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强骨宝方对体外高糖培养成骨细胞增殖功能的影响
目的:探讨强骨宝方对体外高糖培养成骨细胞增殖功能的影响.方法:采用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原酶消化法从1-2日龄SD大鼠颅盖骨中分离出成骨细胞,鉴定细胞后,用不同浓度的强骨宝方提取液及不含强骨宝方提取液的α-MEM培养液加入到成骨细胞高糖(糖终浓度为300mg/dl)培养体系,作用不同时间,应用噻唑蓝比色试验法(MTT法)(用波长490nm处OD值表示)等来检测其对成骨细胞增殖能力的影响.结果:100、50、10μg/ml的强骨方提取液对体外高糖培养成骨细胞早期的增殖功能具有明显的促进作用(P<0.05),在较高浓度时对成骨细胞增殖,无明显抑制效应.结论:强骨方提取液能促进体外高糖培养成骨细胞的增殖功能,以100、50μg/ml浓度为合适.
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α硫辛酸对高糖环境下心肌成纤维细胞胶原表达的影响
目的 探讨α硫辛酸对高糖环境下心肌成纤维细胞(CFb)中胶原生成的影响及作用机制.方法 将原代培养乳鼠CFb按培养液不同分组:正常糖组(NG,5.5 mmol/L葡萄糖)；高糖组(高糖,25.5 mmol/L葡萄糖)；药物干预组:高糖+不同浓度α硫辛酸组(高糖+100、200、300 μmol/L α硫辛酸)；高糖+p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)阻断剂组(高糖+10 μmol/L SB203580).用噻唑蓝四氮唑(MTT)比色法检测细胞增殖,双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测胶原Ⅰ、Ⅲ的含量,蛋白质印迹法检测转化生长因子β1(TGF-β1)、P-p38MAPK蛋白的表达.结果 与正常糖组相比,高糖明显促进CFb增殖,吸光度值提高(P＜0.01),高糖使胶原Ⅰ、Ⅲ分泌量增加(P＜0.01),高糖使TGF-β1、P-p38MAPK蛋白表达增加(0.86士0.05比0.45±0.04,0.88士0.04比0.46士0.02,均P＜0.01).经不同浓度α硫辛酸(100、200、300 μmol/L)处理,CFb增殖率降低(0.459士0.032、0.407士0.024、0.337士0.013比0.490±0.032,P＜0.05),胶原Ⅰ、Ⅲ含量降低(胶原Ⅰ 6.53±1.20、4.67±1.14、4.03±0.78比7.45±1.12;胶原Ⅲ113.52±31.52、104.55±23.56、86.93±33.23比121.23士33.24,均P＜0.05)；200 μmol/L α硫辛酸中TGF-β1、P-p38MAPK蛋白表达降低(0.52±0.03比0.86士0.05、0.48士0.03比0.88±0.04,均P＜0.05).与高糖组相比,高糖+10 μmol/L SB203580组中胶原Ⅰ、Ⅲ分泌减少(4.22±0.87比7.45±1.12,95.06±24.96比121.23±33.24,P＜0.05).结论 α硫辛酸对高糖刺激CFb中胶原生成具有抑制作用,其作用可能部分通过p38MAPK通路实现.
关键词： α硫辛酸 高糖培养 胶原 转化生长因子β1 p38MAPK信号通路 -
脂联素对高糖条件下RF/6A细胞的保护作用
目的 观察脂联素(adiponectin,APN)对高糖培养条件下恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(monkey choroid-retinal endothelial cell line,RF/6A)增殖及凋亡的影响. 方法 将体外培养的生长良好的RF/6A细胞随机分为空白对照组(PBS)、甘露醇对照组(25 mmol/L甘露醇)、高糖组(25 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+APN组(25 mmol/L D-葡萄糖+10,g/mlAPN),各组加入不同的药物处理48 h.分别采用CCK-8法检测细胞增殖,Western blot检测细胞凋亡关键蛋白Bax、Bcl-2的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率. 结果 高糖组(71.42％±2.29％)和高糖+APN组(90.87％±1.68％)细胞增殖率低于空白对照组(100％±0％)和甘露醇对照组(99.09％±0.46％) (P＜0.001);与高糖组相比,高糖+APN组细胞增殖率明显升高(P＜0.001).高糖组和高糖+APN组的RF/6A细胞Bax的相对表达量高于空白对照组和甘露醇对照组(P＜0.001).高糖组和高糖+ APN组细胞Bcl-2的相对表达量低于空白对照组和甘露醇对照组(P＜0.001).与高糖组相比,高糖+APN组细胞Bax的表达明显降低,Bcl-2的表达明显升高(均P＜0.001).高糖组及高糖+APN组细胞凋亡率均比空白对照组和甘露醇对照组增多(P＜0.001).与高糖组相比,高糖+APN组细胞凋亡率明显减少(P＜O.001). 结论 APN处理可抑制高糖培养条件下的RF/6A细胞凋亡,促进细胞增殖,提示APN对视网膜血管内皮细胞具有一定的保护效应.
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大黄素干预高糖培养大鼠肾小球系膜细胞的凋亡
背景:前期工作已经证实中药复方消可宁(制大黄、制附子、生黄芪)能有效防治早期糖尿病肾病并获得国家专利(专利号:200410064899X).目的:观察大黄主要活性成分大黄素对高糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响.方法:用20,40,80 μmol/L大黄素刺激高糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞,苏木精-伊红染色观察凋亡细胞形态,4',6-二脒基-2-苯基吲哚荧光染色观察细胞核凋亡情况,流式细胞仪观察细胞凋亡率.结果与结论:苏木精-伊红染色及4',6-二脒基-2-苯基吲哚染色结果显示大黄素对高糖培养的肾小球系膜细胞的凋亡有影响,且与浓度与时间成正相关,细胞凋亡率组间差异有显著性意义(P < 0.05).提示大黄素可诱导肾小球系膜细胞凋亡,且与药物浓度及时间成正相关.
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补肾健脾活血方对高糖环境下MC3T3-E1细胞增殖及成骨分化影响研究
目的:探讨补肾健脾活血方对高糖环境下MC3T3-E1细胞的增殖和成骨分化的影响.方法:以MC3T3-E1细胞为研究对象,制备补肾健脾活血方含药血清,实验分为空白对照组、高糖组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、二甲双胍组.采用CCK-8法检测补肾健脾活血方对高糖环境下MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响,通过碱性磷酸酶(ALP)活性测定和骨钙素(OC)含量测定来观察补肾健脾活血方对高糖下MC3T3-E1细胞分化能力的影响.结果:与高糖组相比,中药组一定程度上能提高高糖(25 mmol/L)条件下MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力,以中药中剂量组效果更为显著(P＜0.05或P＜0.01).高糖条件下的中药高、中剂量组更有利于成骨细胞的增殖和分化,与其他组相比P＜0.05;且中药高、中剂量组的骨钙素含量较其他组显著增高,P＜0.05.结论:补肾健脾活血方能够促进高糖环境下MC3T3-E1成骨细胞增殖及分化功能.
关键词： 高糖培养 MC3T3-E1细胞 补肾健脾活血方 增殖功能 分化功能 -
肌肽对高糖环境下心肌成纤维细胞胶原表达的影响
目的:探讨肌肽对高糖环境下心肌成纤维细胞中胶原生成的影响及作用机制.方法:原代培养心肌成纤维细胞,将细胞分为正常糖组(NG,5.5mmol/L glucose)、高糖组(HG,25mmol/L glucose)、高糖+10mmol/L肌肽组、高糖+20mmol/L肌肽组、高糖+40mmol/L肌肽组、高糖+SB组(HG+10 μmol/L SB203580)、高糖+PD组(HG+10 μmol/L PD98059).ELISA检测胶原Ⅰ、Ⅲ的含量,Western blot检测TGF-β1、p-p38 MAPK和p-ERK(1/2)等蛋白的表达.结果:与正常糖组相比,高糖组中胶原Ⅰ和胶原Ⅲ含量增加(P＜0.01)；TGF-β1、p-p38和p-ERK等表达增加(P＜0.01)；与高糖组相比,高糖+肌肽组中胶原Ⅰ、Ⅲ、TGF-β1、p-p38、和p-ERK等均降低(P＜0.05)；高糖+SB组和高糖+PD组中胶原Ⅰ、Ⅲ表达减少(P＜0.05).结论:肌肽对心肌成纤维细胞中胶原生成具有抑制作用,且通过MAPK通路实现.
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α-硫辛酸对高糖环境下心肌成纤维细胞TGF-β1/Smads信号通路的影响
目的:探讨α-硫辛酸(α-LA)对高糖环境下心肌成纤维细胞(CFb)转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads信号通路的影响.方法:将原代培养乳鼠CFb按培养液不同分为正常糖组(5.5 mmol/L葡萄糖),高糖组(25.5 mmol/L葡萄糖),α-硫辛酸干预组:高糖+不同浓度α-硫辛酸(100、200、300 μmol/L).噻唑蓝四氮唑(MTT)比色法检测成纤维细胞增殖情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测胶原I的含量,蛋白质印迹法检测TGF-β1、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、Smad2/3、Smad7蛋白的表达.结果:与正常糖组相比,高糖组CFb增殖明显增加(P＜0.01),胶原I分泌量增加,TGF-31、p-Smad2/3、Smad2/3蛋白表达增加、Smad7蛋白表达降低.经不同浓度α-硫辛酸(100、200、300 μmol/L)处理后,CFb增殖、胶原I含量明显降低,TGF-β1、p-Smad2/3、Smad2/3蛋白表达降低,Smad7蛋白表达升高.结论:α-硫辛酸抗糖尿病心肌病心肌纤维化作用可能部分通过抑制TGF-β1/Smads信号途径实现.
关键词： α-硫辛酸 高糖培养 胶原 TGF-β1/Smads信号通路 -
西格列汀对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化的影响
目的 探讨西格列汀(SIT)对高糖培养的肾小管上皮细胞转分化的影响.方法 将体外培养的人近端肾小管上皮细胞HK-2分为正常组(NG组,5.56 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG组,60 mmol/L葡萄糖)、西格列汀组(SIT组,60 mmol/L葡萄糖+5μmol/L西格列汀)等,在用CCK-8证实西格列汀对正常培养的HK-2细胞无毒性的基础上,选择一个有效的药物浓度,以转化生长因子-β1(TGF-p1)抑制剂SB-431542(5μmol/L)作为对照.各组细胞培养72 h时后,倒置显微镜观察HK-2细胞形态.采用Western blot法检测细胞中TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及E-cadherin蛋白表达.结果 高糖可以诱导HK-2细胞形态由多边鹅卵石样发生纤维化样改变,上调细胞中促纤维化因子TGF-β1蛋白表达,降低细胞中上皮表型蛋白E-cadherin的表达,并增加间质表型蛋白α-SMA的表达.CCK-8结果显示,西格列汀浓度超过5μmol/L对正常培养的HK-2细胞具有毒性.西格列汀可以改善高糖导致的HK-2细胞形态的变化,并逆转高糖诱导的HK-2细胞中TGF-β1表达的增加、E-cadherin表达的减少及α-SMA表达的增加;TGF-β1的抑制剂SB-431542也能达到与西格列汀相同的效果.结论 西格列汀可以改善高糖诱导的HK-2细胞上皮-间质转分化,此效应可能与抑制TGF-β1信号通路有关.
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补肾健脾活血方对高糖环境下MC3T3-E1细胞的骨分化及凋亡的影响
目的 探讨补肾健脾活血方对高糖环境下MC3T3-E1细胞的成骨分化和凋亡的影响.方法 以MC3T3-E1细胞为研究对象,制备补肾健脾活血方含药血清,实验分为空白对照组、高糖组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、二甲双胍组.采用流式细胞术检测MC3T3-E1成骨细胞凋亡,蛋白质免疫印记技术(Western-blot)检测来观察成骨分化相关蛋白的表达.结果 与高糖组相比,中药组对高糖(25mmol/L)条件下MC3T3-E1细胞能够一定程度上抑制成骨细胞凋亡,以中药中剂量组效果更为显著(P＜0.01);高糖条件下的中药组能够促进成骨分化相关蛋白BMP2和Runx2的表达,以中药高剂量组效果较为显著(P＜0.01).结论 补肾健脾活血方能够促进高糖环境下MC3T3-E1成骨细胞分化和抑制凋亡的作用.
关键词： 高糖培养 MC3T3-E1细胞 补肾健脾活血方 成骨分化 细胞凋亡 -
PDTC对高糖培养大鼠肾成纤维细胞中MCP-1表达的影响
目的:探讨核因子-κB(NF--κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对高糖培养大鼠肾成纤维细胞(NRK)中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响.方法:将NRK分4组进行体外培养:(1)正常组:5.6mmol/L的葡萄糖;(2)高糖组:30mmol/L葡萄糖;(3)高糖+PDTC 1组:30mmo/L葡萄糖+5μmol/LPDTC;(4)高糖+PDTC 2组:30mmo/L葡萄糖+10μmol/LPDTC,分别于培养24h、48h取各组NRK采用RT-PCR检测其MCP-1 mRNA表达水平,采用Western Blot检测MCP-1蛋白表达水平.结果:与正常组相比,高糖组MCP-1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),不同浓度PDTC干预后,MCP-1 mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.05),且随PDTC浓度增大,下降更明显.结论:高糖可使NRK中MCP-1表达增高,PDTC能抑制NRK中MCP-1表达.
关键词： 吡咯烷二硫氨基甲酸 单核细胞趋化蛋白-1 肾成纤维细胞 高糖培养 大鼠 -
当归对高糖所致内皮细胞损伤的保护作用
目的:研究高糖培养液对体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV304的影响及当归注射液对高糖培养环境中内皮细胞功能的保护作用.方法:在RPMI1640培养液中培养内皮细胞后,分成对照组、高糖培养组、高糖+当归组、当归组,培养48 h后观察各组内皮细胞形态、检测培养液中一氧化氮(NO)浓度和ECV304细胞增殖活性.结果:高糖培养ECV304细胞有肿胀现象,且数量减少;当归干预后,ECV304细胞形态与对照组相似,且数量增多.高糖培养的ECV304细胞增殖活性和NO浓度较高糖+当归组显著减少(P<0.05),而当归组与对照组无统计学差异(P>0.05).结论:当归注射液可以预防高糖培养对内皮细胞增殖及分泌NO功能的损害,从而对糖尿病患者的血管损害可能起到一定的保护作用.
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丹酚酸B对高糖培养肾小管上皮细胞转分化的影响及意义
目的：探讨丹酚酸 B 对高糖诱导肾小管上皮细胞分化的影响及可能机制。方法：体外培养大鼠肾小管上皮细胞 NRK52E 随机分为正常糖（NG）组、高渗（HM）组、高糖（HG）组和高糖＋Sal B（HB）组，分别培养24 h；采用免疫酶细胞化学染色对 NRK52E 细胞进行鉴定，MMT 法检测丹酚酸 B 对细胞生长活性的影响，免疫荧光细胞化学和 Western blotting 检测各组 TGF-β1、E-caderin、α-SMA 和 Col-Ⅳ蛋白的表达。结果：与 NG 组相比较，HG 组肾小管上皮细胞中 TGF-β1、α-SMA 和 Col-Ⅳ蛋白表达增多（P ＜0．05），而 E-cadherin 蛋白表达降低（P＜0．05）；与 HG 组比较，HB 组肾小管上皮细胞中 TGF-β1、α-SMA 和 Col-Ⅳ蛋白表达减少（P ＜0．05），而 E-cad-herin 蛋白表达增多（P ＜0．05）。结论：丹酚酸 B 对高糖诱导肾小管上皮细胞的上皮－间充质转化（EMT）有明显抑制作用，其机制可能是通过抑制 TGF-β1的表达，改善了肾小管纤维化病变的发生发展。
关键词： 肾小管上皮细胞 高糖培养 丹酚酸 B 转化生长因子-β1 上皮 -间充质细胞转化 -
虫草素对高糖培养的恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮细胞血管新生的影响
目的：观察虫草素对高糖培养的恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮细胞(RF/6A)血管新生作用的影响,探讨其可能的作用机制。
方法：培养 RF/6A 细胞,分为正常对照组(NC 组)、高糖对照组(HG 组)、高糖加不同浓度的虫草素组(HG+10μg/ mL组、HG+50μg/ mL 组、HG+100μg/ mL 组)。采用 CCK8法检测各组细胞的增殖活性；采用 Transwell 实验检测各组细胞的迁移；采用 Matrigel 检测各组管腔形成的情况；采用 Western-blot 检测各组细胞中 VEGF 和 VEGFR2蛋白表达的情况。
结果：与 NC 组相比,HG 组 RF/6A 的增殖活性增加( P<0.05)。不同浓度的虫草素对 RF/6A 的增殖均有抑制作用,随着虫草素浓度增加,细胞活性下降。 HG+10μg/ mL组、HG+50μg/ mL 组、HG+100μg/ mL 组的增殖活性抑制率分别为(10.2依0.9)%、(23.4依1.5)%、(31.1依1.2)%,与 HG 组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。 NC 组、HG组、HG+10μg/ mL 组、HG+50μg/ mL 组、HG+100μg/ mL 组细胞迁移个数分别为55.6依2.70、87.4依2.40、65.4依2.7、57.8依2.38、62.4依2.77个。与 NC 组相比,HG 组迁移细胞数量增加(P<0.05)；不同浓度虫草素组细胞迁移数量随着虫草素浓度的增加而减少,与 HG 组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。 NC 组、HG 组、HG+10μg/ mL 组、HG+50μg/ mL 组、HG+100μg/ mL 组的细胞管腔形成个数分别为18.7依2.08、25.7依1.52、19.9依1.57、16.3依2.51、5.7依1.72个。与 NC 组相比,HG 组细胞管腔形成个数增加(P<0.05)；不同浓度虫草素组细胞管腔形成个数随着虫草素浓度的增加而减少,与 HG 组相比,差异具有统计学意义( P <0.05)。与 NC 组相比, HG 组 VEGF 和VEGFR2蛋白表达的量增加(P<0.05)；不同浓度虫草素组中细胞内 VEGF 和 VEGFR2蛋白表达的量均低于高糖对照组(P<0.05)。
结论：虫草素可能通过抑制高糖下 VEGF 和 VEGFR2蛋白的表达,抑制 RF/6A 细胞增殖、迁移和管腔形成,进而抑制血管新生。关键词： 虫草素 高糖培养 恒河猴脉络膜-视网膜血管内皮细胞 血管内皮生长因子 血管新生
