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TGF-β2干预的缺氧状态下补肾活血剂对Müller细胞及谷氨酰胺合成酶活性的影响
目的 观察在缺氧和(或)转化生长因子-β2 (TGF-β2) 干预条件对体外培养的Müller细胞活力以及谷氨酰胺合成酶(GS)的影响.方法 用出生7d的SD大鼠体外培养视网膜Müller细胞,将第2代细胞在含20%胎牛血清的DMEM中培养24h后,换用无血清的DMEM孵育24h.分组为:空白血清对照组(20%正常SD大鼠血清的DMEM);TGF-β2组(20%正常SD大鼠血清的DMEM及终质量浓度为150ng/L的TGF-β2);模拟缺氧组(20%正常SD大鼠血清的DMEM及终浓度1.0mmol/L的连二亚硫酸钠);TGF-β2+缺氧组(20%正常SD大鼠血清的DMEM液、终浓度1.0mmol/L的连二亚硫酸钠和终质量浓度为150ng/L的TGF-β2);中药血清组(20%中药SD大鼠血清的DMEM);中药血清+TGF-β2+缺氧组(20%中药SD大鼠血清的DMEM、终浓度1.0mmol/L的连二亚硫酸钠和终质量浓度为150ng/L的TGF-β2).以透射电镜观察视网膜Müller细胞超微结构、以490型酶标仪测定细胞外液乳酸脱氢酶(LDH)释放量及GS活性.结果 在缺氧条件下Müller细胞的超微结构发生明显的改变,如:细胞核变形,固缩;细胞器破坏;微绒毛内糖原明显增多.与正常对照组比较,TGF-β2干预组、缺氧组、TGF-β2+缺氧组的LDH释放量均明显增加(P＜0.05),缺氧组、TGF-β2+缺氧组的GS活性均明显下降(P＜0.01);与缺氧组比较,TGF-β2+缺氧组的LDH释放量明显增加、GS活性明显下降(P＜0.05、P＜0.01).补肾活血中药血清能降低24h及48h时正常以及TGF-β2与缺氧同时存在条件下LDH的释放量(P＜0.05),增强12h时正常条件下以及12h和24h时TGF-β2与缺氧同时存在条件下GS的活性(P＜0.05、P＜0.01).结论 TGF-β2可加重缺氧条件下Müller细胞活力与GS活性的降低;补肾活血中药含药血清能增强视网膜Müller细胞活力及GS活性.
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转化生长因子-β2在豚鼠形觉剥夺性近视中的表达
目的 观察形觉剥夺性近视(FDM)形成中视网膜转化生长因子-β2(TGF-β2)水平的变化,对FDM的发病机制做进一步的探讨.方法 出生3 d豚鼠以半透明眼罩遮盖右眼2个月建立FDM模型,左眼作为对照,视网膜检影检测双眼屈光度,A型超声测量双眼眼轴长度.免疫组织化学分析TGF-β2的表达,RT-PCR检测TGF-β2 mRNA的表达.结果 形觉剥夺使近视屈光度增加,遮盖眼与对照眼相比差异有统计学意义(P＜0.01),遮盖眼视网膜光感受器细胞层TGF-β2蛋白表达减少(P＜0.01),TGF-β2 mRNA的表达下调.结论 TGF-β2参与调控FDM形成.
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转化生长因子-β2对骨髓间充质干细胞体外向成骨细胞分化的影响
目的 观察转化生长因子(TGF)-β2在体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化能力.方法 取第3代BMSCs接种于3.5×103个/孔密度培养板,分为3组:A、B、C组,A组不做任何处理,B、C组培养基中分别添加5 μg/L TGF-β1、5μg/L TGF-β2,每孔200μl,每组4孔.7d对3个实验组行碱性磷酸酶(ALP)活性检测和Western blot检测Collagen Ⅰ表达,第3代BMSCs以5×107/L细胞浓度接种于6孔培养板,每组1板,分组添加方式同前,21d细胞爬片行Von kossa染色.结果 A、B、C组第7天的ALP活力值分别为1.15±0.16、4.26±0.39、4.34±0.14,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),ALP的染色面积及深度、Von kossa染色钙化结节C组强于B组和A组,B组强于A组;Collagen Ⅰ表达C组高于B组和A组,B组高于A组(P＜0.05).结论 在一定条件下,TGF-β2体外诱导BMSCs成骨能力较转化生长因子-β1强.
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转化生长因子β2对人视网膜色素上皮细胞Ⅰ型胶原蛋白表达和Smad 2/3磷酸化水平的影响
目的:探讨转化生长因子β2 (TGF-β2)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞Ⅰ型胶原蛋白(COL Ⅰ)表达及细胞内Smad 2/3蛋白磷酸化水平的影响.方法:传代培养人RPE-19细胞,采用不同浓度的TGF-β2(0.1,1,5,10μg/L)分别刺激RPE细胞6,12,24 h.RT-PCR测定各个不同浓度、时间干预的RPE细胞COLⅠA2mRNA的表达,Western blot检测COLⅠ蛋白水平表达.选择干预效果好的TGF-β2浓度刺激RPE细胞,检测各时间点RPE细胞内Smad 2/3蛋白磷酸化水平的变化.结果:不同浓度TGF-β2可刺激RPE细胞COLⅠA2mRNA及COLⅠ蛋白表达上调,其中10 μg/L明显,作用24 h达到高峰,为对照组的2.74倍.各组间差异有统计学意义(P＜0.05).在浓度为10 μg/L TGF-β2刺激24 h后,细胞内Smad 2/3蛋白的磷酸化水平明显升高,是对照组的2.33倍,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:TGF-β2能以剂量和时间依赖的方式上调COLⅠA2mRNA及COLⅠ蛋白的表达,这种表达可能与TGF-β/smad通路中Smad 2/3蛋白的磷酸化水平相关.
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压力对人眼小梁细胞自分泌TGF-β2的影响
目的采用开放式压力控制培养系统研究压力对体外培养的人眼小梁细胞自分泌转化生长因子-β2(TGF-β2)的影响,探讨TGF-β2在原发开角型青光眼发病机制中的作用.方法体外培养人眼小梁细胞并传至第5代.对照组不施加压力(0 mmHg,1 mmHg=0.133 kPa),实验组施加20、40、60及80 mmHg压力,分别持续0、12、24、36 h.采用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞上清液中TGF-β2浓度.结果小梁细胞自分泌TGF-β2随压力增高而增加,与对照组比较,差异有显著性意义(P＜0.05);在20～60 mmHg范围内,加压时间越长,TGF-β2增高越明显;虽然80 mmHg压力水平下TGF-β2增高幅度下降,但加压12和24 h组TGF-β2水平仍明显高于对照组(P＜0.05).结论随压力增高,小梁细胞自分泌TGF-β2增多,其水平与压力大小及作用时间相关,推测TGF-β2分泌异常可能是原发开角型青光眼病理进程中的重要机制之一.
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TGF -β1、TGF -β2在分泌性中耳炎患者中耳积液中的表达和临床意义
目的：探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor β1，TGF -β1）和转化生长因子-β2（transforming growth factor β2，TGF -β2）在分泌性中耳炎（secretory otitis media，SOM）发病过程中的作用。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法（ enzyme linked immunosorbent assay ELISA）检测56例（61只耳） SOM 患者中耳腔积液、外周血清及32例正常人外周血清中 TGF -β1、TGF -β2的表达水平。结果在 SOM患者中耳积液、血清及正常人血清中 TGF -β1、TGF -β2的阳性检出率均为100%；急性 SOM 患者中耳积液中 TGF -β1浓度低于慢性患者（P ﹤0.05），而 TGF -β2浓度高于慢性患者（P ﹤0.05）；急性 SOM 患者血清中TGF -β1含量与正常人比无显著性差异（P ﹥0.05），TGF -β2含量与正常人比有显著性差异（P ﹤0.05）；慢性 SOM 患者血清中 TGF -β1含量与正常人比有显著性差异（P ﹤0.05），而 TGF -β2含量与正常人比无显著性差异（P ﹥0.05）。结论 TGF -β1、TGF -β2均参与 SOM 的发生发展过程，TGF -β1在 SOM 的慢性病程中发挥作用，TGF -β2主要在 SOM 的早期发挥作用。
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转化生长因子-β2诱导大鼠胰腺星形细胞活化及上皮间质转化的研究
目的 探讨转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导大鼠胰腺星形细胞(PSCs)活化及上皮间质转化(EMT)的作用.方法 组织块法分离、培养及鉴定大鼠PSCs后,10 ng/ml TGF-β2刺激PSCs 72 h,光镜下观察细胞形态学改变;免疫荧光染色及Western blot法检测α-SMA、Col-Ⅰ的蛋白表达;qRT-PCR及Westernblot法分别检测E-caderin、Vimentin基因及蛋白的表达;荧光显微镜观察E-caderin和Vimentin在细胞内的表达情况.结果 免疫荧光染色显示新分离PSCs神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、结蛋白(desmin)表达阳性,α-SMA表达阴性,符合其生物学特性.TGF-β2处理PSCs后,光镜下观察细胞体积及胞核变大,伪足发达,脂滴消失;免疫荧光染色及Western blot结果显示α-SMA和CoIⅠ表达量显著增加,呈典型活化状态;qRT-PCR、Western blot及免疫荧光染色结果显示Vimentin的表达明显高于空白对照组,而E-caderin的表达明显降低(P＜0.05).结论 TGF-β 2可诱导PSCs活化及上皮间质转化.
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新鲜羊膜对兔小梁切除术后TGF-β2和b FGF表达的影响
目的 研究新鲜羊膜在兔实验性小梁切除术后对TGF-β2和bFGF表达的影响.方法 将24只新西兰大白兔随机平均分为实验组和对照组,分别行小梁切除术联合新鲜羊膜移植术和单纯小梁切除术.术后分别于7、14、30和60 d对滤过区结膜组织行光学显微镜观察,应用链酶亲和素免疫组织化学法(SABC法)检测各组在结膜滤过泡中转化生长因子(Transforming grow facter-beta-2,TGF-β2)和碱性成纤维细胞生长因子(basic-flbroblastic growth factor,bFGF)的含量.结果 病理切片结果 显示,新鲜羊膜组滤过泡持续时间长,滤过泡成纤维细胞增生少.各时间点TGF-β2和bFGF的表达实验纽低于对照组,两组相比差异均有显著性(P<0.01).结论 新鲜羊膜移植无并发症发生,时滤过泡TGF-β2和bFGF表达有抑制作用.
关键词： 新鲜羊膜 转化生长因子-β2 碱性成纤维细胞生长因子 小梁切除术 -
兔眼小梁切除术中应用新鲜与保存羊膜抗纤维增殖的对比研究
目的 探讨新鲜羊膜与保存羊膜在青光眼小梁切除术后滤过道中抗纤维增殖的能力,并进行对比研究.方法 将36只新西兰大白兔(72眼)随机分为新鲜羊膜组、保存羊膜组和对照组,行小梁切除术,分别在术中应用新鲜羊膜或保存羊膜,对照组无植入物.术后分别于7、14、30和60d对滤过区结膜组织行光学显微镜观察,应用链酶亲和素免疫组织化学法(SABC法)检测各组在结膜滤过泡中转化生长因子(Transforming growfacter-beta-2,TGF-β2)的含量.结果 病理切片结果显示,新鲜羊膜组与保存羊膜组滤过泡结膜下组织细胞数量减少,胶原形成减少,瘢痕组织较为疏松,可见大小不等、形态各异的空腔.新鲜羊膜组滤过泡持续时间较长.免疫组化染色显示,对照组TGF-β2的的表达强,其次为保存羊膜组;新鲜羊膜组表达弱,与各组与相比差异均有显著性(P<0.01).结论 在小梁切除手术中应用羊膜可能通过抑制TGF-β2表达而减少瘢痕形成,维持滤过道的畅通,新鲜羊膜的作用效果优于保存羊膜.
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小鸡FDM后极部巩膜成纤维细胞TGF-β2mRNA表达的动态变化
目的研究小鸡形觉剥夺性近视眼(FDM)后极部巩膜成纤维细胞转化生长因子-β2(TGF-β2)mRNA表达的时间动态变化,以阐明高度近视眼后极部巩膜细胞外基质(ECM)主动重塑的可能分子机制.方法60只1 d龄来亨雏鸡,用半透明塑料眼罩单眼遮盖制备FDM动物模型(FDM组),对侧眼为自身对照眼(SC组).另外,随机选取相同数目的同龄正常小鸡作为正常对照(NC组).于第4、7、14、21和30天检测眼轴长度与屈光度后处死小鸡,取后极部巩膜成纤维细胞层,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)一步法检测TGF-β2mRNA表达,并分析其与眼轴长度、屈光度变化的相关性.结果单眼遮盖后,TGF-β2mRNA表达显著下调,呈时间依赖性,其中以遮盖4～14d显著,14 d后下降减缓,稳定于极低水平.不同时间遮盖组与其对照组比较,差异有显著性(P＜0.001);除遮盖21 d与30 d后组间无明显差别外,各不同时间FDM组组间差异有显著性(P＜0.001).相关分析显示,TGF-β2mRNA表达与眼轴长度、屈光度变化间存在显著相关性(r分别为-0.951,0.951,P＜0.001).结论形觉剥夺可显著降低小鸡后极部巩膜成纤维细胞TGF-β 2 mRNA表达,呈时间依赖性,提示TGF-β 2可能为FDM后极部巩膜ECM重塑的早期启动因子.
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人脑胶质瘤干细胞TGF-32mRNA的表达及意义
目的 检测人脑胶质瘤干细胞(BGSCs)中转化生长因子-β2(TGF-β2) mRNA的表达水平,推断其在胶质瘤免疫治疗中的作用. 方法 选取中国医科大学第一医院神经外科自2008年10月至2009年1月间手术切除的脑胶质瘤标本8例,培养出BGSCs,免疫荧光染色检测肿瘤细胞球CD133、GFAP和TU-20的表达；RT-PCR检测BGSCs中TGF-β2 mRNA的表达,并与对应的原代分化脑胶质瘤细胞进行比较. 结果 肿瘤细胞球CD133呈阳性表达；分化于肿瘤球的细胞可表达GFAP和TU-20; RT-PCR检测发现TGF-β2 mRNA在BGSCs中的表达水平远高于原代分化胶质瘤细胞,差异有统计学意义(t=3.619,P=0.009). 结论 BGSCs中TGF-β2 mRNA呈高表达,这可能是胶质瘤TGF-β2高分泌、产生免疫逃逸并耐受各种常规治疗的决定性因素.
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汉防己甲素对人眼Tenon囊成纤维细胞中bax、bcl-2、TGF-β2mRNA表达的影响
目的 观察汉防己甲素(Tet)对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(tenon's capsule fibroblasts,TCFS)中bax、bcl-2、转化生长因子-β2(TGF-β2)mRNA表达的影响,探讨其可能的作用机制.方法 将体外培养的第3代TCFS分别置于浓度为10-5 mol/LTet的培养液和1640培养液中培养48 h,采用实时荧光定量PCR检测细胞中bax、bcl-2和TGF-β2 mRNA的表达变化.结果 同对照组比较,Tet实验组中bax mRNA的表达量明显升高,bcl-2、TGF-β2 mRNA的表达量显著下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 一定浓度的汉防己甲素可以通过降低bcl-2、TGF-β2 mRNA的表达量,同时提高bax mRNA的表达量来抑制TCFS的增殖,并可诱导其凋亡,可能成为一种潜在的抗青光眼滤过瘢痕药物.
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转化生长因子-β2在糖尿病仓鼠视网膜中的表达意义
目的:探讨糖尿病视网膜损伤和转化生长因子-β2(TGF β2)产生的关系以及TGF-β2的作用机制.方法:链脲佐菌素制备仓鼠糖尿病模型,用免疫组织化学法检测正常对照组和糖尿病动物模型(16周)视网膜中TGF-β2的表达,电镜观察其超微结构的变化.结果:糖尿病仓鼠视网膜内TGF-β2表达呈阳性染色反应,超微结构出现膜盘结构分层,数量稀少;节细胞层内质网扩张,核周间隙扩大,细胞内线粒体肿胀等变化.结论:提示TGF-β2与糖尿病视网膜病变(DR)形成过程有关.
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ILK SiRNA对TGF-β2诱导的人Tenon囊成纤维细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨小干扰 RNA(the small interference RNA, SiRNA)沉默整合素链接激酶 (integrin-linked kinase, ILK)基因对转化生长因子-β2(transforming growth factor beta 2,TGF-β2)诱导的人 Tenon 囊成纤维细胞(human Tenon fibroblasts,HTFs)增殖和凋亡的影响.方法:体外培养HTFs细胞,波形蛋白(Vimentin)和角蛋白(keratin)免疫荧光染色进行鉴定.实验分组包括NC组:正常对照HTFs;H+T组:HTFs+5μg/L TGF-β2;H+T+NC SiRNA 组:HTFs+5μg/L TGF-β2+50nmol/L 阴性对照SiRNA;H+T+ILK SiRNA 组:HTFs+5μg/L TGF-β2+50nmol/L ILK SiRNA.50nmol/L ILK SiRNA转染HTFs细胞,5μg/LTGF-β2刺激后,分别利用Western-blot 检测细胞内ILK的蛋白表达,CCK-8检测细胞增殖能力,Hoechst 33342/PI双染检测细胞凋亡.结果:Western-blot结果显示,TGF-β2可以明显上调HTFs细胞内ILK的表达,ILK SiRNA可以明显抑制TGF-β2诱导的ILK蛋白表达(P<0.05).CCK-8检测结果显示, 5μg/L TGF-β2可以促进HTFs细胞增殖,ILK SiRNA转染后48h,细胞的增殖明显受到抑制,且低于正常对照组(P<0.05).Hoechst 33342/PI双染结果显示,TGF-β2并不诱导HTFs细胞发生凋亡(P>0.05),但ILK SiRNA可以诱导HTFs细胞发生明显凋亡,并出现少量坏死细胞(P<0.05).结论:ILK SiRNA可以抑制TGF-β2诱导的HTFs增殖,并诱导HTFs细胞发生凋亡.
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胰岛素对人RPE细胞增殖及转化生长因子-β2分泌的影响
目的:探讨胰岛素对RPE细胞增殖和分泌转化生长因子-β2(TGF-β2)的影响.方法:将不同浓度的胰岛素(0.1~10×103U/mL)加入培养基刺激ARPE-19细胞不同时间(0~48h).采用MTS法检测RPE细胞的增殖情况;采用ELISA法检测各种处理情况下RPE细胞分泌TGF-β2的情况,Real-time PCR法检测TGF-β2 mRNA的表达情况.结果:MTS结果显示,作用12h后,各实验组与对照组比较RPE细胞明显增殖(P<0.05).ELISA结果表明胰岛素可明显促进RPE细胞分泌TGF-β2,并呈时间及剂量依赖性.Real-time PCR结果显示,胰岛素作用24h后,TGF-β2 mRNA表达上调(P<0.01),且10×103U/mL胰岛素组TGF-β2 mRNA表达明显高于0.1×103U/mL胰岛素组(P<0.01).结论:RPE细胞是眼内近视信号因子TGF-β2的重要来源,胰岛素可以通过促进RPE细胞增殖并分泌TGF-β2进行信号传递,促进近视发生.
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不同光照形式对豚鼠视网膜色素上皮细胞TGF-β2表达的影响
目的:探讨不同光照形式对豚鼠视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞表达转化生长因子-β2(transforming growth factor β2,TGF-β2)的影响.方法:幼年健康豚鼠(2周龄)10只,体外培养RPE细胞,传代、鉴定后,将细胞分为聚焦光组、离焦光组、平行光组和空白对照组,前3组分别接受聚焦光、离焦光(均为将平行光经透镜转化)和平行光照射,空白对照组不接受照射.于照射后24h采用免疫细胞化学法、实时荧光定量PCR法(real-time fluorescence quantitative PCR,RTFQ-PCR)检测细胞中TGF-β2及TGF-β2 mRNA的表达,分析不同光照形式与效应的关系.结果:免疫细胞化学法显示各组TGF-β2表达均为阳性,病理VISTA图像分析软件测量单位面积中平均光密度 (optical density,OD)值进行半定量分析,聚焦光组明显高于其它各组,组间比较有统计学差异(F=11.08,P<0.05);RTFQ-PCR法显示,聚焦光组TGF-β2mRNA表达水平较其它各组明显增加,组间比较有统计学差异(F=133.01,P<0.05).结论:不同形式光线可影响豚鼠RPE细胞TGF-β2表达,以聚焦光明显.
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人TGF-β2特异性siRNA质粒的构建
目的:构建人TGF-β2特异性siRNA质粒.方法:从NCBI中查找人TGF-β2的mRNA序列,并利用生物信息学对序列进行分析;根据siRNA的设计原则,选择佳的siRNA序列;利用限制性内切酶BamH Ⅰ和Bbs Ⅰ将相应的双链DNA插入到GPU6/GFP/Neo载体中;重组质粒经限制性内切酶BamH Ⅰ和Pst Ⅰ单酶切进行鉴定,鉴定正确的质粒进一步通过基因测序的方法进行验证.结果:根据生物信息学选择TGF-β2mRNA的1 016~1 034区域作为干扰位点;重组质粒酶切结果表明双链DNA序列成功插入到了GPU6/GFP/Neo载体中;测序分析结果进一步证明插入序列与设计完全一致.结论:成功构建了人TGF-β2特异性siRNA干扰质粒,为研究TGF-β2基因功能和利用基因治疗的方法提高青光眼滤过手术成功率奠定了实验基础.
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大鼠角膜碱、酸、热烧伤后房水中TGF-β2的变化研究
目的:通过检测角膜烧伤后前房水中TGF-β2含量的变化,探讨在眼部内环境下TGF-β2与角膜烧伤之间的关系,为角膜烧伤治疗提供依据.方法:制备Wistar大鼠角膜碱、酸、热中度烧伤动物模型,分别于伤后4,8h;1,3,5,7,14,28,49d处死.采集房水:用20g/L BSA包被的毛细管于角膜缘处刺入角膜,吸取房水至20g/L BSA包被的离心管中,-70℃保存.标准品和样品进行酸激活处理.使用ELISA方法检测角膜烧伤后前房水中TGF-β2的水平.结果:大鼠角膜碱烧伤后4h TGF-β2的水平呈现一过性升高,然后下降,3d时TGF-β2含量再次升高,7d时达高峰,持续至7wk时降至正常.大鼠角膜酸烧伤后4h TGF-β2的水平呈现一过性升高,然后下降,低于正常对照组,两者差异显著.7d时房水中TGF-β2升至正常,然后一直保持低平状态.49d时我们检测房水中TGF-β2水平仍低于正常.大鼠角膜热烧伤后4h TGF-β2的水平呈现一过性升高,1d时降至低,3d时开始增长,直到7d时我们检测仍高于正常,然后缓慢下降.结论:角膜烧伤后前房水中TGF-β2的含量发生变化,致伤原因不同,其变化方式不同.角膜碱烧伤和热烧伤后于7d时出现TGF-β2高峰,说明此时角膜处于免疫功能抑制状态,这对于维持角膜前房的免疫赦免状态非常重要,证明此时机体发挥了自我保护功能,避免产生过度的病理反应.角膜酸烧伤后TGF-β2水平始终低平,其原因尚有待于进一步研究.
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TGF-β2玻璃体腔注射对EAU大鼠Foxp3表达的调控作用
目的:利用RT-PCR的方法检测EAU时Lewis大鼠视网膜和葡萄膜Foxp3的mRNA表达情况,探讨EAU时转录因子Foxp3的变化及TGF-β2对其的诱导调控作用,为研究葡萄膜炎的病变机制提供理论支持,为临床治疗葡萄膜炎探索新方向.方法:将IRBP R16多肽注入Lewis大鼠左后足底部制备EAU动物模型.按照随机数字表法将36只Lewis大鼠分为正常对照组、EAU未治疗组和EAU TGF-β2治疗组.TGF-β2治疗组于EAU动物模型制备后第1,4,7,10,13,16,19d给予TGF-β210μL(浓度为5mg/L)玻璃体内注射治疗.分别于IRBP免疫后7,10,14,21d处死Lewis大鼠,刮取视网膜和葡萄膜,利用RT-PCR法检测Foxp3的表达,所得数据应用SPSS 10.0统计分析软件进行处理.结果:随着EAU病程的进展,Foxp3的表达逐渐增加,但同正常对照组相比,差异不显著,各时问组之间差异不显著.随着EAU病程的进展,TGF-β2治疗组7dFoxp3的表达增加,同正常对照组和未治疗组相比无显著差异.TGF-β2治疗组10,14,21d Foxp3的表达增加,同正常对照组相比有显著差异(P<0.01),同TGF-β2未治疗组相比Foxp3的表达增加,差异显著(P<0.05).结论:探讨Foxp3在EAU疾病过程中的表达变化,为进一步研究Foxp3在EAU中的作用机制提供了理论支持.研究了TGF-β2在EAU病程中对Foxp3的表达调控,发现TGF-β2能够增加Foxp3的表达,从而调控Treg细胞,启动免疫抑制功能,为临床治疗葡萄膜炎开辟新方向.
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转化生长因子-β2在糖尿病大鼠视网膜中基因表达的研究
目的:糖尿病视网膜病变(diabetic retinophthy, DR)是糖尿病在眼部的主要并发症,为我国四大致盲眼病之一.DR的病理基础是微血管病变,研究其发生、发展的机理对预防和治疗这一疾病具有重要的临床意义.而转化生长因子-β(transforming growth factor-β, TGF-β)是一类能够调节细胞生长和分化的多肽,具有多种生物学作用.本研究选择转化生长因子-β2(TGF-β2)为研究对象,检测其在不同时相点糖尿病大鼠视网膜中的基因表达情况,观察和分析TGF-β2的动态表达变化,探讨其在糖尿病视网膜病变发生、发展中的作用机制.方法:选10w龄正常雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠,用链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠建立糖尿病动物模型,血糖浓度大于16.7mmol/L定为糖尿病模型大鼠,于第4,8,12,16,20,24wk分别分离视网膜,液氮保存,应用RT-PCR检测糖尿病大鼠视网膜中不同时相点TGF-β2的基因表达.结果:(1)制备大鼠视网膜总RNA,甲醛变性凝胶电泳显示RNA样品完好无降解,能够用于基因表达分析.(2)用STZ成功诱导建立了大鼠糖尿病动物模型.(3)与正常对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜中TGF-β2 mRNA表达于4wk时升高,但统计学上差异无显著性(P>0.05);8wk时则下降,差异有显著性(P<0.05);12wk时仍下降,差异有显著性(P<0.05),较8wk时已出现上升趋势;16wk时与正常对照组无明显差异(P>0.05);20wk时则开始升高,但差异无显著性(P>0.05);24wk时继续升高,差异有显著性(P<0.05).结论:TGF-β2的mRNA表达在糖尿病大鼠视网膜中较对照组于第8wk、12wk时明显降低,第24wk时明显升高,可以看出TGF-β2随时间变化呈双相性.一方面说明TGF-β作为一种重要的细胞生长调节因子的双向调控特点,另一方面也说明TGF-β2在DR中可能发挥着重要作用.
