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抗纤复方含药血清对HSC-LI90细胞基质金属蛋白酶及其抑制因子基因表达的影响
目的:观察抗纤复方含药血清对肝星形细胞(HSC)LI90细胞(HSC-LI90)基质金属蛋白酶及其抑制因子基因表达的影响.方法:以0.5、2.0、4.0g/kg等不同剂量抗纤复方灌胃大鼠制备的含药血清,作用HSC-LI90细胞48h,应用Northern印迹杂交的方法,检测膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶-2及其抑制因子-1(TIMP-1)基因的表达,并用酶图法检测基质金属蛋白酶-2的活性.结果:抗纤复方含药血清抑制HSC-LI90细胞TIMP-1,增加HSC-LI90细胞膜型基质金属蛋白酶基因表达,对基质金属蛋白酶-2基因表达及其活性没有影响.结论:抗纤复方抑制HSC-LI90细胞TIMP-1基因表达水平,促进胶原降解,可能是抗肝纤维化的作用机制之一.
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抗纤复方药物血清对HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶及其组织抑制因子-1基因表达的影响
目的:探讨抗纤复方药物血清对肝星形细胞(HSC)LI90细胞(HSC-LI90)Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制因子(TIMP-1)基因表达的影响.方法:以0.5、2.0、4.0g/kg等不同剂量抗纤复方灌胃大鼠,制备药物血清,作用于HSC-LI90细胞48h,应用Northern印迹杂交的方法,检测Ⅰ型、Ⅳ型前胶原、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及膜型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)及其组织抑制因子(TIMP-1)基因的表达,并用酶图法检测基质金属蛋白酶-2的活性.结果:(1)抗纤复方不同浓度药物血清能抑制HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原及其组织抑制因子TIMP-1的基因表达(P＜0.05或P＜0.01);(2)能增加膜型基质金属蛋白酶基因表达(P＜0.01);(3)对基质金属蛋白酶-2基因表达及活性无影响(P＞0.05).结论:(1)抗纤复方具有抗肝纤维化作用;(2)抗纤复方抑制HSC-LI90细胞TIMP-1基因表达水平,促进胶原降解,可能是抗肝纤维化的作用机制之一.
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BTBD10基因的细胞、组织mRNA表达谱研究
目的 研究人BTBD10基因mRNA在不同组织、不同细胞系的表达水平.方法 用DIG-11-dUTP标记人BTBD10编码区基因作为探针,利用Northern blot杂交观察BTBD10 mRNA在14种正常人体组织和5种细胞株的表达水平.结果 BTBD10基因呈单一转录本.大小约为3 kb,BT-BD10基因表达较广泛,在各组织和细胞株中均有不同程度的表达,其中在脑、骨骼肌、脂肪、肝脏、主动脉、十二指肠、肺脏、胰岛B细胞株等表达较高,而胰腺、垂体、心脏中表达量低.结论 人BTBD10表达广泛,可能在多种组织中发挥重要作用.
关键词： BTBD10 基因表达 Northern印迹杂交 -
纤维连接蛋白在大鼠肺纤维化中的作用
目的 研究纤维连接蛋白(FN)在肺纤维化中的作用。方法 用免疫组织化学方法观察实验性大鼠肺纤维化纤维连接蛋白(FN)的动态变化；用Northern印迹杂交和免疫细胞化学方法分别观察FN对体外培养的大鼠肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA和蛋白表达的影响。结果 (1)实验性肺纤维化大鼠肺组织内FN的含量持续增多；(2)体外培养的肺成纤维细胞经FN作用2 h，Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达即增强，分别在12 h、6 h达到大值，平均吸光度(A值)为对照组的1.7、3.2倍；Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白的表达亦增强(P<0.01)。抗FN受体的抗体能部分抑制FN对胶原表达的上调作用(P<0.05)。结论 FN能够促进大鼠肺成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原，其调控机制之一是在转录水平上增强了前胶原mRNA的表达。
关键词： 纤维连接蛋白 胶原 Northern印迹杂交 免疫组织化学 -
抗纤复方含药血清对HSC-L190细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原、基质金属蛋白酶组织抑制因子1 mRNA表达影响的研究
目的 观察抗纤复方含药血清对肝星形细胞(HSC)L190细胞(HSC-L190)Ⅰ型(CoL-Ⅰ)、Ⅳ型前胶原(CoL-Ⅳ)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)mRNA表达的影响.方法 以不同剂量抗纤复方灌胃大鼠制备的含药血清,作用HSC-L190细胞48h,应用Northern印迹杂交的方法,测定其对细胞HSC-L190 CoL-Ⅰ,CoL-Ⅳ、TIMP-1 mRNA表达的影响.结果 抗纤复方0.5、2.0、4.0g/kg等不同剂量含药血清对HSC-L190细胞CoL-Ⅰ、CoL-Ⅳ、TIMP-1 mRNA表达.与空白对照组比较,具有显著性(P<0.05或P>0.01).结论 抗纤复方可降低HSC-L190细胞CoL-Ⅰ、CoL-Ⅳ、TIMP-1 mRNA表达水平,具有抗肝纤维化作用.
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转化生长因子-β1对大鼠肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原表达的影响
目的观察转化生长因子-β1(TGF-β1)对大鼠肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原和TGF-β表达的影响.方法应用Northern印迹杂交和免疫细胞化学法.结果经TGF-β1作用后,肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及其蛋白的表达增强,也可见TGF-β的mRNA杂交信号和其蛋白的阳性反应.结论 TGF-β1能够促进大鼠肺成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型前胶原;TGF-β能促进肺成纤维细胞自身合成TGF-β.认为肺成纤维细胞自分泌TGF-β是肺纤维化进行性进展的重要原因之一.
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纤维连接蛋白对大鼠肺成纤维细胞纤维连接蛋白和整合素α5β1表达的影响
目的研究纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及其受体整合素α5β1在肺纤维化中的作用。方法应用Northern印迹杂交和免疫细胞化学技术。结果经FN作用2 h，肺成纤维细胞α5β1和FN mRNA的杂交信号均增强，6 h达高值；FN作用6、12、24 h，免疫细胞化学染色显示整合素α5β1、FN蛋白的表达增强；经α5单克隆抗体预作用，FN作用组的肺成纤维细胞整合素α5β1和FN蛋白表达减弱，其抑制作用依次分别在6 h(α5β1)、12 h(FN)明显。结论 FN能直接刺激肺成纤维细胞合成FN或通过上调整合素α5β1的表达来促进自身合成FN。
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雌激素诱发大鼠原位与移植垂体催乳素瘤中催乳素基因与TGFα和TGFβ1基因的表达
利用本实验室建立的17β-雌二醇(17β-estradiol, E2)诱致Sprague-Dawley (SD)大鼠原位垂体和异体移植于肾囊的垂体同时形成催乳素(prolactin, PRL)瘤的动物模型, 采用Northern印迹杂交方法, 我们观察了E2长期作用(120 d)后诱发的原位与移植垂体 PRL瘤中PRL基因和两种转化生长因子(transforming growth factor, TGF) TGFα和TGFβ1基因表达水平的改变.结果表明: 在E2长期作用后, 原位垂体与异体移植于肾囊, 从而远离下丘脑的垂体均可形成垂体PRL瘤; 原位与移植垂体PRL瘤中均表现PRL基因的高表达, 但移植瘤中的PRL基因表达水平低于原位垂体瘤; 此外, 仅在原位垂体PRL瘤中发现上述两种转化生长因子呈较高水平的表达, 移植垂体PRL瘤与正常垂体中均检测不到这两种转化生长因子的表达.上述结果提示, TGFα和TGFβ1可能涉及E2诱发的原位垂体PRL瘤形成; E2诱发原位与移植垂体形成PRL瘤的机制可能不尽相同.
关键词： PRL瘤 移植 转化生长因子 Northern印迹杂交 -
抗纤复方含药血清对HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶基因表达的影响
目的:探讨抗纤复方含药血清对肝星形细胞(HSC)LI90细胞(HSC-LI90)Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶基因表达的影响.方法:以0.5、2.0、4.0g/kg等不同剂量抗纤复方灌胃,制备大鼠的含药血清,作用HSC-90细胞48小时,应用Northern印迹杂交的方法,检测Ⅰ型、Ⅳ型前胶原、基质金属蛋白酶-2及膜型基质金属蛋白酶基因的表达,并用酶图法检测基质金属蛋白酶-2的活性.结果:抗纤复方含药血清能抑制HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原、增加模型基质金属蛋白酶基因表达,对基质金属蛋白酶-2基因表达及活性无影响.结论:抗纤复方能下调Ⅰ型、Ⅳ型胶原的合成,增加模型基质金属蛋白酶基因的表达.
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WNK家族基因在小鼠肾脏表达的特性分析
目的检测WNK1和WNK4基因在小鼠肾脏组织中的表达位点.方法RT-PCR方法扩增WNK1和WNK4基因片段作为探针,在小鼠多组织膜上进行Northern印迹杂交.将上述片段克隆人pGEM-T载体,测序证实后,体外转录RNA探针并在小鼠肾脏石蜡组织切片上进行原位杂交.结果WNK1基因广泛表达在小鼠各组织中,在肾脏有9.5 kb强杂交信号.WNK4基因主要表达在肾脏组织中,有4.4 kb杂交信号.原位杂交显示WNK1基因仅表达在肾脏远曲小管中,而WNK4除表达在肾脏远曲小管外,还表达在髓质集合管上.结论WNK1和WNK4基因均在肾脏中有表达,WNK4基因在肾脏中表达比WNK1基因更广泛.
