首页 > 文献资料
-
心肌营养素1对心肌成纤维细胞增殖的作用机制
目的 探讨在高静水压条件下心肌营养素1(CT-1)对成纤维细胞增殖作用机制.方法 3～4代心肌成纤维细胞用于实验,分为对照组、助溶剂(二甲亚砜,DMSO)组、CT-1反义寡核苷酸组(ASODN)、正义寡核苷酸组(SODN)、MEK-EPK阻断剂PD98059组、JAK-STAT3阻断剂AG490组、PI3K阻断剂LY294002.利用自制压力培养装置,将各组细胞置于160 mm Hg压力下培养8 h. STAT3、ERK1/2和PI3-K的活性通过Western blot分析测定;MTT测定心肌成纤维细胞增殖.结果 高静水压明显促进心肌成纤维细胞增殖,CT-1表达上调,CT-1ASODN干预后,CT-1ASODN能抑制高静水压所致的细胞增殖,吸光度值(A值)为(0.132±0.013 vs 0.154±0.011,P＜0.05),STAT3(2.09±0.25 vs 2.47±0.28, P＜0.05)、ERK1/2(1.13±0.19 vs 1.61±0.22, P＜0.05)和PI3-K(1.25±0.23 vs 1.71±0.25,P＜0.05),蛋白表达水平明显低于对照组.AG490组明显减弱高静水压的促增殖作用(0.118±0.018 vs 0.155±0.010,P＜0.05);PD98059增强高静水压的促增殖(0.185±0.011 vs 0.155±0.010,P＜0.05),PI3-K阻断剂LY294002干预后对高静水压的促增殖作用无影响(0.157±0.015 vs 0.155±0.010,P＞0.05);SODN与对照组相比对心肌成纤维细胞增殖无明显影响.结论 高静水压下,可以激活STAT3、ERK1/2、PI3-K信号通路,心肌成纤维细胞增殖主要通过STAT3通路;ERK1/2通路起负向调节作用;PI3-K 与细胞增殖关系不是很密切.
-
心肌营养素-1对心肌转录因子GATA4表达影响的实验研究
目的 研究心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)对心肌转录因子GATA4的表达影响以及其3条主要信号通路,即JAK-信号传导子和转录激活子3(JAK-STST3)通路、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)在其中发挥的作用.方法 应用半定量RT-PCR及EMSA技术,测定CT-1对大鼠心肌细胞GATA4 mRNA及结合活性表达的时间、剂量依赖影响.通过单独或联合应用Parthenolide(STAT3通路阻断剂)、U-0126(ERK通路阻断剂)及LY-294002(PI3-K通路阻断剂),分析GATA4两指标的表达变化阐述3条信号通路在该过程中发挥的作用.结果 时间依赖实验,0.1 nmol/L的CT-1刺激后,GATA4 mRNA表达在3 h出现显著性增加,刺激6 h以后均表现为极显著性差异(P＜0.01),6 h以后各组间差异无统计学意义.GATA4结合活性在刺激10 min后开始增加,到60min时达到大值,180 min下降至刺激前水平.剂量依赖实验,GATA4 mRNA表达在CT-1的刺激浓度为0.01 nmol/L以上时各组均表现为极显著性增加(P＜0.01).GATA4结合活性在0.01 nmol/L时,灰度值较无刺激组略增高,0.1 nmol/L时灰度值达到高值,以后强度略减弱并维持该水平.通路实验结果显示,U-0126可以增加CT-1刺激后GATA4 mRNA(P＜0.05)的表达和结合活性的增加,Parthenolide可以显著降低GATA4 mRNA(P＜0.01)和结合活性的表达,应用LY-294002后GATA4相关指标与对照组差异无统计学意义.此外,Parthenolide可以抑制由U-0126引起的GATA4 mRNA表达的增加(P＜0.01)及结合活性的增高.结论 CT-1可引起大鼠心肌转录因子GATA4转录及结合活性的表达增强.STAT3通路在CT-1刺激GATA4表达中起关键性作用,ERK通路则通过增强STAT3通路来促进CT-1对GATA4的表达影响,PI3-K通路在两者的相关关系中不发挥作用.
-
CT1修饰的神经干细胞移植癫痫持续状态大鼠海马后的迁移、分化及对空间记忆的影响
目的 观察心肌营养素1(CT1)修饰的神经干细胞(NSCs)移植癫痫持续状态(SE)大鼠海马后的存活、迁移和分化情况,观察对大鼠空间记忆功能的影响.方法 (1)将携带CT1基因的重组腺病毒(Adv-CT1)转染NSCs,并用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记.(2)随机将54只SE大鼠分为联合移植组、单纯移植组及模型对照组(各18只),分移植后1、4及8周3个时间点(各6只).(3)共聚焦荧光显微镜下观察NSCs存活、分化及迁移;水迷宫试验观察空间记忆功能.结果 移植后4及8周,联合移植组双标阳性细胞数明显多于单纯移植组,并见细胞迁移,单纯移植组未见细胞迁移;联合移植组大鼠逃避潜伏期短于单纯移植组(P<0.05).结论 CT1能促进NSCs在SE大鼠脑内的存活、迁移和分化,NSCs-CT1联合移植可改善大鼠SE后空间记忆功能障碍.
-
心室重构相关生化标志物的研究进展
心室重构是导致冠心病、心肌病等进行性发展,引起恶性心律失常、心力衰竭甚至心源性猝死的重要因素.其进展过程中伴随的相关生化标志物改变可帮助临床医师及早识别无临床症状患者心室重构的发生,并为处于不同疾病阶段的患者提供积极的个体化治疗方案,对延缓心室重构的进展,改善患者的预后发挥着不可估量的作用.近年来,与心室重构相关的生化标志物的研究是心血管为活跃的研究领域之一,并取得了丰硕成果.现对近年来心室重构相关生化标志物的研究进展予以综述.
-
心肌营养素1分子的克隆及其反转录病毒载体的构建
实验于2005-10/2006-06在江苏省干细胞重点实验室进行.体外分离培养新生SD大鼠心室肌细胞2周后,Trizol法抽提细胞总RNA,RT-PCR获得心肌营养素1基因,与克隆载体PMD18-T-Vector连接,转化TOP10感受态细菌,阳性克隆经鉴定正确后,PCR扩增心肌营养素1基因,EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切,T4DNA连接酶连接,构建pEGZ-CT-1的反转录病毒载体.经PCR及酶切鉴定,测序表明心肌营养素1基因成功插入pEGZ-Term载体.pEGZ-CT-1载体的构建,为转基因细胞的制备和移植治疗心肌梗死奠定了基础.
-
卡托普利预处理对急性心肌损伤大鼠CT-1及凋亡相关基因表达的影响
目的 研究卡托普利预处理对急性心肌损伤大鼠心肌营养素1及凋亡相关基因表达的影响.方法 将Wistar雄性大白鼠随机分为3组:对照组、Iso损伤组、Cap预处理组；用TUNEL方法检测心肌细胞凋亡,用免疫组化方法检测Fas、Bcl -2和Bax表达,用Western blot方法检测心肌组织CT -1表达.结果 Cap预处理组与Iso损伤组比较,心肌细胞凋亡指数减少,Fas和Bax表达降低,Bcl -2和CT -1表达增高(P＜0.01或＜0.05).结论 卡托普利预处理可能通过促进CT -1的表达,来调节凋亡相关基因的表达,并发挥心肌保护作用.
-
Id3基因在心肌营养素1促心肌成纤维细胞增殖中的作用
目的 探讨在高静水压条件下分化抑制因子3(inhibitory of differentiation 3,Id3 )基因在心肌营养素-1 (cardiotrophin-1,CT-1 ) 促心肌成纤维细胞增殖中的作用.方法 3～4代心肌成纤维细胞用于实验,分为对照组( C 组)、CT-1反义寡核苷酸组 (ASODN组) 、正义寡核苷酸组 ( SODN组)、高静水压组( P 组).利用自制压力培养装置,将各组细胞置于160 mmHg压力下培养8 h.CT-1活性通过 Western印迹法分析测定,Id3基因表达通过RT-PCR方法测定,MTT测定心肌成纤维细胞增殖 .结果 高静水压明显促进心肌成纤维细胞增殖 ,CT-1表达上调,Id3 mRNA表达增加;CT-1 ASODN干预后能抑制高静水压所致的细胞增殖,CT-1表达下调,Id3 mRNA表达减少.结论 Id3 mRNA在心肌成纤维细胞中有明显表达,且与CT-1促心肌成纤维细胞增殖密切相关.
-
卡托普利预处理对急性心肌损伤大鼠CT-1mRNA和gp130mRNA表达的影响及意义
目的 研究心肌营养素1 (CT-1)及其受体gp130在异丙基肾上腺素(Iso)致大鼠急性心肌损伤中的保护作用.方法 将Wistar雄性大白鼠随机分为3组:对照组、Iso损伤组,卡托普利(Cap)预处理组:用光镜观察心肌组织的病理变化,用生化方法检测心肌酶,用RT-PCR方法检测心肌组织CT-1 mRNA、gp130 mRNA的表达.结果 Cap预处理组与Iso损伤组比较,心肌坏死面积减小,肌酸激酶(CK)、谷氨酸氨基转移酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)降低,CT-1 mRNA和gp130 mRNA表达增高(P＜0.01,P ＜0.05).结论 Cap预处理可能通过促进CT-1的表达保护心肌.
-
大鼠急性心肌损伤与CT-1 mRNA相关性的实验观察
目的研究心肌营养素1(cardiotrophin-1,CT-1)在异丙基肾上腺素(isoprenaline,Iso)致大鼠急性心肌损伤中的保护作用.方法将Wistar雄性大白鼠随机分为3组:对照组、Iso组和Iso+PD98059组,光镜观察心肌组织的病理变化,生化方法检测心肌酶,用RT-PCR方法检测心肌组织CT-1 mRNA的表达.结果光镜下Iso+PD98059组心肌病理损伤程度较Iso组重,且CT-1 mRNA表达水平及心肌酶活性明显升高(P＜0.05).结论CT-1具有心肌保护作用,可能与减轻心肌细胞坏死的程度有关.
-
心肌营养素-1在心血管系统的作用
心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)是一个新发现的白介素-6(IL-6)家族细胞因子.它可促使心肌细胞肥大,同时也有促使心肌细胞存活的作用.在缺血性心脏病、心瓣膜病及心力衰竭等疾病时CT-1水平均有升高.本文就CT-1研究进展、在心血管领域的作用及其机理作一综述.
-
超声介导心肌营养素1基因转移骨髓间充质干细胞及表达测定
目的 探讨超声介导白蛋白微泡破裂促进心肌营养素1(CT-1)基因转移骨髓间充质干细胞(MSC)表达的测定.方法 从分离培养的新生大鼠心肌细胞中克隆CT-1基因,构建其表达载体,与白蛋白微泡混合后,在超声作用下介导CT-1基因转染大鼠MSC,荧光显微镜及流式细胞术检测报告基因EGFP的表达,Western blot检测MSC中CT-1表达.结果 可获大鼠CT-1编码基因,并成功构建表达载体pIRES2-CT-1.体外实验结果示,以脉冲0.75 W/cm2作用30 s转染2次,可以有效地将CT-1基因转染MSC,经转染的MSC可以表达分泌CT-1及报告基因EGFP.结论 超声介导白蛋白微泡破裂可以有效促进CT-1基因转染MSC,该技术可能为临床应用基因联合干细胞移植治疗急性心肌梗死提供新的方法.
-
心肌营养素1对异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤的保护作用
目的 观察重组人心肌营养素1对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌损伤的保护作用.方法 利用异丙肾上腺素建立大鼠急性心肌缺血模型,各实验组分别给予不同剂量的心肌营养素1或溶媒,末次给药24h后取血处死大鼠,测定血清中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)、磷酸肌酸激酶(creatine kinase-MB,CK-MB)、乳酸脱氢酶1(lactate dehydrogenase-1,LDH-1)活性;取心肌组织测定心肌匀浆中丙二醛(malondiadehyde, MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量和超氧化物歧化酶(super oxide dismutase, SOD)的活性,比较各组大鼠心肌组织学变化.结果 重组人心肌营养素1显著减轻异丙肾上腺素所致大鼠心肌组织损伤,抑制损伤大鼠血清AST、CK-MB、LDH-1活性,逆转心肌组织中MDA和NO含量的升高,提高大鼠心肌组织中SOD活性.结论 重组人心肌营养素-1对大鼠心肌缺血有保护作用,其机制可能与抗脂质过氧化反应和抗炎症反应有关.
-
ERK1/2信号通路介导心肌营养素1对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用
目的 探讨心肌营养素1对心肌缺氧复氧损伤的保护作用及其信号通路.方法 用改良的方法 培养出生1～3天的乳鼠心肌细胞,分为五组:对照组、缺氧复氧组、缺氧复氧+心肌营养素1组、缺氧复氧+心肌营养素1+PD98059(ERK阻断剂)组及缺氧复氧+心肌营养素1+DMSO组.缺氧3 h,复氧3 h.MTS法测定心肌细胞存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物(JC1)检测心肌细胞线粒体膜电位,二氯荧光磺双乙酸盐(DCFH-CA)检测细胞活性氧水平,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,RT-PCR检测心肌细胞促凋亡基因Bad mRNA表达,Western blot检测ERK1/2蛋白水平.结果 缺氧复氧后心肌细胞凋亡率及细胞内活性氧水平较对照组明显增加,分别是19.4%±2.3%比2.2%±0.2%及14.28±1.42比3.54±0.46(P＜0.05),而心肌细胞存活率显著降低,心肌细胞线粒体膜电位下降.而心肌营养素1处理后,心肌细胞存活率明显高于缺氧复氧组,心肌细胞凋亡率及细胞内活性氧水平显著减少,心肌细胞线粒体膜电位更高,ERK1/2磷酸化蛋白水平增加,Bad mRNA表达明显下调.心肌营养素1的这种作用能被ERK阻断剂PD98059抑制.结论 心肌营养素1能减轻缺氧复氧引起的心肌细胞损伤,其作用依赖ERK1/2信号通路的激活.
关键词： 心肌细胞 缺氧复氧损伤 心肌营养素1 ERK1/2信号通路 -
心肌营养素1在压力超负荷致心肌肥大中的作用
目的 研究心肌营养素1在腹主动脉缩窄所致大鼠压力负荷性心肌肥大模型中的作用,观察AG490对心肌肥大及心肌营养素1表达的影响.方法 用腹主动脉缩窄的方法建立心肌肥大大鼠模型,检测左心室重量指数,应用逆转录聚合酶链反应检测心肌营养素1、β-肌球蛋白重链mRNA表达,放射免疫分析法测定血浆和心肌血管中血管紧张素Ⅱ水平.结果 腹主动脉缩窄术后14天心肌肥大组左心室重量指数明显高于假手术组(P＜0.01);AG490干预组左心室重量指数明显低于心肌肥大组(P＜0.01),但仍高于假手术组(P＜0.01).心肌肥大组血浆和心肌血管紧张素Ⅱ增高,与假手术组比差异有统计学意义(P＜0.01);AG490干预组血管紧张素Ⅱ水平低于心肌肥大组(P＜0.05),但仍高于假手术组(P＜0.01).心肌肥大组心肌营养素1 mRNA表达较假手术组增加(P＜0.01);AG490干预组心肌营养素1表达较心肌肥大组无明显变化(P＞0.05),但与假手术组相比表达明显增加(P＜0.01).心肌肥大组心肌β-肌球蛋白重链mRNA表达明显高于假手术组(P＜0.01);AG490干预组β-肌球蛋白重链mRNA表达较心肌肥大组明显降低(P＜0.01),与假手术组相比表达仍增加(P＜0.01).结论 心肌营养素1参与腹主动脉缩窄所致大鼠压力负荷性心肌肥大的发病过程,AG490可抑制心肌营养素1的表达及心肌肥大.
-
缺血后适应中心肌营养素1对心肌细胞的保护作用研究
目的 探讨心肌营养素1 (CT-1)在缺血后适应中对心肌细胞的保护作用机制及参与的信号通路.方法 选择H9C2乳鼠心肌细胞株,实验分为对照组、缺氧复氧组、缺氧后适应组、缺氧后适应+CT-1组、缺氧后适应+CT-1+Akt阻断剂组、缺氧后适应+CT-1+二甲基亚砜组,MTS法检测细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Western-blot检测Akt蛋白表达,Q-PCR检测Bad mRNA的表达.结果 缺氧复氧组较对照组细胞凋亡率明显增加,存活率降低,缺氧后适应组细胞比缺氧复氧组凋亡率低,存活率增加,缺氧后适应+CT-1组细胞比缺氧后适应组凋亡率进一步降低,存活率进一步增加,Akt磷酸化蛋白水平明显升高,Bad mRNA表达下调,加入Akt阻滞剂(A6730)后,这种保护作用被抑制.结论 心肌营养素1参与激活Akt信号通路协同缺氧后适应减轻缺氧复氧对心肌细胞的损伤,对心肌细胞起保护作用.
-
心肌营养素1与慢性心力衰竭的研究新进展
心肌营养素1是近年来新发现的生物标志物,心肌营养素1对慢性心力衰竭的病理生理学机制起着重要的调节作用.慢性心力衰竭患者心肌营养素1血浆水平随着心力衰竭严重程度加重而升高.心肌营养素1参与交感神经元的胆碱能转化,参与诱导炎性细胞因子的产生,参与诱导心肌肥大和心室重构,加剧了慢性心力衰竭病程进展.心肌营养素1与慢性心力衰竭的诊断、治疗及预后价值评价相关联,是一个重要的生物学标志物.这些研究为今后慢性心力衰竭的临床预防、诊断、治疗及预后价值评价提供全新的信息.
-
Adv-CT1转染对神经元的作用
目的 观察重组腺病毒心肌营养素1(recombinant adenovirus cardiotrophin-1,Adv-CT1)对谷氨酸(glutamate,Glu)诱导损伤神经元的保护作用.方法 分离、培养新生Wistar大鼠神经元细胞,将细胞分为单纯谷氨酸损伤组、Adv-CT1转染组及正常对照组;利用台盼蓝染色技术检测神经元细胞存活率;采用TUNEL原位细胞凋亡检测技术检测神经元细胞凋亡率.结果 谷氨酸损伤第1、2及3天,单纯谷氨酸损伤组细胞存活率(77.4%、72.7%、67.0%)较Adv-CT1转染组(84.8%、78.5%、74.0%)明显降低(P＜0.05);单纯谷氨酸损伤组细胞凋亡率(2.7%、5.5%、6.8%)较Adv-CT1转染组(1.5%、2.0%、3.2%)明显增高(P＜0.05).结论 CT1转染可减少谷氨酸损伤诱导的神经元细胞凋亡发生,促进损伤神经元细胞存活,对损伤的神经元细胞具有保护作用.
