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HIV-1 B'亚型R5或R5/X4嗜性毒株在GHOST细胞的感染性分析
目的 分析我国HIV-1B'亚型R5或R5/X4嗜性毒株在GHOST细胞的感染性.方法 采用传统的共培养方法从HIV-1感染者PBMC中分离并培养病毒,用表达CD4和趋化因子受体CCR5或CXCR4的GHOST细胞系,测定毒株的辅助受体利用情况,使用相同病毒量即2 ng的HIV-1 p24分别感染表达不同受体的GHOST细胞系,通过流式细胞仪检测分析绿色荧光蛋白(GFP)的表达反映病毒感染细胞的能力.结果 35例B'亚型毒株利用CCR5受体,占22例(62.85%),双嗜性即CCRS/CX-CR4均阳性占13例(37.15%).GHOST-R5/X4细胞的感染性分析结果显示,R5/X4双嗜性毒株的感染性明显高于CD4＞200/ta的R5毒株的感染性(P＜0.05);R5/X4毒株与CD≤200/μl的R5毒株感染性比较差异无统计学意义(P＞0.05);CIM＞200/μl的R5毒株与CD4≤200/μl的R5毒株感染性比较差异有统计学意义(P＜0.05);GHOST-CCR5细胞感染性分析结果显示:R5/x4双嗜性毒株的感染性明显下降,与CD4＞200/μl的R5毒株的感染性比较差异无统计学意义(P＞0.05).利用相同剂量的双嗜性毒株分别感染R5、X4或R5/X4的GHOST细胞系,显示双嗜性毒株可同时利用CCR5和CXCR4辅助受体,但69.23%的R5/X4毒株以CCR5受体为主,30.77%的R5/X4毒株CXCR4受体为主.结论 HIV-1 B'亚型R5/X4病毒不仅有更广泛的宿主细胞嗜性,而且在GHOST-R5/X4细胞中感染性明显提高.持续使用CCR5受体的毒株在疾病进展的过程中虽然辅助受体的利用是一样的,但病毒感染细胞的能力增加.
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HIV-1 B'亚型gag-env融合基因的DNA疫苗构建和免疫原性分析
目的构建HIV-1 B'亚型中国流行株gag和env融合基因的DNA疫苗,对其免疫原性进行研究.方法根据已报道的HIV-1 B'亚型RL42分离株gag和env基因的氨基酸序列按哺乳动物密码子使用频率进行优化并人工合成基因,插入真核表达载体pDRVISV1.0中,构建表达RLA2 gag-env融合蛋白的DNA疫苗,pSVRL/GE.用Western blot和抗gag p55抗体细胞内染色的方法体外检测pSVRL/GE的表达效率.DNA疫苗pSVRL/GE免疫BALB/c小鼠后,用ELISPOT检测小鼠的细胞免疫反应.结果限制性内切酶鉴定表明融合基因已成功插入pDRVISV1.0载体中,Western blot证实融合基因可有效表达融合蛋白;细胞内染色结果表明,pSVRL/GE转染的293T细胞中49.8%表达gag p55,荧光强度均值为924;而空载体pDRVISV1.0转染的293T细胞中非特异背景染色只有0.5%.经免疫的小鼠脾细胞体外用H-2d限制性表位肽AMQMLKET刺激后,ELISPOT检测显示,pSVRL/GE免疫小鼠每106脾细胞形成226个斑点(SD=140),而空载对照组每106脾细胞形成29个斑点(SD=16)(P＜0.05).结论所构建的DNA疫苗pSVRL/GE可高效表达相应抗原蛋白,并可有效激活机体的细胞免疫反应.
