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抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF-β1 mRNA的影响
目的:探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理.方法:分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养.用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞72h,提取细胞总RNA,RT-PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF-β1mRNA的表达.结果:抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-β1mRNA的表达.结论:抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-β1mRNAA的表达.
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抗纤复方药物血清对HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶及其组织抑制因子-1基因表达的影响
目的:探讨抗纤复方药物血清对肝星形细胞(HSC)LI90细胞(HSC-LI90)Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制因子(TIMP-1)基因表达的影响.方法:以0.5、2.0、4.0g/kg等不同剂量抗纤复方灌胃大鼠,制备药物血清,作用于HSC-LI90细胞48h,应用Northern印迹杂交的方法,检测Ⅰ型、Ⅳ型前胶原、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及膜型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)及其组织抑制因子(TIMP-1)基因的表达,并用酶图法检测基质金属蛋白酶-2的活性.结果:(1)抗纤复方不同浓度药物血清能抑制HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原及其组织抑制因子TIMP-1的基因表达(P＜0.05或P＜0.01);(2)能增加膜型基质金属蛋白酶基因表达(P＜0.01);(3)对基质金属蛋白酶-2基因表达及活性无影响(P＞0.05).结论:(1)抗纤复方具有抗肝纤维化作用;(2)抗纤复方抑制HSC-LI90细胞TIMP-1基因表达水平,促进胶原降解,可能是抗肝纤维化的作用机制之一.
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血清PCⅠ和PCⅢ联合测定诊断肝硬化的临床意义
测定血清Ⅰ型前胶原(PCⅠ)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的含量, 用于诊断肝硬化的临床评价. 用自行研制的PCⅠ、PCⅢ放免试剂盒, 同时测定100名健康献血员和162例各种肝病患者血清中PCⅠ、PCⅢ的含量. 结果显示, 肝硬化组与肝硬化合并肝癌组血清PCⅠ显著升高, 而其他各组不升高.PCⅢ在急性肝炎、原发性肝癌组升高, 慢性活动性肝炎和肝硬化组升高显著, 慢性迁延性肝炎和其他肝病组不升高. 并且, 血清PCⅠ与PCⅢ水平不相关(r=0.145, P＞0.05).结论: 测定血清PCⅢ对提示早期肝纤维化及其发展有意义, 而PCⅠ对判断肝硬化有重要价值, 因此我们认为血清PCⅠ和PCⅢ联合测定, 对诊断肝纤维化发展为肝硬变是有临床价值的.
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大黄素对肝纤维化大鼠肝脏组织中Ⅰ型前胶原mRNA表达的影响
目的 观察大黄素对四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化大鼠肝脏组织Ⅰ型前胶原mRNA表达的影响.方法 50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组 (n=10)、CCl4组 (n=20) 和大黄素+CCl4组 (n=20),共3组.采用40% CCl4橄榄油混悬液2ml/kg皮下注射(每周2次,共12周)法制备大鼠肝纤维化模型,同时大黄素灌胃干预,12周后处死大鼠.采用实时定量PCR法检测肝脏组织Ⅰ型前胶原mRNA表达.结果 与空白对照组比较,CCl4组大鼠肝脏组织Ⅰ型前胶原mRNA表达显著增加;与CCl4组比较,大黄素可显著减少肝脏组织Ⅰ型前胶原mRNA表达.结论 大黄素具有下调纤维化肝脏组织Ⅰ型前胶原mRNA表达的作用.
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AngⅡ对大鼠HSC表达ATR及Ⅰ型前胶原mRNA的影响
目的观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)对大鼠肝脏星状细胞(HSC)表达AngⅡ受体(ATR)及Ⅰ型前胶原mRNA的影响,探讨AngⅡ调控HSC分泌胶原的作用途径.方法 HSC分离培养后,采用细胞免疫技术、原位杂交技术及RT-PCR方法分别测定ATR和Ⅰ型前胶原mRNA表达水平.结果培养激活的HSC表达少量的AT1R蛋白和mRNA,10-6 mol/L AngⅡ刺激后AT1R 蛋白表达水平及mRNA转录水平显著升高,同时亦能促进Ⅰ型前胶原mRNA表达;而体外培养激活的HSC不表达AT2R,AngⅡ作用后亦不能刺激其表达.结论 AngⅡ能够促进激活的大鼠HSC表达AT1R,同时增强Ⅰ型前胶原mRNA表达,由此推测HSC表面AT1R的表达水平可能与胶原分泌有关.
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强脉冲光对皮肤成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达水平的影响
目的:研究强脉冲光(IPL)照射对体外培养的汉族人皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达水平的影响.方法:分离培养人原代成纤维细胞,采用波长为570～950 nm、能量密度为15J/cm2的IPL照射培养细胞.在照射结束后1、12、24及48 h收集细胞总RNA,应用反转录(RT)-PCR法测定各时间点成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达水平.结果:在IPL照射后12、24及48 h,成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达水平均明显上调(P＜0.05),且表达水平随孵育时间的延长呈增加的趋势.结论:IPL可直接促进成纤维细胞中Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA的转录,该研究部分阐明了IPL除皱的机制.
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200例慢性肝病患者血清学指标水平对诊断肝纤维化的临床意义
肝纤维化是肝硬化的早期阶段,目前主要依赖病理活检而确诊,但由于其创伤性以及难以进行动态观察而受到限制.本文测定了200例慢性肝炎与19例肝硬化合并肝癌患者和32例正常人血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层粘连蛋白(LN)、Ⅰ型前胶原(PC I)和肿瘤坏死因子(TNF)水平,旨在探讨其对肝病的诊断及预后的价值,为临床医生采用血清学指标动态观察慢性肝病发展及以血清标志物确诊肝硬化代替肝组织活检提供充分、可靠的依据.
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肺纤维化形成中Ⅰ、Ⅲ型前胶原的变化
为了观察肺纤维化形成过程中Ⅰ、Ⅲ型前胶原的变化,以及它在肺纤维化发生发展中的作用,我们用博莱霉素A5建立肺纤维化动物模型,第7、14、29天取肺组织用原位杂交的方法检测Ⅰ、Ⅲ前胶原的基因表达,发现两种前胶原在第7天表达至高峰,第29天Ⅰ型仍保持高水平,Ⅲ型已恢复正常.提示抑制Ⅰ型胶原,并保持Ⅲ型与Ⅰ型胶原正常比率的药物可能对防治肺纤维化有效.
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甲基阿魏酸对 TGF-β1刺激人肝星状细胞增殖及活化的抑制作用
目的：探讨甲基阿魏酸（MFA）对转化生长因子（TGF）-β1刺激人肝星状细胞（HSC）-LX-2增殖及活化的抑制作用。方法将体外培养的 HSC-LX-2细胞作为正常对照组，采用1μg／L TGF-β1刺激 HSC-LX-2进行细胞造模为模型组，药物组含终质量浓度为1μg／L 的 TGF-β1和0．3125、0．625、1．25、2．5、5、10、20、40 mg／L 的 MFA。根据 MTT 法检测MFA 对药物组 HSC-LX-2细胞增殖的影响，选择 MFA 作用浓度为1．25、2．5、5 mg／L 作为低、中、高剂量组，将细胞孵育72 h 后，采用 RT-PCR 法检测各组α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA、Ⅰ型前胶原（PCⅠ）mRNA 表达；采用 Western blotting 法检测各组α-SMA 蛋白表达；采用 ELISA 法检测各组 PCⅠ蛋白表达。结果在0．3125～5 mg／L 质量浓度范围内，随着MFA 质量浓度升高，HSC-LX-2细胞生长抑制率逐渐升高，呈浓度依赖性（P 均＜0．05）；当 MFA 质量浓度大于10 mg／L时，HSC-LX-2生长抑制率逐渐降低（P 均＜0．05）。在1．25～5．0 mg／L 范围内随 MFA 质量浓度逐渐增高，HSC-LX-2细胞中α-SMA 及 PCⅠ的 mRNA 及蛋白表达量逐渐降低（P 均＜0．05）。结论 MFA 可抑制 TGF-β1刺激的人肝星状细胞-LX-2增殖，减弱α-SMA、PCⅠ表达，抑制 HSC-LX-2细胞外基质的合成及 HSC-LX-2表型的转化。
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准分子激光术后大鼠角膜上皮下雾状混浊中Ⅰ型前胶原的测定
目的 探讨准分子激光术后大鼠角膜中Ⅰ型前胶原的变化,比较角膜非手术区、手术野透明区与上皮下雾状混浊(haze)区的Ⅰ型前胶原含量的差异.方法 32只6月龄清洁级SD大鼠按照手术前后被处死的时间不同平均分为8组.28只大鼠的一侧眼被施行准分子激光角膜切削术(PRK).术后每日裂隙灯显微镜下观察术眼角膜情况,角膜haze的分级参照Seiler标准.分别于手术前和术后1、3、7、15d及1、2、3个月处死动物,行苏木精-伊红染色,观察手术区角膜的形态变化,采用免疫组织化学法检测角膜Ⅰ型前胶原在术眼角膜组织中的表达,并以光密度(OD)值表示.对不同时间采集的角膜非手术区、手术野透明区与haze区中Ⅰ型前胶原含量进行定量分析.结果 自术后3d起,术眼角膜上皮开始移行覆盖切削区并逐渐增厚,基质纤维细胞增生活跃;术后1个月时术眼角膜上皮基底膜开始形成,基质胶原纤维排列紊乱;术后3个月角膜基质胶原重塑过程基本完成,角膜结构趋于正常.大鼠角膜术后haze分级与Ⅰ型前胶原含量呈正相关(r＝0.406,P＜0.05);非手术区各时间段角膜平均OD值均无明显变化(t=5.719,P＞0.05);手术区角膜中的Ⅰ型前胶原含量明显高于非手术区(P＜0.05);haze区平均OD值明显高于非haze区(t=5.578,P＜0.05). 免疫组织化学检测表明,角膜上皮中Ⅰ型前胶原的阳性表达在术后7d多,并终止于术后1个月,而角膜细胞间质中Ⅰ型前胶原持续至整个修复过程.结论 Ⅰ型前胶原含量的增加可能是haze形成的主要因素之一,为进一步研究准分子激光术后角膜前胶原的变化提供理论支持.
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虫草菌丝对肝纤维化小鼠肝脏脂质过氧化的影响
目的:明确虫草菌丝对四氯化碳小鼠肝纤维化的作用及肝脏脂质过氧化的影响.方法:四氯化(碳)皮下注射复制BALB/c小鼠肝纤维化模型,虫草组在造模同时予以虫草菌丝煎剂,直至造模结束.HE染色观察肝组织炎症天狼猩红染色观察肝脏胶原沉积,生化法测定肝组织羟脯氨酸(HyP)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,Nothern Blot测定Ⅰ型前(人)原mRNA.结果:与正常小鼠比较,肝纤维化小鼠肝脏肝静脉与汇管区周围肝细胞明显脂肪变性,肝脏胶原沉积,可见纤维(I)隔形成,肝脏Hyp含量及Ⅰ型前胶原基因表达均显著增加,肝脏SOD减少；与模型组比较,虫草组肝脏炎症与胶原沉积减(少)(P＜0.01),Hyp含量及Ⅰ型前胶原mRNA表达明显降低(P＜0.01),SOD活性明显增加(P＜0.01).结论:虫草菌丝制(剂)良好的抗肝纤维化作用,其作用机制可能提高肝脏SOD水平、降低Ⅰ型前胶原mRNA的表达有关.
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4-羟苯基维胺对瘢痕疙瘩成纤维细胞ProcollagenⅠ和MMP-1mRNA表达的影响
目的 探讨4-羟苯基维胺(4-HPR)对瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型前胶原(ProcollagenⅠ)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)mRNA表达的影响.方法 运用实时荧光定量PCR方法测定瘢痕疙瘩成纤维细胞中ProcollagenⅠ和MMP-1 mRNA表达情况.观察4-HPR对ProcollagenⅠ和MMP-1 mRNA表达的影响.结果 瘢痕疙瘩成纤维细胞中ProcollagenⅠmRNA表达明显高于正常皮肤成纤维细胞,而MMP-1 mRNA低表达,差异具有统计学意义.4-HPR不同浓度组瘢痕疙瘩成纤维细胞ProcollagenⅠmRNA表达水平明显减少,MMP-1 mRNA表达水平明显增加,差异具有统计学意义.结论 ProcollagenⅠ和MMP-1基因表达在瘢痕生成过程中起重要作用.4-HPR可抑制ProcollagenⅠ和促进MMP-1 mRNA表达水平.
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瘦素对小鼠肝纤维化影响的初步研究
近年研究发现,活化的肝星状细胞(HSC)的瘦素mRNA和蛋白质的合成增加[1],慢性肝病患者血清中瘦素水平亦升高[2].表明瘦素和肝纤维化的发生发展可能存在着一定的联系,现探讨瘦素对小鼠肝纤维化发展的影响和可能存在的机制.
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芦荟凝胶对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响
目的 研究芦荟凝胶(aloe gel,AG)对人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblast,HSFb)的增殖及胶原蛋白合成的影响.方法 原代培养人皮肤成纤维细胞,传代培养后加入不同浓度的芦荟凝胶作用后,应用流式细胞仪检测细胞周期变化,应用碱水解法检测培养液中羟脯氨酸的含量变化,应用免疫组化法检测芦荟凝胶对成纤维细胞Ⅰ型前胶原合成的影响.结果 细胞周期时项分析结果显示5%、10%浓度芦荟凝胶处理组细胞周期S+G2/M期细胞百分率及增殖指数PI值较对照组增高(P<0.05),但在不同时间点检测的细胞周期差异无统计学意义(P>0.05).各浓度芦荟组在不同时间段时其成纤维细胞培养液中羟脯氨酸含量均明显高于空白对照组(P<0.05).经10%浓度芦荟凝胶处理后的成纤维细胞Ⅰ型前胶原表达增加(P<0.05).结论 芦荟凝胶能有效促进人皮成纤维细胞的增殖和胶原的合成.
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TGF-β/Smad信号转导通路对紫外线致人工皮肤光损伤中MMP-1、pro-collagen I mRNA表达影响的初步研究
目的 探讨人工皮肤光损伤中TGF-β/Smad信号转导通路与基质金属蛋白酶1及Ⅰ型前胶原蛋白的相互作用.方法 以紫外线照射人工皮肤后,通过Real-Time RT-PCR法(荧光染料掺入法)检测其中基质金属蛋白酶1、Ⅰ型前胶原蛋白、TGFβR Ⅰ及TGFβRⅡmRNA的表达量.结果 紫外线使人工皮肤中基质金属蛋白酶1(MMP-1)的mRNA表达量明显增加,而Ⅰ型前胶原蛋白mRNA的表达下调(P＜0.05),TGFβRⅡmRNA表达显著下调(P＜0.01);加入TGF-β1后MMP-1表达显著下调(P＜0.01),Ⅰ型前胶原蛋白及TGFβRⅡmRNA表达显著增高(P＜0.01);而UV照射后8小时加入TGF-β1,MMP-1表达量较对照组高(P＜0.05),Ⅰ型前胶原蛋白及TGFβRⅡmRNA表达量均较对照组低(P＜0.05).结论 UV可以抑制人工皮肤中Ⅰ型前胶原mRNA的表达、上调MMP-1的表达,而这种调控作用可能与TGF-βRⅡ的表达受抑制,TGF-β/Smad信号传导通路被削弱有关.
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替米沙坦对压力超负荷左心室肥厚大鼠心肌Ⅰ型胶原代谢的影响
目的:探讨压力超负荷左心室肥厚大鼠Ⅰ型胶原代谢特点及替米沙坦的干预效果.方法:24只雄性SpargueDawley大鼠随机分为假手术组(n=8)、左心室肥厚组(n=8)和替米沙坦组(n=8).行腹主动脉缩窄术建立高血压左心室肥厚大鼠模型.各组干预4周后处死大鼠,称其体质量及左心室质量,计算左心室质量指数(LVMI).将左心室心肌行Masson染剂染色,观察并测量其胶原容积分数(CVF).用ELISA法检测3组大鼠血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PICP)及Ⅰ型胶原羧基端交联肽(ICTP)的浓度,并计算PICP/ICTP的比值,直线相关分析PICP及PICP/ICTP比值与CVF的相关性.结果:与假手术组相比,左心室肥厚组左心室质量、LVMI、CVF、血清PICP及PICP/ICTP的比值均显著升高(均P＜0.05);与左心室肥厚组相比,替米沙坦组左心室质量、LVMI、CVF、血清PICP、HCP/ICTP的比值均显著降低(均P＜0.05).3组间的ICTP相比较,差异无统计学意义;PICP及PICP/ ICTP比值均与CVF呈正相关(r值分别为0.830、0.842,均P＜0.01).结论:压力超负荷左心室肥厚大鼠Ⅰ型胶原合成增加、降解相对不足,合成与降解的不平衡是造成其左心室心肌间质纤维化的原因之一.替米沙坦可以抑制Ⅰ型胶原的合成,纠正其合成与降解不平衡,从而有效地抑制及逆转心肌间质纤维化.
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雷公藤甲素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响
目的 探讨雷公藤甲素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响.方法 取手术切除的瘢痕疙瘩组织作成纤维细胞的原代培养,传代培养后加入不同浓度的雷公藤甲素作用,观察细胞的形态学变化,应用MTT法检测细胞的活性,应用免疫组化和Western-blot法检测雷公藤甲素对瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型前胶原合成的影响.结果 雷公藤甲素能显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,且存在一定的浓度依赖性;雷公藤甲素作用后瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型前胶原表达减弱.结论 雷公藤甲素能有效抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和Ⅰ型、Ⅲ型前胶原的合成.
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4-HPR对瘢痕疙瘩成纤维细胞Procollagen Ⅰ、MMP-1及信号通路PI3K/Akt的影响
目的 探讨4-羟苯基维胺(4-hydroxyphenyl-retinamide,4-HPR)对瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用及PI3K/Akt信号转导通路的影响.方法 通过免疫印迹方法检测人瘢痕疙瘩成纤维细胞中,4-HPR对Ⅰ型前胶原(type Ⅰ pro-collagen,Procollagen Ⅰ)和基质金属蛋白酶-1(matrix metallo-protein-1,MMP-1)蛋白表达水平,观察4-HPR联合TGF-β1、PD98059、SP600125、SB203580及LY294002对瘢痕疙瘩成纤维细胞中相关蛋白表达的影响.结果 瘢痕疙瘩成纤维细胞中,4-HPR使Procollagen Ⅰ蛋白表达水平明显减少,MMP-1蛋白表达水平明显增加,并且具有4-HPR浓度依赖性(P＜0.01).在瘢痕疙瘩成纤维细胞中,4-HPR+ TGF-β1组中Procollagen Ⅰ蛋白表达水平较TGF-β1组明显降低(P＜0.01),但P-Smad2和P-Smad3蛋白表达均无显著改变(P＞0.05).LY294002组中Procollagen Ⅰ蛋白水平与对照组相比显著降低,MMP-1显著升高(P＜0.01).但PD98059、SB203580及SP600125组中Procollagen Ⅰ和MMP-1蛋白水平与对照组相比未发生明显变化(P＞0.05),且4-HPR可有效抑制P-Akt蛋白表达水平(P＜0.01).结论 人瘢痕疙瘩成纤维细胞中,4-HPR可以抑制Ⅰ型前胶原蛋白的表达、上调MMP-1的表达,而这种调控作用可能与PI3K/Akt信号传导通路被削弱有关.
关键词： PI3K/Akt信号通路 4-羟苯基维胺 Ⅰ型前胶原 瘢痕疙瘩 -
姜黄素对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用
目的:观察姜黄素体外抗增生性瘢痕的作用.方法:以增生性瘢痕成纤维细胞为靶细胞,分别用不同浓度的姜黄素培养液培养,MTT法测定细胞的增殖情况,透射电镜进行形态学检测,流式细胞仪技术结合PI及Annexin V双标记染色检测姜黄素的促凋亡作用,实时荧光定量聚合酶链反应检测Ⅰ,Ⅲ型前胶原及Bcl-2 mRNA的表达情况.结果:姜黄素对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖有抑制作用;透射电镜观察发现,处理组凋亡细胞增多,凋亡细胞表现出典型的超微结构特征;流式细胞仪检测发现,随着药物浓度的增加,增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡率也在逐渐升高;实时荧光定量聚合酶链反应检测结果显示,姜黄素处理后Ⅰ、Ⅲ型前胶原及Bcl-2 mRNA的表达水平均下调.结论:姜黄素具有一定的体外抗增生性瘢痕的作用.
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Ⅰ、Ⅲ型前胶原、透明质酸及层粘蛋白在颅脑创伤后脑积水中的意义
目的探讨Ⅰ型前胶原(PICP)、Ⅲ型前胶原(PⅢNP)、透明质酸(HA)及层粘蛋白(LN)在颅脑创伤后慢性脑积水发生机制中的意义.方法放射免疫法分别测定32例颅脑创伤后慢性脑积水患者及29例非脑积水患者(对照组)脑脊液(CSF)中的PICP、PⅢNP、HA、LN水平.结果创伤后慢性脑积水脑脊液中PICP、PⅢNP、HA、LN含量均显著高于对照组(P＜0.01).结论脑脊液中PICP、PⅢNP、HA、LN的增高及蛛网膜纤维化在颅脑创伤后慢性脑积水形成中发挥重要作用.
