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番荔枝内酯化合物对人肝癌细胞株HepG2的作用
目的 研究番荔枝内酯AS-4在体外对人肝癌细胞株HepG2生长的抑制作用.方法 设AS-4不同浓度组(6.25、12.5、25、50μg/mL)、顺铂阳性对照组(25 μg/mL)和空白对照组,常规培养24、48 h,进行MTT比色试验和倒置相差显微镜观察.结果 AS-4可明显抑制HepG2细胞的生长,高抑制效应达到91.68%,且有细胞毒性的时间和剂量依赖关系.48 h IC50为6.67 μg/mL.结论 番荔枝内酯AS-4在体外对人肝癌细胞株HepG2有杀伤作用,显示出较强的细胞毒活性.
关键词： 番荔枝内酯 HepG2肝癌细胞株 四甲基偶氮唑蓝 -
携带TRAIL基因的新型溶瘤病毒体外诱导肝癌细胞凋亡
目的: 评价携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL在人肝癌细胞株中介导TRAIL基因表达及对肝癌细胞的凋亡诱导作用.方法: CNHK500-hTRAIL感染人肝癌细胞株HepG2、Hep3B以及人正常肝细胞株WRL-68,通过增殖实验观察病毒的选择性增殖能力, 并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL蛋白的表达量, 四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肝癌细胞的功效, 流式细胞术(FCM)检测其对细胞早期凋亡的影响.结果: CNHK500-h TRAI L能选择性地在HepG2、Hep3B细胞内高效增殖; 感染72 h后HepG2、Hep3B细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为167.4、173.22 ng/L; 在MOI = 0.1时, CNHK500-hTRAIL即可明显杀伤HepG2、Hep3B细胞, 并选择性地诱导细胞早期凋亡,均显著高于空病毒CNHK500及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL; 而对人正常肝细胞株WRL-68则无明显杀伤作用.结论: 携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒载体对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达, 明显优于单纯的病毒载体及传统的非增殖型腺病毒载体, 应用前景广阔.
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人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的建立及其生物学特征
目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,探讨其生物学特征.方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用方法历时9 mo建立耐药细胞系Ec9706/cDDP,采用MTT法测定其对cDDP的耐药指数,观察冻存、撤药对耐药性的影响,比较耐药与亲本细胞生长曲线、群体倍增时间及贴壁率的不同,流式细胞仪测细胞周期,软琼脂实验测细胞的恶性增殖能力,罗丹明实验测其对药物的摄入、排出能力.结果:人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的耐药指数为15.7,冻存对耐药性影响不大,撤药培养可使耐药性降低,耐药细胞群体倍增时间延长(29.79±0.48 h vs 25.79±0.45 h,P＜0.05),生长缓慢,G0/G1、S期细胞比例增加(63.18%±5.21% vs 52.81%±4.36%,P＜0.05;36.49%±3.93% vs 26.70%±2.62%,P＜0.05),G2期细胞减少(0.33%±0.02% vs 20.49%±3.71%,P＜0.05),克隆形成率明显高于亲本细胞(69% vs 24%,P＜0.05),对罗丹明的摄入减少,排出增多.结论:成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,且耐药性较稳定.
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Genistein-磁性纳米微粒对胃癌细胞株SGC-7901生长及凋亡的影响
目的:探讨Genistein-磁性纳米微粒(Genistein-magnetic-nanoparticles.GEN-M-NPs)对胃癌细胞株SGC-7901生长及凋亡的影响.方法:利用化学共沉淀法制备GEN-M-NPs,透射电镜观察纳米微粒的形态,高效液相法测定包封率.以胃癌细胞株SGC-7901为实验对象,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察GEN-M-NPs和Genistein对其增殖活性的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段化改变情况.结果:GEN-M-NPs呈球形,粒径约105 nm,分布均匀.包封率约为10.3%.GEN-M-NPs对SGC-7901细胞生长有明显抑制作用,且呈剂量和时间依赖性(P＜0.05).与单药Genistein作用组相比,GEN-M-NPs具有缓释性(86.04%vs 67.11%.P＜0.05).流式细胞仪检测不同浓度GEN-M-NPs作用72 h后的细胞凋亡率分别是5.62%±2.04%(10 μmol/L)、13.46%±2.02%(20 μmol/L)、26.40%±3.84%(40μmol/L)、37.34%±4.68%(80 μmol/L)、49.43%±8.29%(100 μmol/L).阴性对照组的凋亡率为2.60%±1.34%.DNA凝胶电泳结果显示40 μmol/L组作用24 h可见明显的凋亡细胞形成的梯状条带.结论:GEN-M-NPs在体外能有效地抑制胃癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,与Genistein相比,有缓释性.
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三氧化二砷诱导人类大肠癌细胞凋亡的分子机制
目的:明确三氧化二砷(As2O3)注射液对人类大肠癌细胞株的诱导凋亡作用,并探讨其分子机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、AO/EB荧光染色法、透射电镜观察、DNA电泳、流式细胞术法及免疫组化等方法,系统地观察了As2O3注射液对体外培养的人类大肠癌细胞株LoVo和CoLo-320的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及其相关基因表达的影响.结果:用不同浓度(0.5,1.0,2.0,4.0 mg/L)As2O3作用LoVo和CoLo-320细胞不同时间(24,48,72 h),均能显著抑制其生长(P＜0.05),用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡的形态学和生化学改变,癌细胞Bcl-2基因表达明显下降,Bax和Fas基因表达显著增强(P＜0.01).结论:As2O3注射液对人类大肠癌细胞具有显著的诱导凋亡作用,这一作用受到多种基因的调控,即Bcl-2基因表达下调,Bax和Fas基因表达上调.
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丝裂霉素C联合抗Fas单抗、C2神经酰胺对人膀胱癌T24细胞的抑制作用
化学治疗是膀胱癌术后治疗的重要方法,但药物的毒副作用和肿瘤的耐药现象常使治疗归于失败.合理的联合用药可以获得协同作用,减少用药剂量,降低毒副反应,延缓耐药性产生.本研究于2004年9月至11月于2004年9月至11月应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测丝裂霉素C(MMC)、抗Fas单抗和C2神经酰胺(C2-Cer)对人膀胱癌T24细胞株生长的抑制作用,并应用Chou-Talalay联合指数法[1]判定药物之间联合应用的效果.
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脱氧氟尿苷用于提高人卵巢癌细胞株对顺铂敏感性的研究
肿瘤细胞减灭术及术后化学药物治疗(化疗)是目前治疗卵巢癌的主要手段,以铂类为基础的联合化疗明显改善了晚期卵巢癌患者的治疗效果,但耐药性的产生严重影响其化疗效果.本研究采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、免疫细胞化学链霉菌抗生物素-过氧化物酶连接(SP)法和流式细胞术等方法,分析了脱氧氟尿苷(FUDR)作用后卵巢癌细胞株CAOV3对顺铂敏感性的变化,并初步探讨其机理,为临床制定有效的联合化疗方案提供理论依据.
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西罗莫司对人脐带动脉平滑肌细胞的增殖抑制作用
目的 考察西罗莫司对体外培养的人脐动脉平滑肌细胞的增殖抑制作用和对白细胞介素-6表达的影响.方法 组织块贴壁法原代培养人脐动脉平滑肌细胞,利用传3代的细胞进行实验.四甲基偶氮唑蓝法分别测定西罗莫司在不同作用时间(3 ～96 h)和不同作用浓度(2.19～1090nmo1· L-1)下对人脐动脉平滑肌细胞的增殖抑制作用;采用逆转录-聚合酶链反应法和酶联免疫吸附实验分别法测定不同浓度的西罗莫司(2.19、10.9、109 nmol· L-1)对人脐动脉平滑肌细胞表达白细胞介素-6mRNA和白细胞介素-6因子的影响.结果 人脐动脉平滑肌细胞传3代后阳性细胞率＞90％.西罗莫司在不同作用时间和不同作用浓度下对人脐动脉平滑肌细胞增殖均有抑制作用(P＜0.05),作用时间为48 h时抑制率为(30.25±2.40)％,药物浓度为164 nmol·L-1时抑制率为(42.88±3.84)％.高、中、低3种浓度的西罗莫司均可抑制人脐动脉平滑肌细胞表达白细胞介素-6 mRNA(P ＜0.05)和白细胞介素-6因子(P＜0.05),并呈剂量依赖性.结论 西罗莫司对体外培养的人脐动脉平滑肌细胞增殖有抑制作用,并能抑制人脐动脉平滑肌细胞表达白细胞介素-6 mRNA和因子.
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隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖及血管内皮生长因子mRNA表达的影响
目的 通过测定隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,采用Real Time RT-PCR检测隐丹参酮对VEGF mRNA表达的影响.结果 20、40、60、80、100 μmol/L的隐丹参酮作用于人胃癌SGC-7901细胞6～48 h,其生长和增殖均受到一定程度的抑制;24h为隐丹参酮对SGC-7901细胞抑制作用的佳时间,IC50为59.11 μmol/L;选取40、60和80 μmol/L 3个剂量作用于人胃癌细胞SGC7901 24 h后,60和80 μmol/L的隐丹参酮均可下调VEGF mRNA的表达(均P＜0.01).结论 隐丹参酮可抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,并能抑制VEGF mRNA的表达,提示这可能是其抗肿瘤的作用机制之一.
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纳米羟基磷灰石人工心脏机械瓣膜对细胞毒性评价
目的 用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测羟基磷灰石(HA)对人脐带内皮细胞可能存在的细胞毒性.方法 用MTT比色方法评价材料的细胞毒性.设常温浸提液组和高温浸提液组.两组均设置各自对应的阳性和阴性对照组.将加入浸提液和材料并培养72 h后的各组样品分别在倒置相差显微镜下观察细胞在浸提液中及在材料边缘的形态变化及生长状况,以细胞毒性实验来评价生物材料生物相容性.参照国际标准化组织(ISO)制定的细胞毒性实验的标准,即ISP10993-5:1992<医疗器械生物学评价细胞毒性实验体外法>之评价标准和要求.结果 材料浸提液与细胞共培养组24 h时观察常温浸提液、高温浸提液及阴性对照组的HUVEC细胞形态、数量,各实验组与阴性对照组差异无统计学意义.结论 HA材料对人脐带内皮细胞生长抑制反应级别为1级或0级,无明显毒性作用,有良好的细胞相容性.
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四甲基偶氮唑蓝法测定植酸酮对HeLa细胞的作用
目的:分析植酸酮妇科清洗装置(商品名:美福康)Ⅱ型l号及2号对体外培养的HeLa细胞生长的抑制作用,为后期实验提供实验依据.方法:体外培养HeLa细胞,分为实验组和对照组,实验组从8个浓度水平上给药,分别经过24,48,72h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测药物对HeLa细胞增殖的影响.结果:与对照组相比,经2种型号的药物作用后的HeLa细胞存活率降低,凋亡增加,作用呈时间-剂量依赖关系.结论:植酸酮妇科清洗装置Ⅱ型1号及2号均能有效抑制宫颈癌HeLa细胞的生长.
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甜瓜蒂3种提取物体外抗肿瘤活性的比较研究
目的 观察甜瓜蒂3种提取物对体外培养肿瘤细胞增殖的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法以溶剂提取法分别得到甜瓜蒂的水提取物、75%乙醇提取物、95%乙醇提取物.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测这3种提取物对人胃腺癌细胞SGC-7901、人肺癌细胞NCI-H460、人肝癌细胞SMMC-7721、人白血病细胞K562及小鼠成纤维细胞L929的增殖抑制作用.应用流式细胞术检测样品对细胞周期和凋亡的影响.结果甜瓜蒂水提取物、75%乙醇提取物、95%乙醇提取物作用72 h后,在测定的浓度范围内对SGC-7901、NCI-H460、SMMC-7721、K562及L929等5种细胞均表现出不同程度的生长抑制作用,量效关系基本明确.甜瓜蒂75%乙醇提取物、95%乙醇提取物组对各细胞的半数抑制浓度(IC50)均低于水提取物组(均P<0.05),其中95%乙醇提取物组对SGC-7901、SMMC-7721、K562及L929细胞的IC50明显低于75%乙醇提取物组(均P<0.05).5种细胞中SGC-7901对甜瓜蒂提取物较为敏感,该细胞经0.4、0.6、0.8 mg/L的95%乙醇提取物作用48 h后,细胞凋亡率分别为(8.32±0.55)%、(11.06±1.15)%、(12.25±1.51)%;细胞被阻滞在S期、G2/M期.结论甜瓜蒂95%乙醇提取物体外对SGC-7901具有显著的抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡和抑制细胞周期有关.
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细胞毒性试验测定麻痹性贝毒素的检测方法
目的建立测定麻痹性贝毒素的细胞毒性试验.方法体外培养小鼠神经母细胞瘤细胞,用石房蛤毒素为标准品,刊用其钠通道阻断剂的特性,以四甲基偶氮唑蓝标定活细胞量,建立麻痹性贝毒素剂量与吸光度之间的标准曲线.结果箭毒/藜芦碱对照组OD值平均为0.385 0,石房蛤毒素在0.2～0.6ng剂量范围内与吸光度值呈直线相关关系,得回归方程为y=0.399 6+0.503x(r=0.988 0,P＜0.02).结论在0～0.6ng剂量范围内,石房蛤毒素剂量与所测的OD值呈现剂量反应关系,该细胞毒性试验方法可用于麻痹性贝毒素的检测.
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三氧化二砷对体外培养A375黑色素瘤细胞的生长抑制作用及机制初步研究
目的 为了解三氧化二砷(As2O3)对体外培养的A375黑色素瘤细胞的生长及谷胱甘肽过氧化物酶活力和血管生长因子(VEGF)含量的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法检测1.50、3.00、6.00、12.00、24.00 μ mol/L As2O3与分别与A375黑色素瘤细胞作用24h、48h、72h后对黑素瘤细胞的抑制作用;测定作用24h的A375黑色素瘤细胞所含的谷胱甘肽过氧化物酶活性及VEGF含量.结果 相同作用时间内,各浓度的As2O3对A375瘤细胞的生长均有明显的抑制作用,As2O3的浓度越高,对培养的A375瘤细胞的增殖抑制作用越强,经过统计学独立样本的t检验分析,差别有统计学意义;各浓度As2O3与A375黑色素瘤细胞作用24h后,瘤细胞的谷胱甘肽过氧化物酶活力均有明显的降低,在As2O3浓度为6.0μmol/L时,A375瘤细胞的酶活性相对高,低于此浓度或高于此浓度时,酶活力呈递减的趋势;VEGF含量均有增加,As2O3,浓度为3.0μmol/L时达到峰值,低于此浓度或高于此浓度时呈递减的趋势.经过统计学独立样本的t检验分析,差别均有统计学意义.结论 As2O3对A375瘤细胞的生长有明显的抑制作用,并呈现浓度依赖性;作用24h,As2O3显著降低A375瘤细胞谷胱甘肽过氧化物酶活力,并增加VEGF的含量.
关键词： 三氧化二砷 A375黑色素瘤细胞 四甲基偶氮唑蓝 谷胱甘肽过氧化物酶 VEGF -
复方芜荑水和醇提取物抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的体外作用的研究
目的:探讨复方芜荑水和醇提取物体外抗Ⅰ型单纯疱疹病毒(Herpes Simplex Virus-Ⅰ,HSV-Ⅰ)的活性.方法:运用细胞病变法(CPE)及MTT染色法观察复方芜荑水和醇提取物体外对HSV-Ⅰ所致细胞病变的抑制作用、感染的预防作用和对HSV-Ⅰ的直接杀伤作用.结果:复方芜荑水和醇提取物体外有抑制HSV-Ⅰ所致CPE的作用,并且可持续抑制.31.25 mg/ml复方芜荑水提物作用24h和72h后对细胞病变的抑制率分别为69.69%和69.79%;15.625 mg/ml醇提物作用24h和72h后对细胞病变的抑制率分别为50.26%和52.73%.其水提物效果优于醇提物,但两者对于HSV-Ⅰ的直接杀伤作用和感染的预防作用均较弱.结论:复方芜荑体水和醇提取物外有抗HSV-Ⅰ的活性.
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姜黄素对肾小球系膜细胞增殖的影响及其意义
目的:观察姜黄素对体外培养的人肾小球系膜细胞(MC)增殖的影响.方法:采用不同浓度姜黄素处理体外培养的人肾小球系膜细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定系膜细胞活性(A值),并与地塞米松进行比较.结果:当姜黄素浓度≥6.25 μmol/L时,系膜细胞增殖明显受到抑制,且表现为浓度依赖性;当姜黄素浓度≥50 μmol/L时,姜黄素抑制系膜细胞增殖的作用明显强于地塞米松(P＜0.05).结论:姜黄素能抑制体外培养的人肾小球系膜细胞增殖,且作用强于地塞米松.
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干扰能及联合化疗药物对人肺腺癌细胞A549生长的影响
1997年6月～1998年6月我院采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法,首次体外观察了干扰能及联合化疗药物对人肺腺癌细胞A549生长的影响,旨在为肺癌的治疗提供有价值的实验依据.
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阿魏酸乙酯对过氧化氢损伤人血管内皮细胞的保护作用
目的:观察阿魏酸乙酯对人血管内皮细胞的保护作用.方法:实验分对照组、模型组、阿魏酸4个剂量组、阿魏酸乙酯4个剂量组.过氧化氢诱导血管内皮细胞损伤,用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞存活数量,用比色法测细胞培养液中过氧化物丙二醛含量及乳酸脱氢酶的活性.结果:阿魏酸乙酯及阿魏酸不同剂量(2,4,8,16 nmol·L-1)对过氧化氢损伤的人血管内皮细胞具有保护作用,可抑制过氧化氢损伤的血管内皮细胞释放乳酸脱氢酶和丙二醛.相同剂量组的阿魏酸乙酯的作用强于阿魏酸.结论:阿魏酸乙酯具有减轻过氧化氢损伤,保护血管内皮细胞的作用,并且其作用强于阿魏酸.
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口腔癌患者外周血NK细胞活性的临床意义
我们采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定33例口腔癌患者外周血NK细胞活性,并以正常人群作对照,观察不同病理类型、分化程度及分期的癌症患者NK细胞活性水平,探讨NK细胞活性的检测对口腔癌辅助诊断价值及临床应用前景.
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血小板源生长因子诱导人胚胎肺纤维细胞增殖信号转导通路研究
目的 研究血小板源性生长因子(PDGF)对人胚胎肺纤维细胞(HFL1)的增殖作用.方法 采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度PDGF对HFL1的增殖作用,观察不同浓度细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059、p38激酶抑制剂SB203580及PI-3K激酶抑制剂Wortmannin(WMN)对PDGF诱导HFL1增殖作用的影响.结果 PDGF 50 ng/ml时对HFL1的诱导增殖作用明显,并呈剂量依赖性;PD98059 1 μmol/L、WMN 100 nmol/L、SB203580 5 μmol/L可抑制 PDGF诱导的HFL1增殖.结论 PDGF诱导HFL1增殖是通过蛋白激酶和 PI-3K信号转导途径实现的.
