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新型液相芯片复合检测5种鼠传病原体方法的建立
目的 建立一种能同时检测5种鼠传病原体:流行性出血热病毒(Epidemic hemorrhagic fever,EHF)、斑疹伤寒立克次体(Rickettsia typhi,TY1)、鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis,YP)、恙虫病立克次体(Rickettsia tsutsugamushi,RST)、钩端螺旋体(Leptospira,Lep)的液相芯片多重检测方法；方法 针对5种病原的全基因组序列,分别设计特异性引物,并将上游引物5'端分别偶联一些特定的核酸片段作为标签(TAG),下游引物5’端标记生物素,PCR扩增后产物与微球进行杂交,后利用液相芯片检测系统分析结果.结果 建立的方法能同时完成对5种病原体Bio-plex100病原体及其中任何1种的检测,特异性好,灵敏度低可达3 fg/test.结论 通过利用偶联有TAG及生物素的引物对,成功建立了可同时检测5种鼠传病原的液相芯片检测方法,具有较高的灵敏度和特异性.该方法对于鼠传病原体的检测具有较好的应用前景.
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应用TaqMan探针实时荧光定量PCR法调查北京市部分城郊区鼠传病原体流行状况
目的 调查北京市部分城郊区6种鼠传病原体流行状况.方法 将已报道的TaqMan探针实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法在本实验室进行评估,制备质粒标准品和绘制标准曲线,依据重新评估的数据确定结果的检测阈值.2017年1-6月应用夹夜法在北京市朝阳、怀柔、门头沟和平谷4个地区捕获啮齿动物,采集组织样品提取核酸,应用上述qPCR方法检测病原体.结果 共捕获啮齿动物160只,其中褐家鼠59只、小家鼠69只、朝鲜姬鼠4只、北社鼠25只和鼩鼱3只.检测动物脾组织结果显示,除鼩鼱外其他啮齿动物均分别感染莫氏立克次体(8.1％)、恙虫病东方体(1.3％)、嗜吞噬细胞无形体(5.6％)、钩端螺旋体(18.7％)和巴尔通体(5.0％);所有动物中均未检测到土拉弗朗西斯菌.褐家鼠和小家鼠中存在钩端螺旋体、嗜吞噬细胞无形体等多种病原体复合感染情况.结论 北京地区的啮齿动物可携带多种常见、新发及再发传染病病原体,应关注并加强该地区这些病原体动物宿主和传播媒介的分布调查及相关传染病的防制工作.
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黑龙江省逊克县火山熔岩地区啮齿动物携带病原体调查
目的 调查黑龙江省逊克县火山熔岩地区啮齿动物携带病原体状况.方法 2014年4-9月,采集啮齿动物样本107只,解剖取脏器肺、肾、肝、肾和膀胱样本,采用PCR方法分别扩增10种鼠传病原体的特异性核酸片段,通过基因测序进一步鉴定.结果 在107份鼠肺中共检出汉城型汉坦病毒RNA核酸阳性样本5份,感染率为4.67％;107份鼠肾中共检出钩端螺旋体DNA核酸阳性样本6份,感染率为5.61％;107份鼠脾中共检出巴尔通体DNA核酸阳性样本7份,感染率为6.54％,嗜吞噬细胞无形体4份,感染率为3.74％;107份鼠肝、鼠脾中鼠疫菌、巴贝西原虫、斑点热群立克次体、恙虫病立克次体、莫氏立克次体的DNA核酸检测结果均为阴性;107份鼠膀胱中伯氏疏螺旋体的DNA核酸检测结果为阴性;在鼠体内还存在复合感染情况,感染率为2.80％.结论 黑龙江省逊克县火山熔岩地区啮齿动物中存在汉坦病毒、钩端螺旋体、巴尔通体和嗜吞噬细胞无形体的感染.
