm,中位直径13.7 cm。其中大肝癌(≥5 cm)20例,小肝癌(<5 cm)2例。血清甲胎蛋白(AFP)>400 ng/ml 11例,AFP 20~399 ng/ml 8例,AFP<20 ng/ml 3例。另取3例肝血管瘤无肝硬化肝组织作为正常对照。
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无乙肝及丙肝的肝细胞癌病人肝组织中HBV DNA的重要性
无乙肝及丙肝的肝细胞癌其病原学和预后因素仍然不清楚.该研究通过原位杂交的方法,对46例无乙肝及丙肝的肝细胞癌病人的非肿瘤肝组织中HBV DNA和HCVRNA的水平进行检测.对HBV DNA高水平表达和HBVDNA低水平表达两组病人肿瘤再复发率进行比较,同时探索一些可能与预后有关的因素.结果显示,35例病人的非肿瘤肝标本中检测到HBV DNA,而所有标本中均没发现HCV RNA.
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微管不稳定蛋白Stathmin在胃癌组织中的表达及其意义
Stathmin是一种高度保守的细胞内可溶性磷酸蛋白质,在细胞周期的不同阶段通过磷酸化和去磷酸化作用来调节细胞微管系统的动力学平衡,控制细胞周期,改变细胞的增殖、分化等生物学行为[1].Stathmin与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关,在白血病、前列腺癌、乳腺癌等恶性肿瘤中均可检测到Stathmin的高水平表达[2-3].本研究通过检测胃癌组织中Stathmin mRNA及蛋白的表达,并分析Stathmin水平与胃癌临床病理因素的关系,探讨其在胃癌发生发展中的作用.
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Dyrk1B在卵巢上皮性癌细胞中的表达及在细胞凋亡中的作用
双重特异性酪氨酸磷酸化调节激酶1 B( dual-specificity tyrosine-phosphorylation regulated kinase 1B,Dyrk1B;又称Mirk)基因定位于人类第19号染色体的q12~q13.11,是一种特异性的双链酪氨酸磷酸化激酶[1],初是从结肠癌细胞株[2]和人类睾丸组织中[3]分离出来的.Dyrk1B可在翻泽过程中完成自身磷酸化,并同时有磷酸化其他丝氨酸、苏氨酸的能力[4].研究表明,Dyrk1B在多数正常组织中呈现低水平表达,而在多种恶性肿瘤组织中呈现高水平表达,如结肠癌、胰腺癌、横纹肌肉瘤、非小细胞肺癌和宫颈癌等[5-7].而且证实,Dyrk1B在细胞转录、细胞周期及细胞凋亡的调节中发挥着重要的作用[8-9].
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SPARC--与角膜创伤修复有关的钙调蛋白
在鼠和人体内SPARS氨基酸序列高度保守,序列同源性为92%.SPARC在眼的许多组织有较高水平表达.内皮损伤、屈光性角膜手术后,角膜上皮和内皮细胞质可见SPARC的出现.SPARC能通过细胞外基质调节细胞与基质间的相互作用,诱导细胞呈圆形;促进培养的内皮细胞和成纤维细胞重排,在损伤部位由成纤维细胞、巨噬细胞和上皮细胞表达,这些细胞从事于基底膜的合成和重建;以Ca2+依赖方式特异性结合Ⅲ、Ⅳ型胶原,参与细胞外基质装配、更新或重建的钙依赖性的过程;指导细胞迁移或增殖,介导角膜上皮和角膜基质间相互作用过程,作为一种修复因子参与角膜创伤修复过程,包括角膜移植免疫过程、角膜物理化学损伤等过程.
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PPARγ在脂肪细胞分化中的作用及对运动的反应相关研究
过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)家族是影响脂肪细胞分化和脂质代谢的主要核内转录受体,根据其结构及功能可将PPARs分为PPARα、PPARβ(亦称PPARδ)及PPARY 3种亚型.其家族成员PPARγ是目前所知唯一在脂肪组织中高水平表达的转录因子,对脂肪细胞的分化有重要调节作用.而运动时机体发生很多变化,包括激素反应、能量代谢和酸碱平衡等方面的变化,这些都可能影响PPARs家族的基因表达,甚至影响其对脂肪代谢的调节作用.通过对PPARy和脂肪细胞分化之间关系的研究,可以深入了解其作用的分子机制,为运动防治肥胖的机理研究提供必要的理论依据.
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Mpl的新配体HNUDC的研究进展
核迁移蛋白C(nuclear distribution protein C,NUDC)首先是在丝状酵母aspergillus nidulans中发现的,是介导核迁移所必须的一类高度保守的蛋白质[1].人核迁移蛋白C(human nuclear distribution protein C,HNUDC)在正常细胞生长和有丝分裂中起着重要作用.在恶性增殖细胞中,HNUDC高水平表达.近研究发现HNUDC是血小板生成素受体(mycloproliferative lekemia,Mpl)的新配体.体外细胞研究中,HNUDC和细胞因子血小板生成素(thrombopoietin,TPO)介导受体Mpl在诱导巨核细胞增殖和分化的功能上存在着重叠,HNUDC主要作用在巨核细胞的成熟期,而TPO在巨核细胞发育前期增殖阶段起作用[2-5].
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慢性特发性血小板减少性紫癜患者血清瘦素水平测定
近年来的研究表明,内分泌系统无论是对体液免疫还是细胞免疫都发挥着重要作用.很多自身免疫性疾病不仅与性别密切相关,与其内分泌激素的水平及调节也明显相关[1].瘦素(leptin)是由脂肪细胞产生的一种激素样细胞因子[2],是由167个氨基酸组成的蛋白质.初研究认为其与食物摄取和脂肪代谢有关,近的研究发现瘦素可以活化CD4+T辅助细胞[3].瘦素水平下降导致免疫抑制,慢性瘦素缺乏者Th1型细胞功能下降而Th2型细胞功能上升.一系列研究表明瘦素可以诱发甚至加重实验性自身免疫性多发性硬化病动物的病情.其他结缔组织疾病,诸如系统性红斑狼疮、自身免疫性糖尿病、白塞氏病等也都存在瘦素高水平表达现象[3-5].然而,瘦素对慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)影响的研究还没有被涉及,我们对此进行了研究,以期发现二者之间的联系.
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对成体干细胞可塑性的新认识及其在再生医学中的意义
根据个体发育过程中出现的先后次序不同,干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞.胚胎干细胞出现在胚胎发育的胚囊内层,高水平表达端粒酶.1981年Martin Evans首次从小鼠胚囊中分离出小鼠胚胎干细胞,后被证实具有自我复制能力,且可分化为诸如神经细胞、心肌细胞、肝细胞、β-胰岛细胞、骨细胞、造血细胞等200多种组织器官的原始细胞.
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临床常见肠杆菌科细菌的耐药现状
广谱抗生素的滥用以及细菌间耐药基因的传递,使常用抗生素的耐药成为严重问题.近年来 ,在革兰阴性杆菌中,β-内酰胺类抗生素的耐药性主要由临床重要的两个β-内酰胺酶引起,一为高水平表达的染色体介导的AmpC β-内酰胺酶,按Bush-J-M分类法,属Bush-J -MI 群,为"C"类β-内酰胺酶,如存在于阴沟肠杆菌的AmpC β-内酰胺酶;一为质粒介导的 ESBLs,包括TEM或SHV型等,属于Bush-J-M26群,为"A"类β-内酰胺酶,如存在于大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中的ESBLs.这些细菌引起的医院感染治疗很棘手.
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HTERT基因与肺癌的研究进展
肺癌是目前世界上常见的恶性肿瘤,严重危害人类健康和生命,近年来呈明显上升趋势.端粒酶的活化与肺癌的发生、发展有密切关系,是迄今为止为广谱的肿瘤分子标志物.研究证实端粒酶在80%~90%的肿瘤细胞中呈高水平表达,而在正常体细胞中检测不到.人端粒酶逆转录酶(human telomerase revere transcriptase,HTERT)是端粒酶成分中的限速亚单位,是端粒酶活性调节的主要部分,它在正常组织的增生和肿瘤的发生中起着至关重要的作用.因此,检测HTERT基因的表达以及针对HTERT为靶点的基因治疗日益成为人们研究的焦点.本文试从HTERT角度阐述它在肺癌的诊断、预后及治疗中的研究进展.
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以金属蛋白酶APN/CD13为靶点的抗癌药物的化学生物学研究
氨肽酶是一系列从蛋白质多肽链氨基端催化降解氨基酸残基的水解蛋白酶.其中的氨肽酶N(又称CD13),因其与肿瘤侵袭、转移、免疫调节和病毒感染等多方面的生理病理过程有关而备受人们的关注.它在肿瘤细胞表面高水平表达,被称作肿瘤细胞标记物或相关抗原CD13,通过对肿瘤细胞外基底膜的降解作用,而引起肿瘤的侵袭和转移.同时,它在新血管的生成过程中也有重要作用.因此,氨肽酶N/CD13对于肿瘤的诊断与治疗有重要意义.另外,氨肽酶N/CD13又是多种冠状病毒的受体 ,从而引发人们对它在抗严重急性呼吸综合征(SARS)病毒方面的深入研究.