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递增大强度训练对大鼠骨骼肌P13K/Akt信号转导通路的影响
目的:探讨递增大强度训练对大鼠骨骼肌P13K/Akt信号转导通路的影响.方法:12只雄性SD大鼠随机分为安静组和递增大强度运动组,每组6只.运动组进行递增大强度跑台训练.8周后采用Real-timePCR和Western blotting等测定大鼠比日鱼肌和腓肠肌Akt(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog)、PTEN(phosphatase and tensin homologue)和磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,P13K)的mRNA相对表达量和蛋白表达水平.结果:(1)与安静组比较,递增大强度运动组比目鱼肌和腓肠肌Akt mRNA相对表达量显著下调,而腓肠肌Akt蛋白表达显著上调;(2)递增大强度运动组比目鱼肌和腓肠肌PTEN mRNA及蛋白表达均无显著变化;(3)递增大强度运动组比目鱼肌P13K蛋白表达显著上调,比目鱼肌和腓肠肌P13KmRNA相对表达量无显著变化.结果提示:Akt mRNA下调的途径可以独立于P13K之外,且递增大强度跑台训练可以诱导这种特异Akt失活途径的启动;在激活Akt的方式上除了通过P13K以外,尚有其他的激活事件发生.
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黄芪苷Ⅳ通过P13K/Akt信号通路抗H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤
目的 研究黄芪苷Ⅳ对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制.方法 建立H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤模型,MTT法检测细胞存活率,DNA抽提及琼脂糖凝胶电泳、Hoechst 33258染色、caspase-3活性检测细胞凋亡,Western blotting检测t-Akt和p-Akt蛋白的表达.结果 与H2O2组比较,10、20mg/L的黄芪苷Ⅳ均显著提高细胞存活率,降低caspase-3活性,减轻细胞凋亡;且均显著卜调p-Akt蛋白的表达;P13K/Akt抑制剂LY294002部分阻断10、20 mg/L黄芪苷Ⅳ的保护作用.结论 黄芪苷Ⅳ部分通过P13K/Akt通路发挥对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用.
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缺血后处理对兔缺血/再灌注损伤脊髓的保护作用可能与PI3K/Akt信号有关
目的 探讨缺血后处理对兔缺血/再灌注损伤脊髓的保护作用及PI3K/Akt传导通路在其中的作用.方法 42只日本大耳白兔(2-2.5kg),随机分为7组,分别为缺血组(Ⅰ组);缺血后处理组(PB组);PB+DMSO组(D组);PB+Ly294002 5μg组(PY5组);PB+LY294002 10μg组(PY10组);PB+LY29400220μg组(PY20组);LY294002 10μg组(LY组).采用脊髓缺血再灌注损伤模型,缺血后处理模型采用4F球囊导管肾动脉下水平阻断腹主动脉25min,再灌注开始的10min球囊部分排空,将腹主动脉远端血压控制在45-55mmHg进行缺血后处理.再灌注后24h进行神经运动功能评分,将实验动物处死,取脊髓组织采用Westernblot技术测定Phospho-Akt及Bcl-2,Bax蛋白表达.结果 缺血再灌注后24h,PB组Tarlov评分明显高于其它各组(P<0.05),Ⅰ组、PY5、PY10、PY20组的Phospho-Akt及Bcl-2表达与PB组相比有显著降低,Bax蛋白表达与PB组相比明显增高(P<0.05).结论 缺血后处理对缺血再灌注损伤脊髓的保护作用可能与PI3K/Akt信号通路有关.
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奥沙利铂通过抑制P13K／Akt增强胃癌对TRAIL的敏感性
目的研究P13K／Akt通路在TRAIL诱导凋亡中的作用，以及奥沙利铂对TRAIL诱导胃癌BGC823细胞凋亡的影响。方法MTT法检测细胞存活率。流式细胞术检测细胞凋亡。Westernblot法检测Akt，p-Akt蛋白表达。结果100ng／mL的TRAIL作用BGC823细胞16h，只引起轻度的细胞凋亡。TRAIL可活化P13K／Akt通路，P13K抑制剂LY294002（25μmol／L）预处理细胞1h后再予TRAIL作用16h，细胞凋亡比率明显升高（12．7％±3．1％vs3．5％±1．1％，P〈0．05）。38μg/mL奥沙利铂可抑制P13K／Akt通路的活化，进而增强细胞对TRAIL的敏感性，细胞凋亡率提高到35．5％±4．5％，P〈0．05。结论奥沙利铂通过抑制TRAIL诱导的P13K／Akt活化，增强胃癌BGC823细胞对TRAIL的敏感性。
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RA治疗新靶点——信号转导通路的调节
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种常见的慢性多系统性炎症性的自身免疫性疾病,多引起受累关节的破坏.在RA发病过程中,多种RA相关炎性细胞参与其中,如T淋巴细胞、成纤维样滑膜细胞(FLS)和巨噬细胞.目前用抗炎症因子生物制剂抑制RA相关炎性细胞间信号转导,来改善RA的炎性破坏已得到广泛的证实.信号转导通路具有重要的细胞周期调节功能.同时对细胞的发生、发展和凋亡也发挥着重要的作用.大量的实验已证实ERK、p38/MAPK等信号通路的抑制剂能够改善RA病情.通过对RA相关炎性细胞间信号转导通路研究的不断深入,将可能为我们在RA的治疗中开辟一条崭新道路.
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PTEN信号转导通路与肿瘤的多药耐药
alian target of rapamycin,mTOR)等多种信号转导通路参与细胞的增殖、凋亡及化疗耐药.因此,上调野生型PTEN的表达,或使用PBK/Akt/mTOR信号通路抑制剂,可逆转肿瘤细胞的多药耐药,提高传统化疗的疗效.
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P13K/Akt在细胞凋亡及白血病耐药方面的研究进展
白血病是起源于造血系统的恶性肿瘤,其发生机制与发展过程已经证实与多种遗传学相关,多种原因导致二类基因突变,I类突变导致细胞增殖或抑制凋亡,Ⅱ类突变导致细胞分化受抑,二类突变同时存在而导致白血病.
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补阳还五汤联合MSCs移植对脑缺血再灌注模型大鼠VEGF及信号通路的影响
目的 揭示补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞(MSCs)移植促进脑缺血血管新生的机制.方法 选取雄性SD大鼠96只,随机分为脑缺血再灌注模型组、内皮细胞抑制素组、MSCs移植组及补阳还五汤联合MSCs移植组.参照改良的Longa法建立大鼠脑缺血再灌注模型(MCAO).模型组在立体定位仪下,用微量进样器通过侧脑室给予生理盐水10μl;抑制素组给予内皮细胞抑制素阿瓦斯汀5μl,生理盐水5μl;MSCs组及联合组给予阿瓦斯汀5μl、培养的MSCs 5μl.联合组术前3天给予补阳还五汤(10ml/kg)灌胃,其它各组以同等体积的生理盐水灌胃,每日一次.模型组、抑制素组及MSCs组48 h后,采集实验动物血清和脑组织;联合组分别于12h、24h、36h、48h采集,采用免疫组化法检测大鼠血清VEGF及缺血脑组织VEGF的表达;应用免疫印迹蛋白法检测VEGFR2、p-VEGFR2、ERK、p-ERK、AKT、p-AKT的蛋白含量.结果 抑制素组与模型组相比,大鼠血清及脑组织VEGF含量明显降低(P＜0.05);ERK、AKT含量变化不大(P＞0.05);VEGFR2、p VEGFR2、pERK和pAKT表达均显著下降(P＜0.05).MSCs组与抑制素组相比,大鼠血清及脑组织VEGF含量明显升高(P＜0.05);ERK、AKT含量影响不大(P＞0.05);VEGFR2、p-VEGFR2、p-ERK和p-AKT表达均升高(P＜0.05);联合组与抑制剂组相比,除ERK外,所有指标均有升高,以24h、36h、48h三个时间点为明显(P＜0.05、P＜0.01).结论 内皮细胞抑制素(阿瓦斯汀)可通过抑制VEGFR2及其磷酸化,降低ERK、AKT的磷酸化水平,阻止经MAPK途径的胞内信号转导途径,从而抑制内皮细胞的增殖和迁移,阻止新生血管的形成;MSCs组及联合组主要经VEGFR-2所介导的信号通路及PI3 K/A KT信号途径,诱导内皮细胞增殖和迁移,促进血管新生,对ERK途径的胞内信号影响不大.
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PTEN/PI3K/Akt信号通路对K562细胞凋亡调控的研究
目的 探讨PTEN/PI3K/Akt信号传导通路对人慢性粒细胞白血病细胞系K562的增殖、凋亡调控的研究及可能的分子作用机制.方法 将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白的腺病毒(AdPTEN-GFP)及空载体(Ad-GFP)腺病毒,转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562.通过MTT检测细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞增殖指数,同时用细胞光镜、电镜形态等方法检测细胞凋亡,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN及凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xL、Bax mRNA水平变化,Western blot检测PTEN及Akt、p-Akt蛋白水平变化.结果 与Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP转染K562细胞后,细胞增殖受抑,增殖指数降低,凋亡率增加,p-Akt表达降低,抗凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xL mRNA表达降低,促凋亡基因Bax mRNA表达增加.结论 过表达PTEN可能通过抑制PI3K/Akt通路抑制K562细胞系增殖,促进细胞凋亡.
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P13K/Akt通路在药物放射增敏中作用的机制
目的 进一步探讨PI3K/Akt信号转导途径在药物放射增敏中作用的分子机制.方法 体外培养HeLa细胞,多西紫杉醇(docetaxel)和顺铂(cisplatin)单独及分别联合P13K抑制剂LY294002作用24 h,X线6 Gy剂量照射;Western blot检测Akt、磷酸化Akt(pAkt)、Bad、磷酸化Bad(pBad)蛋白的表达变化;RT-PCR检测Bad、Ku70、Ku80 mR-NA的表达变化;中性彗星电泳检测不同处理组细胞DNA的损伤.结果 ①docetaxel+LY294002联合照射组、cispla-tin+LY294002联合照射组Bad mRNA表达增高,Ku70 mRNA表达减低,Ku80 mRNA表达无明显变化;②docetaxel+LY294002联合照射组、cisplatin+LY294002联合照射组Bad蛋白表达增高,pAkt、pBad蛋白表达减低,Akt蛋白表达无明显变化;③docetaxel+LY294002联合照射组、cisplatin+LY294002联合照射组细胞彗星电泳尾距明显长于单纯药物增敏照射组.结论 ①docetaxel和cisplatin药物增敏照射能够明显活化PI3K/Akt信号转导途径;②抑制PI3K/Akt信号转导途径能够抑制Ku70表达,减少细胞DNA损伤后的再修复,提高促凋亡因子Bad的表达,促进细胞的凋亡.
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PTEN基因表达改变对人气道平滑肌迁移的影响
目的 通过腺病毒载体体外转染人气道平滑肌细胞(HASMC),使肿瘤抑制基因PTEN过表达和RNA干扰表达,观察其对HASMC迁移的影响,并探讨其作用机制.方法 利用携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-GFP-PTEN)和针对PTEN基因的腺病毒短发夹状RNA(shRNA)载体(Ad-GFP-shRNA-PTEN)转染HASMC细胞,并以感染空载腺病毒Ad-GFP和空白组(DMEM)作为对照,用流式细胞计数确立佳转染复数后,通过Transwell趋化小室和细胞划痕实验检测HASMC跨膜迁移能力和横向迁移能力的变化.Western blotting检测PTEN蛋白的表达和AKT、ERK1/2通路的活化情况,并加入两通路的抑制剂作为阳性对照.结果 腺病毒搭载的PTEN基因过表达和干扰载体能成功改变PTEN基因的表达.上调PTEN表达能显著抑制HASMC迁移;蛋白水平上抑制PI3K/AKT通路,而MAPK/ERK通路未见变化.下调PTEN表达不能明显促进HASMC迁移;但在蛋白水平能使P13K/AKT通路激活,而MAPK/ERK通路却受到抑制.结论 上调PTEN表达能有效抑制HASMC的迁移,可能主要是通过抑制P13K/AKT通路起作用.
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抑制PI3K/Akt信号通路提高膀胱癌化疗效果的实验研究
目的:探讨通过抑制Akt信号通路提高抗癌药物紫杉醇对膀胱癌T-24的杀伤作用.方法:采用MTT法检测Akt抑制剂鱼藤素、紫杉醇单独以及两药联合应用对T-24细胞的增殖抑制率,采用流式细胞术(FCM)检测药物单独或联合作用对细胞周期的影响.结果:联合鱼藤素能够显著提高紫杉醇对T-24细胞的增殖抑制率(P<0.01),协同治疗指数<1,具有协同治疗作用;FCM结果显示联合鱼藤素使细胞阻滞在G0/G1期的比例增加,S期比例减少,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论:抑制Akt信号通路能够显著提高紫杉醇时膀胱癌T-24细胞的杀伤作用.
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PI3K/Akt信号途径抑制烧伤后大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡
目的 探讨PDK/Akt信号途径在烧伤后大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡中的作用及机制.方法 首先建立模拟烧伤的动物模型,通过Western blot观察P13K/Akt信号途径的活化规律,TUNEL实验观察烧伤大鼠心肌凋亡.然后建立离体培养的缺血缺氧心肌细胞模型,并分为对照组、单纯缺血缺氧组、LY294002处理组或IGF-1处理组,应用ELISA观察缺血缺氧心肌细胞凋亡.并通过DEVD荧光检测caspase-3酶活性,RT-PCR检测p53、Bax的转录活性.结果 烧伤后大鼠心肌组织内P13K和pAkt表达逐渐增加,伤后3 h达高峰;烧伤3 h后,大鼠心肌细胞凋亡率显著增加;应用LY294002特异性抑制P13K/Akt通路后,大鼠心肌细胞凋亡率较对照组增加更为显著(P<0.05).缺血缺氧导致体外培养心肌细胞凋亡增加,caspase-3活性逐渐增强,p53、Bax mRNA表达量逐渐升高;与单纯缺血缺氧组相比,应用LY294002阻断P13K/Akt途径活化后,心肌细胞凋亡数量增加更显著(P<0.05),caspase-3活性增高更为明显(P<0.05),053、Bax mRNA表达量均显著升高(P<0.05);用IGF-1预先激活P13K/Akt途径后,与单纯缺血缺氧组比较,心肌细胞caspase-3活性明显降低(P<0.05).结论 P13K/Akt信号途径在缺血缺氧心肌细胞中具有抗凋亡作用,该作用与P13K/Akt调控促凋亡基因p53、Bax的表达,抑制caspase-3凋亡反应有关,并为心肌缺血缺氧损害的临床防治提供新思路及实验依据.
