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HCV IRES介导荧光素酶小鼠体内表达模型的建立
HCV内部核糖体起始位点 (internal ribosomal entry site, IRES)含有40S核糖体的有效结合部位和与内部翻译起始因子eIF-3的结合部位,以内部起始方式调控介导HCV蛋白的翻译启动,在翻译调控中具有重要作用[1],是反义寡核苷酸、核酶和siRNA等药物治疗的重要靶位.王小红等[2]曾构建了CMV启动子启动转录的HCV IRES调控荧光素酶表达载体pHCV-neo4,建立了转基因细胞模型.获得了在细胞水平上对HCV有明显抑制作用的反义寡核苷酸.而在动物水平上的评价却无合适的模型.我们进一步采用水动力转染法将pHCV-neo4表达载体转染到小鼠体内,在小鼠肝脏检测到荧光素酶的高水平表达,可作为体内瞬时评价以HCV IRES为靶位的抗HCV药物活性的小鼠模型.
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哺乳动物精卵融合相关的精子膜蛋白研究进展
哺乳动物的受精是由一系列精卵质膜的相互作用而触发的,这些相互作用的基本过程包括:精卵识别、精卵结合和精卵质膜融合[1].其中精卵质膜融合是受精过程为关键的步骤.精卵质膜融合是一个高度程序化的过程,完成顶体反应是精子发生质膜融合的必要前提.精子膜的不均一性导致融合的起始位点局限于特定的区域.现阶段普遍认为精卵融合开始于精子赤道区,探索精卵质膜融合相关的精子膜蛋白是研究精卵融合过程中一个极为重要的环节.
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SARS-CoV 5'-UTR相应cDNA作启动子时转录起始位点研究
目的:分析具有启动子功能的SARS-CoV基因组5'-UTR cDNA在转录出mRNA时,转录起始的位点,从而分析序列功能.方法将SARS-CoV 5'-UTR驱动下报告基因的真核表达质粒pGL3-5'-UTR,转染HepG2细胞,然后提取总RNA,采用5'-RACE,扩增出相应序列,通过比照,查找转录其始的位点.结果通过逆转录和二轮PCR,得到一个约440bp的产物,经A-T克隆后测序,转录体起始位点在SARS-CoV 5'-UTR的第56位核苷酸,其下游是保守的保守的转录调控序列(TRS).结论 SARS-CoV 5'-UTR在调控基因转录时,第56位核苷酸及其下游的TRS具有重要作用.