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从毛鸡骨草中分离得到具有保肝作用的同分异构体,Abrusamide A和B
作者从毛鸡骨草叶片中分离得到同分异构体,Abrusamide A and B,并通过细胞增殖抑制试验评估了化合物1和化合物2的肝脏保护作用。
毛鸡骨草干燥叶子(1 kg),用水提取。提取物经真空浓缩得到浓缩的水溶液(1000 ml)。浓缩水溶液用2倍量的95%乙醇沉淀24 h,真空浓缩得到水溶液(500 ml),再依次经三氯甲烷、正丁醇分配层析,得到三氯甲烷(12 g)和正丁醇提取物(80 g)及水溶液(180 g)。正丁醇提取物(80 g)经硅胶柱色谱分离,用三氯甲烷/正丁醇-甲醇洗脱,分别得到Fr A和Fr B。Fr B(30 g)经聚酰胺柱色谱分离,用水/乙醇-水/水(pH=9)洗脱,分别得到3个部分Fr B1~B3。Fr B3(3 g)经反相C18硅胶柱色谱分离,用甲醇/水梯度洗脱,用甲醇/水重结晶得到化合物1(50 mg)、2(12 mg)和3(15 mg)。Fr B2(10 g)经反相C18硅胶柱色谱分离,用甲醇/水梯度洗脱,得到红豆碱(15 mg)和色氨酸三甲基内盐(10 mg)。 -
应用双重聚合酶链反应检测乙型、丙型肝炎病毒
常规聚合酶链反应(PCR)方法对患者HBV和HCV需要分别检测,因而操作繁琐,费时费力,且增加了污染的机会,为此,我们建立了双重PCR技术,实现一步法同时进行HBV和HCV的检测。 选取肝病患者血清标本115例,20例正常对照标本采自HBsAg阴性、肝功能正常的献血员。核酸提取采用蛋白酶K消化,酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,将提取的DNA和RNA复悬于焦碳二乙酯处理过的蒸馏水中,并加入2U RNA酶抑制剂Rnasin。PCR反应在核酸提取管中进行,总体积50μl,反应条件为10 mmol/L Tris·Cl(pH8.3),50mmol/LKCl,2mmol/LMgCl2,0.5μmol/L HBV和HCV引物,0.2 mmol/LdNITP,AMVRT逆转录酶2U,Tag DNA聚合酶2U,RNA酶抑制剂Rnasin 10 U,混匀。
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秦艽提取物对大鼠佐剂性关节炎作用的研究
1 实验材料1.1 试剂卡介苗:卫生部上海生物制品研究所生产,批号:20111112;角叉菜胶:辽宁省药物研究所生产,批号:201201006.1.2 药品及制备将秦艽药材粗粉用水提取后加适量75%乙醇沉淀,取上清液除醇浓缩.
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一种有效分离人尿激肽释放酶和人尿胰蛋白酶抑制剂的方法
人尿激肽释放酶和人尿胰蛋白酶抑制剂是存在于尿中的酸性蛋白.本文通过ZnCl2胶体沉淀和乙醇沉淀相结合的方法可有效分离两者,得率高、活性保留好.
关键词: 人尿激肽释放酶:人尿胰蛋白酶抑制剂 乙醇沉淀 胶体沉淀 -
硫酸软骨素的研制
硫酸软骨素(chondroitin sulfate,1)由D-葡糖醛酸和2-乙酰胺基-2-脱氧-D-半乳糖-4-硫酸酯组成,为白色至灰白色粉末,无味、无臭、有吸湿性,易溶于水而成粘稠溶液;可与阳离子形成多种金属盐而发生沉淀。1可用于某些神经性头痛、神经痛、关节痛、偏头痛、动脉硬化症的预防和治疗,也可用于链霉素引起的听觉障碍及肝炎等的辅助治疗,还可作食品的乳化稳定剂、保湿剂,有改善食物风味、口感及制品的光泽等作用。 1主要是从动物的软骨中提取。国外[1~3]采用氢氧化钠提取,胰酶或氢卤酸、亚硝酸等水解,活性碳吸附,乙醇沉淀的方法;也可用蛋白酶液化软骨,再以阳离子表面活性剂选择性地使1沉淀,水解,精制而得。我们用以NaOH碱化的氯化钠溶液从动物气管中提取、盐酸水解、乙醇沉淀的方法制备1,所用原料易得、操作简单。
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B群链球菌荚膜多糖抗原的分离纯化工艺研究
目的 为提高荚膜多糖抗原得率,降低荚膜多糖中残余蛋白质含量和核酸含量,提高荚膜多糖抗原纯度,优化B群链球菌荚膜多糖的提取纯化工艺条件.方法 研究pH值,沉淀核酸和荚膜多糖的乙醇浓度,乙醇沉淀多糖所需的温度和时间;比较蛋白酶K法、Sevag法和冷酚抽提法去除荚膜多糖中杂蛋白质的效果.结果 建立起25%乙醇沉淀去核酸,冷酚抽提法去蛋白质分离纯化荚膜多糖,55%乙醇沉淀多糖的方法.3批GBSⅢ发酵液中获得的荚膜多糖的唾液酸含量为12.4%~14.8%;分配系数(Kav)≤0.5的多糖回收率达90%以上;荚膜多糖得率为0.021~0.027 g/L,抗原纯度较高.结论 从发酵液中提取纯化荚膜多糖抗原的工艺是可行有效的.
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乙醇分级沉淀的樟芝多糖对于小鼠急性肝损伤的保护作用
目的 研究不同浓度乙醇沉淀获得的樟芝多糖对于急性肝损伤小鼠的保肝作用.方法 采用不同浓度的乙醇沉淀获得樟芝多糖,建立D-氨基半乳糖的急性肝损伤小鼠,Elisa法检测各组血清的谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)的表达以及肝组织中SOD、CAT、GSH-Px、GSH的表达,肝脏HE染色检查组织病理,qPCR检测肝组织中Bc1-2、Bax、Caspase-3的mRNA的表达.确定樟芝多糖中对于小鼠急性肝损伤有效的部分.结果 樟芝多糖的各浓度的乙醇沉淀物均有一定的保肝作用,其中90%乙醇沉淀的多糖对于小鼠模型ALT、AST的含量具有显著的降低作用且优于其他组多糖(P<0.05).4种多糖可以显著降低血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、和肝组织中Bax、Caspase-3mRNA的表达,提高白介素-10(IL-10)和肝组织中SOD、CAT、GSH-Px、GSH蛋白表达以及Bc1-2mRNA的表达(P<0.05).且PW90多糖效果较好.结论 不同浓度乙醇沉淀的樟芝多糖对于急性肝损伤有着一定的保护作用,90%乙醇沉淀获得的多糖保肝作用优于其他浓度乙醇沉淀获得的多糖.
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治鼻出血、治声音嘶哑
方1 白芨30克,94%乙醇340毫升。白芨加水浓煎,去潭滤液60毫升,加入乙醇沉淀30分钟,过滤收集白芨胶。将白芨胶溶于蒸馏水中,煮沸后加麻黄素1克,溶入300克甘油中,加蒸馏水至1000毫升备用。取棉片浸药油,再滴肾上腺素2滴,填塞患者鼻中。每天换药2次,用药1~2次。
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中药口服液制备工艺中应注意的问题
从煎煮、浓缩、精制三方面对中药口服液制备工艺的问题进行了分析和探讨.用水提醇沉法进行分析比较.在制备过程中,中药口服液的质量重点在于提取和精制.认为在制备过程中要重视提取及精制工艺.
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补精1号口服液制备工艺中若干药物有效成分提取方法及时间
补精1号口服液是我院自制制剂,是由原来的丸剂改剂型而来,其制备工艺根据药性、临床、生产等多方面因素,经过反复实验研究分析比较而得来.根据方中药物有效成分及其溶解性能确定制备工艺是以水提取乙醇沉淀的方法为基本路线.其若干特殊药物作了特殊处理,确定了其提取方法、提取时间、提取次数,简述如下.
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斯奇康联合化疗治疗肺结核336例临床研究
斯奇康(卡介菌多糖核酸)注射是卡介菌提取物,热酚法去掉菌体蛋白质,用乙醇沉淀提取菌体脂多糖而制成.由湖南九芝堂斯奇生物制药有限公司生产,我中心于2002年7月~2004年7月两年内选择336例传染性肺结核患者,分两组对斯奇康(卡介菌多糖核酸)注射液(以下称斯奇康),在抗痨中的作用进行了临床研究,现将结果报告如下.
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一种可用于治疗苯丙酮尿症的工程菌株的建立
目的:通过基因重组建立高效表达有活性的PAL菌株,为开创苯丙酮尿症的新疗法奠定基础.方法:对已克隆于pUC19质粒中的水稻苯丙氨酸氨解酶的cDNA进行反向测序,根据测序结果,与pET28系列质粒中的阅读框架结构进行比较,选择相匹配的pET28c质粒作为表达载体,用EcoRⅠ分别切开质粒pUC19-rPAL-1-cDNA和pET28c,切下的2.5 kb rPAL-1-cDNA通过1.5%琼脂糖凝胶电泳分离,透析袋回收,酚、氯仿抽提,乙醇沉淀,纯化后溶于双蒸水备用.
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一种提高PCR产物亚克隆效率的方法
利用PCR扩增目的基因是常用的一种克隆方法,但在实际操作中,试剂盒中Taq DNA聚合酶在经过各种纯化方法(如酚氯仿抽提,乙醇沉淀,电泳和柱纯化)后,仍附着在扩增产物的5'端,有效地阻止随后的内切酶酶切过程,导致重组的失败。作者采用一种可以显著提高PCR产物克隆的效率的方法,即将10 μl蛋白酶K混合物[蛋白酶K混合物的配制:0.1 mol/LTris-HCl (pH8.0)、5%SDS,0.5 mg/ml蛋白酶K)加入100 μl PCR反应后的产物中,37 ℃水浴1 h后,68 ℃ 15 min以灭活蛋白酶K,用酚-氯仿、氯仿各抽提1次,无水乙醇沉淀,70%乙醇清洗后晾干,并用双蒸水溶解。采用这种方法得到了PCR产物与相应酶切载体连接,可以顺利得到大量的重组子,与常规方法比较大大地提高了克隆的效率。
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膜分离法和醇沉法对养血当归糖浆的纯化效果比较
[目的]考察膜分离法、醇沉法两种不同的纯化方法对养血当归糖浆稳定性的影响.[方法]采用膜分离法(膜截留分子量分别为100 KDa和30 KDa,以下简称100 KDa膜和30 KDa膜)和醇沉法纯化养血当归糖浆,以白芍中芍药苷的保留率、药液中杂质成分(多糖、鞣质等)的清除率为考察指标,并结合初步稳定性试验,比较膜分离法与醇沉淀法的纯化效果.[结果]100 KDa膜和30 KDa膜对芍药苷保留率相差不大,但均高于醇沉法;膜分离法对多糖的清除率明显高于醇沉法,30 KDa膜比100 KDa膜效果更好,但对鞣质的清除率两种方法无显著性差异;膜分离法较醇沉法更能提高产品的稳定性.[结论]膜分离的纯化方法能提高齐血当归糖浆的稳定性.可作为其纯化工艺之一.
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汉威斯特天然澄清剂处理双根口服液的工艺研究
目的:建立双根口服液除杂质的工艺方法.方法:采用乙醇法与汉威斯特天然澄清剂法,对双根口服液进行除杂质的比较研究.结果:澄清剂法除杂质可获得澄清的液体,且能减少有效成分的损失.结论:澄清剂法可代替乙醇法用以除杂质.
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附子多糖FI的分离纯化及生物学活性研究
附子是毛茛科乌头属植物的侧根,是一种常用的中药材,具有回阳救逆、温补肾阳、祛寒止痛之功能.近年来研究表明,附子提取液尚具有强心、抗癌、抗衰老和增强免疫机能的作用.因此,对附子中所含多糖的研究与利用具有重要的医学价值.我们将白附片经热水抽提、Sevag法脱蛋白、乙醇沉淀、DEAE-C32柱层析分离,再通过SephadexG-200柱层析进一步纯化,得到一种纯白色粉末状多糖.苯酚-硫酸法测定糖含量为97%,Sephadex G-200柱层析测定其平均分子量为2.6(105.熔点测定结果为270℃.经完全酸水解,薄层层析、红外光谱分析,证明为葡聚糖.生物学活性研究发现这种多糖具有较高的亲水性和保湿性,且能显著降低小白鼠的血清糖水平,增强其常压下耐缺氧能力.
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辛酸-低温乙醇沉淀法纯化小鼠腹水IgM类单克隆抗体
目的:为建立一种简便的,仪器要求不高的,从小鼠腹水中获得高纯度IgM类抗体的纯化方法.方法:先用辛酸在酸性条件下沉淀腹水中的杂蛋白,再在冰浴条件下用-20C预冷乙醇沉淀IgM.结果:用辛酸-低温乙醇沉淀法纯化的IgM抗体纯度>85%,收率>80%,而且对抗体活性几乎无影响.结论:辛酸-低温乙醇沉淀法是一种方便获得高纯度IgM抗体的方法.
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当归多糖AP-Ⅰ的提取、分析鉴定及抗肿瘤活性研究
选用岷县产中国当归,机械破碎,乙醇回流提取挥发油;残渣烘干后用热水煎煮提取多糖,再用乙醇沉淀,离心收集粗提多糖;粗提多糖用蒸馏水溶解后,反复冻融数次后,冷冻干燥得AP-Ⅰ.采用改良苯酚-硫酸法测定总糖含量,间羟基联苯法测定糖醛酸含量,Serva Blue G染料结合法测定蛋白质含量.
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复方柴胡口服液制备工艺考察
目的筛选复方柴胡口服液中橙皮苷的水煎煮提取工艺,比较乙醇沉淀和壳聚糖澄清剂的澄清工艺.方法采用L9(34)正交设计,考察加水量、煎煮时间、煎煮次数3个因素,以青皮中有效成分橙皮苷作为评价指标,采用高效液相色谱法测定橙皮苷的含量.结果煎煮次数对橙皮苷的含量有显著性影响,溶媒用量对橙皮苷的提取有较大的影响;壳聚糖吸附澄清法与醇沉法均能使药液澄清.结论水提佳工艺确定为加水18倍量,每次1.5 h,煎煮3次;壳聚糖澄清剂可以替代乙醇沉淀;优选得到的提取工艺稳定可行.