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非小细胞肺癌患者外周血PD-1表达水平及淋巴细胞亚群分析
目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血细胞程序性死亡蛋白1(programmedcell death protein 1-ligand l,PD-L1)的表达水平和淋巴细胞亚群比例与NSCLC临床分期的关系及其临床意义.方法:收集2014年3月至12月承德医学院附属医院肿瘤科收治的38例肺腺癌、35例肺鳞癌患者为实验组,以30例健康体检者作为对照组.采集受试者晨起外周血5ml,用ELISA法检测血清PD-1的表达水平;流式细胞术检测CD4+、CD8+、CD19+、NK细胞比例.结果:实验组血中PD-1表达水平高于对照组[(104.98±20.76)、(109.13 ±24.65) vs (50.80±14.38)pg/ml,P＜0.01];实验组外周血中CD4+、NK细胞比例低于对照组(P ＜0.001),CD8+细胞比例高于对照组(P＜0.01);Ⅲ、Ⅳ期肺癌CD4+细胞比例和NK细胞比例均低于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0.01),PD-1表达水平CD8+细胞比例均高于Ⅰ、Ⅱ期(P ＜0.01);CD19+比例差异无统计学意义(P＞0.05);PD-1的表达水平与NK细胞比例呈负相关(P＜0.01),与CD8+细胞比例呈正相关(P＜0.01),与CD4+、CD19+无相关性(P＞0.05).结论:NSCLC患者外周血PD-1的表达水平较健康体检者明显上调,检测外周血PD-1表达水平和淋巴细胞亚群比例对NSCLC患者病情监测及预后判断有重要意义.
关键词： 非小细胞肺癌 程序性死亡蛋白1(PD-1) 淋巴细胞亚群 -
程序性死亡蛋白1(PD-1)在转染的HEK293T细胞的表达和鉴定
目的 优化HEK293T细胞转染条件,比较程序性死亡蛋白1(PD-1)在不同真核载体的表达水平以高效获取目标蛋白.方法 设计L9(33)正交试验,对细胞转染条件进行优化;扩增人PD-1胞外段基因,构建PD-1重组蛋白表达载体,瞬时转染HEK293T细胞,通过ELISA、Western blot对pCMV3、pcDNA3.1和pMH3三种真核表达载体的蛋白表达水平进行比较.结果 PD-1胞外段蛋白编码序列成功构建到pcDNA3.1和pMH3真核表达载体上,目的蛋白成功表达.在佳转染条件下,PD-1重组蛋白在pMH3中的表达量高,其次为pCMV3、pcDNA3.1的表达量低.结论 人PD-1胞外段蛋白在pMH3-PD1真核载体转染的HEK293T细胞中表达量高.
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芪玉三龙汤降低肺癌荷瘤小鼠程序性死亡蛋白1及配体(PD-1/PD-L1)的水平
目的 研究芪玉三龙汤在Lewis肺癌小鼠体内的抑瘤效应及对共刺激分子程序性死亡蛋白1及配体(PD-1/PD-L1)表达的影响.方法 采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,荷瘤成功后随机分为模型组、化疗组、中药高、中、低剂量组、联合组,每组8只;实验第11天开始中药低、中、高剂量组小鼠分别按(20.12、40.24、80.48)g/(kg·d)灌胃给药,化疗组按照0.4 mL顺铂腹腔注射给药,联合组以高剂量中药灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组按照等量生理盐水给药,1次/d,连续给药10d;检测各组荷瘤小鼠肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;称取瘤质量,计算抑瘤率;实时定量PCR和Western blot法分别检测荷瘤小鼠脾脏PD-1及肿瘤组织PD-L1的mRNA和蛋白水平.结果 与模型组比较,中药高剂量组能够抑制肺癌移植瘤生长,抑瘤率为23.86％,联合组与化疗组抑瘤率相当;中药高剂量组能明显降低脾脏组织PD-1 mRNA及PD-1蛋白表达,抑制肿瘤组织PD-L1 mRNA及蛋白表达.联合组PD-1、PD-L1蛋白水平明显低于化疗组,但对其他指标的交互作用无统计学意义.结论 芪玉三龙汤能通过降低PD-1/PD-L1水平温和抑制肺癌移植瘤生长.
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胃腺癌患者外周血PD-1+淋巴细胞和CD4+CD25+FOXP3+T细胞增加
目的 检测胃腺癌患者外周血程序性死亡蛋白1(PD-1)阳性淋巴细胞和CD4+CD25+FOXP3+T细胞的频数.方法 选取胃腺癌术前患者29例,年龄、性别匹配的29例健康体检中心健康志愿者作为对照,流式细胞术检测两组外周血不同亚群淋巴细胞表面PD-1表达及CD4+CD25+FOXP3+T细胞的频数.结果 胃腺癌患者外周血淋巴细胞表面PD-1阳性率和CD4+CD25+FOXP3+T细胞频数高于健康志愿者.胃腺癌患者外周血PD-1与CD4+CD25+FOXP3+T细胞存在正相关.结论 胃腺癌患者外周血PD-1+淋巴细胞和CD4+CD25+FOXP3+T细胞增加.
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肝癌患者外周血CD3+T细胞和CD19+B细胞中程序性死亡蛋白1(PD-1)及其配体表达水平增加
目的 观察肝细胞肝癌(HCC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中程序性死亡蛋白1(PD-1)和配体以及γ干扰素(IFN-γ)水平的变化.方法 采集15例早期HCC患者、13例进展期HCC患者和12例健康人(对照组)的外周血并分离PBMC.流式细胞术检测PBMC中PD-1、PD-L1和PD-L2的表达,ELISA检测血清中IFN-γ的水平,利用Pearson相关系数法和One-way ANOVA分析PD-1与IFN-γ的相关性.结果 进展期HCC患者外周血CD3+T细胞和CD19+B细胞中PD-1、PD-L1和PD-L2的表达水平和血清IFN-γ水平显著高于健康人群和早期HCC患者,HCC患者外周血CD3+T细胞和CD19+B细胞PD-1、PD-L1表达水平与IFN-γ呈正相关.结论 肝癌患者PBMC中PD-1、PD-L1和PD-L2分子表达增加,且PD-1、PD-L1与IFN-γ水平有关联.
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可溶性程序性死亡蛋白1(sPD-1)与肿瘤关系的研究进展
程序性死亡蛋白1(PD-1)是免疫细胞表面一种细胞膜受体,在抑制T细胞免疫反应、维持机体免疫稳定性等方面发挥着重要作用.PD-1 mRNA可通过剪接形成可溶性PD-1(sPD-1),sPD-1对T细胞具有激活作用,并具有促进树突状细胞(DC)成熟的功能.肿瘤患者体内sPD-1增加,使其具有肿瘤生物标志物的潜能.另外,sPD-1与PD-1抗体一样可以与肿瘤表面PD-L1结合,进而阻止它与T细胞表面的PD-1相结合,发挥抗肿瘤功能,因而具有潜在的临床应用前景.
