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CXCL12对原代培养大鼠交感神经元新生轴突形态的影响
目的:观察CXCL12与其受体CXCR4对原代培养的大鼠交感神经元轴突生长的影响,并探讨其与神经病理性疼痛交感神经轴突可塑性的相关性及可能机制.方法:极低密度原代培养SD大鼠交感神经元,免疫荧光染色法检测CXCR4受体与酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达情况,应用激光共聚焦显微镜和荧光显微镜进行共定位或计数.采用200 ng/ml浓度CXCL12干预极低密度培养的交感神经元,观察对其轴突生长的影响,对照组加入等量PBS,两组培养12小时后对全部神经元进行活细胞荧光染色,并对神经元逐一拍照处理,测量每细胞的轴突总长度和轴突分支点数量,并对神经元进行同心圆法(Sholl Analysis)分析.结果:CXCR4主要定位于原代培养的交感神经元胞体部位,少量表达于轴突与生长锥,细胞计数共定位率为99.7%.使用外源性CXCL12干预会使培养的交感神经元的轴突复杂度增加(P< 0.001)和分支点数量增加(P<0.05),但对轴突总长度无明显影响.只对靠近胞体的第一级轴突进行Sholl分析,第一级轴突复杂度较对照组明显下降(P<0.0001).结论:CXCL12干预可以增加原代培养大鼠交感神经元的轴突复杂度.
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神经生长因子对免疫系统和造血系统的作用
神经生长因子(NGF)是神经营养因子家族中的一员,它是一种嗜神经多肽,是某些中枢神经元、感觉传入神经元和交感神经元的发育和分化所必需的因子[1].NGF包括脑神经营养因子(BDNF)、神经营养素-3(NT-3)和NT-4/5.过去10余年的许多研究已经表明:NGF不仅具有神经营养作用,也作用于免疫系统和造血系统.
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培养的大脑皮层、海马及交感神经细胞钠、钾和钙离子通道的全细胞记录技术
目的: 建立新生大鼠大脑皮层、海马细胞及交感神经元细胞的培养方法及其钠、钾和钙通道的膜片钳全细胞记录技术.方法: 取出生1~3 d的大鼠大脑皮层、海马及交感神经节,用胰蛋白酶(0.125%)消化组织并分离出神经细胞,种植在涂有多聚赖氨酸的35 mm培养皿中,用高糖的DMEM培养液培养,一周后,镜下可见神经细胞壁光滑、完整,周围有明亮的光润,在高倍倒置显微镜下可见到完整的细胞核及均匀的胞浆,细胞间形成良好的突触连接,可用于细胞膜片钳记录.结果: 用胰蛋白酶消化分离培养的神经细胞,功能状态良好,在膜片钳全细胞记录中,易形成细胞与记录电极间的高阻抗封接,可分别记录到INa、IA、IK和ICa.结论:在神经系统电生理学研究中,此方法可应用于中枢神经系统不同脑区培养以及钠、钾和钙通道电流的记录.
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异丙酚、咪达唑仑复合对交感神经元钠通道电流的影响
异丙酚与咪达唑仑联合应用可达到增加麻醉效能,减轻循环抑制的目的[1].既往的研究表明,交感神经节钠通道可能参与介导异丙酚的循环抑制作用[2].本文旨在研究异丙酚、咪达唑仑对交感神经节细胞钠通道电流的联合作用,探讨复合诱导循环稳定的可能机制.材料与方法大鼠颈上交感神经节细胞急性分离的方法及全细胞膜片钳记录技术同前[2].在Vh-80mV、Vt 0mV条件下,记录不同浓度的异丙酚、咪达唑仑及其复合在给药前、给药30s后的钠通道电流.
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泮库溴铵对大鼠颈上交感神经元全细胞N型钙通道电流的影响
泮库溴铵具有短暂交感神经兴奋作用[1],但是其作用的确切部位和机制目前仍不明了.本文拟通过观察泮库溴铵对急性分离的大鼠颈上交感神经元N型钙离子通道电流的影响,探讨交感神经元在泮库溴铵交感神经兴奋机制中的作用.
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PC12细胞相关分子研究近况
PC12细胞是一种来自大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤的克隆细胞系.在正常情况下培养,PC12细胞不仅在形态上,而且在生理及生化的许多方面都与肾上腺髓质细胞相似,加入神经生长因子(NGF)后,PC12细胞在形态上向交感神经元分化,同时伴有生理及生化方面的变化,终导致PC12细胞呈现神经元样的功能[1].
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神经生长因子及受体与肿瘤相关性研究的现况与进展
1 神经生长因子及受体研究现况与进展NGF是在40年前被发现的一种多肽激素,它能促进感觉神经元和交感神经元支配的神经纤维的生长,含有α、β、γ3种亚基的多聚体,可表示为α2βγ2,其中β亚基具有NGF的所有生物学活性,也是3种亚基中唯一具有NGF的所有生物学活性的亚基,β亚基由2条各含有188个氨基酸残基的相同肽链组成.
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美加明和六烃季铵在交感神经元烟碱受体上作用位点的差异
为比较美加明(mecamylamine, MEC)和六烃季铵(hexamethonium, HEX)在交感神经元烟碱受体上作用位点的差异, 实验用膜片钳全细胞记录技术研究了MEC和HEX对交感神经元烟碱诱发电流的抑制作用.在培养的颈上神经节细胞上, MEC和HEX拮抗烟碱作用的IC50分别为0.0012和0.0095 mmol/L, 并且都加速烟碱受体脱敏.在-30、 -70和 -110 mV钳制电压下, MEC和HEX抑制烟碱诱发电流的作用有电压依赖性.但在每隔3 min连续给药的情况下, MEC的作用有使用依赖性而HEX没有, 表明MEC和HEX在交感神经元烟碱受体上的作用位点不同.
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吡那地尔对培养大鼠交感神经元烟碱电流的影响
目的研究ATP敏感性K+通道(KATP)开放剂吡那地尔对大鼠颈上交感神经元烟碱诱发电流的影响.方法采用培养的交感神经元的全细胞膜片钳技术. 结果吡那地尔在较高浓度时(100 μmol*L-1)对烟碱电流具有一定的抑制作用,但并不影响烟碱受体的失敏;KATP阻断剂格列苯脲不能对抗吡那地尔对烟碱电流的抑制效应. 结论吡那地尔对大鼠交感神经元烟碱电流具有一定的抑制作用,其作用并不通过KATP介导.
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几种不同应激源激活的特异性神经通路
有机体暴露于不同的应激源,神经内分泌反应不同.因此,应激可以被视为反映特异性中枢解剖和功能回路存在与否的反应.近年来,研究者对特异性应激回路已做过部分讨论[1-3],这些应激回路分别参与交感神经元和肾上腺髓质以及HPA轴活性的调节.本文通过分析五种不同的应激源在中枢神经系统可能的作用途径和靶细胞,发现不同的应激源在唤起应答和在神经回路中的作用均有所不同.
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儿茶酚胺类神经递质检测技术及其研究进展
儿茶酚胺(catecholamines,CAs)包括肾上腺素(epinephrin a-drenalin,E)、去甲肾上腺素(norepinephrin noradrenalin,NE)和多巴胺(dopamin,DA),在人体内由肾上腺髓质和一些交感神经元嗜铬细胞所分泌.CAs主要分布于交感神经细胞、肾上腺髓质和中枢神经系统,其中总量的85%为肾上腺素.
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神经营养因子研究进展(3)
1.2睫状神经营养因子(CNTF) 1984年从鸡眼球组织中提纯,因具有支持鸡胚睫状体神经节内付交感神经元的存活而得名.其在成熟的周围神经中表达水平较高,在脑、骨骼肌和胚胎中表达较低.以后,又从牛心及大鼠、兔、鸡的坐骨神经中获得.CNTF由星形胶质细胞和雪旺细胞产生,为酸性蛋白,200个氨基酸残基组成,分子量22.8KD,人、大鼠、兔的CNTF同源性达85%,人CNTF基因为单拷贝基因,长约2kb,定位于11g12,对生后1d,1月、2月大鼠坐骨神经中CNTF免疫组化研究显示:随年龄增长CNTF阳性反应渐减弱,示生长的不同时期对CNTF的需求也不一样,同时也证明不同年龄组鼠坐骨神经中CNTF相对含量存在差异[1].
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白血病抑制因子与生殖调节
白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)是一种具有广泛生物学功能的细胞因子.早发现它具有促进小鼠M1型白血病细胞分化并抑制其增殖而命名.LIF在不同的组织和细胞中具有多种生物活性,如促进骨髓白血病细胞系分化,诱导肝细胞急相反应,抑制正常胚胎干细胞分化,刺激骨中钙释放,以及在大鼠交感神经元中建立胆碱能表型等[1].自1988年国外学者相继证实白血病抑制因子具有抑制多向生长潜能的胚胎干细胞分化并保持其增殖能力的作用以来,越来越多的研究发现LIF影响生殖活动的各个环节,包括卵泡的发育、胚胎的着床、生长、发育、分化等方面,揭示了生殖功能的新机制.本文就LIF在生殖过程的重要作用作一综述.
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神经生长因子及其受体与舌下神经损伤
20世纪50年代,美国生物学家Rita Levi-Montalcini 与Hamburger发现:神经生长因子(NGF)是发现早、典型、研究多的一种神经营养因子.NGF不仅可促进发育中的交感神经元及感觉神经元的分化、发育和成熟,维持成年交感神经的正常功能,而且对运动神经元有作用,成熟的躯体运动神经元具有NGF受体表达潜能[1].研究发现,NGF与周围神经系统关系密切,NGF是周围神经系统维持正常发育和功能的必要因素,并在周围神经再生和损伤修复中起着重要作用.许多实验[2]证明NGF通过与相应受体结合,对神经元具有抑制凋亡等重要生物学作用,显示了他们在神经系统中的重要性.舌下神经是周围神经,是舌的运动神经,在行颈淋巴结清扫术,结扎、切断颈内静脉上端以及在颌下区、舌下区手术时,易伤及舌下神经,导致舌麻痹或功能受限,造成患者言语不清,饮食困难,因舌向后缩入咽腔而引起呼吸困难,所以,一旦舌下神经受损,给患者带来很大痛苦.另外,舌缺损修复方法已发展到功能性舌再造阶段其关键是,使再生的舌下神经重新支配剩余的舌肌和移植肌,因此,研究NGF及其受体在舌下神经损伤及修复过程中的表达及作用,为寻找一种能促进舌下神经损伤修复的方法有重要意义,可指导临床工作,本文就NGF及P75在舌下神经损伤及修复的作用进行综述.
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GDNF及不同生长底物对培养颈上神经节交感神经元的作用
目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子及不同生长底物对培养颈上神经节交感神经元存活和突起生长的影响.方法 取新生大鼠颈上神经节(superior cervical ganglion, SCG)体外分离培养,培养基中含不同浓度的胶质细胞源性神经营养因子(glial cell derived neurotrophic factor, GDNF),并选取不同方法溶解多聚-D-赖氨酸(poly-D-lysine, PDL)包被培养盖片,观测交感神经元的存活和突起生长状况.结果 用0.01 mol/L硼酸溶解的PDL进行包被,细胞存活和突起生长好,且神经元分散好,优于其他各组;GDNF对培养交感神经元的存活、突起生长具有显著的促进作用,且与其浓度存在量效关系,但它并不能阻止培养前5 d存活神经元数量的减少.结论 用0.01 mol/L硼酸溶解PDL包被是一种良好的生长底物处理方法,GDNF能促进离体培养的交感神经元的存活和突起生长.
关键词: 胶质细胞源性神经营养因子 生长底物 交感神经元 -
心肌营养素1与慢性心力衰竭的研究新进展
心肌营养素1是近年来新发现的生物标志物,心肌营养素1对慢性心力衰竭的病理生理学机制起着重要的调节作用.慢性心力衰竭患者心肌营养素1血浆水平随着心力衰竭严重程度加重而升高.心肌营养素1参与交感神经元的胆碱能转化,参与诱导炎性细胞因子的产生,参与诱导心肌肥大和心室重构,加剧了慢性心力衰竭病程进展.心肌营养素1与慢性心力衰竭的诊断、治疗及预后价值评价相关联,是一个重要的生物学标志物.这些研究为今后慢性心力衰竭的临床预防、诊断、治疗及预后价值评价提供全新的信息.
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共存递质囊泡循环动力学研究细胞模型的建立
目的 直接证明PC12细胞能够合成和分泌组胺(histamine,HA),为将其应用于交感神经共存递质囊泡循环动力学研究提供实验依据.方法 常规培养PC12细胞,用嵌套RT PCR(nRT PCR)和Western blot技术检测其合成HA的关键酶组氨酸脱羧酶(histidine decarboxylase,HDC)的mRNA和蛋白表达,利用免疫荧光技术观测HA、HDC以及HA囊泡在细胞中的定位.结果 从基因和蛋白水平均证实了该细胞中表达HDC,并利用形态学方法在细胞中检测到HA、HDC以及HA囊泡的存在.结论 PC12细胞确实含有HA,结合分化型PC12细胞与交感神经元相似的特征,可将其作为交感神经共存递质囊泡循环动力学研究的理想细胞模型.