首页 > 文献资料
-
鸟氨酸脱羧酶抗酶-1过表达促进非小细胞肺癌细胞系A549凋亡
目的 探讨上调鸟氨酸脱羧酶( ODC)抗酶-1( AZ-1)对非小细胞肺癌细胞系A549多胺代谢酶表达和细胞凋亡的影响.方法 制备靶向提高人源性AZ-1表达的pcDNA3. 1-HOAZ-1质粒,用其与空载质粒pcDNA3. 1(-)分别转染A549细胞,并设立未经任何处理的空白对照组,48 h后分别收集总RNA和蛋白质,通过反转录聚合酶链反应和蛋白质印记分析分别检测AZ-1、ODC和鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制剂-1( AZIN-1)的表达;同样的处理条件下应用流式细胞计量术检测细胞凋亡.结果 在转染pcDNA3. 1-HOAZ-1质粒后,ODC表达被明显抑制,AZIN-1的表达调节不明显;过表达 AZ-1引起细胞凋亡增加( P<0. 05) .结论 过表达 AZ-1能抑制 ODC表达和促进A549细胞凋亡.
关键词： 鸟氨酸脱羧酶抗酶-1 鸟氨酸脱羧酶 多胺 非小细胞肺癌细胞 -
奥拉帕尼对人非小细胞肺癌细胞增殖及辐射敏感性的影响
目的 探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂奥拉帕尼对人非小细胞肺癌细胞增殖及辐射敏感性的影响.方法 体外培养人非小细胞肺癌H460和H1299细胞,取对数生长期细胞进行实验.采用噻唑蓝(MTT)实验测定奥拉帕尼对H460和H1299细胞增殖的影响,克隆形成实验检测奥拉帕尼对H460和H1299细胞辐射敏感性的影响,彗星实验检测奥拉帕尼对H460和H1299细胞辐射诱导DNA损伤的影响.结果 MTT实验结果表明奥拉帕尼能显著抑制H460和H1299细胞的增殖(均P＜0.05),且H1299细胞对奥拉帕尼更敏感.克隆形成实验结果表明奥拉帕尼能显著增强H460和H1299细胞的辐射敏感性(均P＜0.05).彗星实验结果表明奥拉帕尼联合γ射线照射能显著提高H460和H1299细胞的DNA损伤水平.结论 奥拉帕尼能增强人非小细胞肺癌细胞的辐射敏感性,且奥拉帕尼的辐射增敏作用可能与其抑制细胞增殖、增强电离辐射诱导的DNA损伤有关.
-
应用凝集素芯片检测非小细胞肺癌细胞膜表面糖链表达
目的 应用凝集素芯片检测非小细胞肺癌细胞系A549和H460细胞膜表面糖链表达类型.方法 用胶原酶Ⅱ消化非小细胞肺癌细胞系,对提取的细胞进行荧光标记,利用凝集素对糖链的特异亲和性捕获细胞,激光扫描仪检测细胞膜表面糖链表达.结果 腺癌A549和大细胞肺癌H460除LTL和DBA这两个凝集素位点没有捕获到细胞外,其余各点均捕获到细胞.结论 根据凝集素的亲和特异性表明,非小细胞肺癌细胞膜表面糖链类型主要有:唾液酸、乙酰葡萄糖、乙酰半乳糖、甘露糖和半乳糖糖链,为建立癌症细胞膜表面糖链表达谱和寻找肺癌分子靶向治疗的药物作用位点提供理论依据.
-
TIPE2抑制AP-1蛋白增加人非小细胞肺癌细胞系NCI-H1975化疗敏感性的机制研究
目的:探讨TIPE2增强非小细胞肺癌细胞系NCl-H1975化疗敏感性及其机制.方法:非小细胞肺癌系NCI-H1975转入TIPE2慢病毒载体后,加入CDDP后使用CCK-8测量IC50值,凋亡细胞用AnnexinV/FITC和PI凋亡检测试剂盒进行检测,Western blot检测转染TIPE2后AP-1及MDR-1的蛋白表达量,实时荧光定量PCR检测转染TIPE2后IL-1、IL-6及TNF-α mRNA水平.结果:(1)TIPE2降低非小细胞肺癌系NCI-H1975细胞IC50值(P＜0.001);(2)TIPE2增加非小细胞肺癌系NCI-H1975细胞对CDDP的凋亡率(P＜0.05);(3) TIPE2可显著降低非小细胞肺癌系NCI-H1975细胞中AP-1及MDR1的表达量;(4) TIPE2可显著降低非小细胞肺癌系NCI-H1975细胞中IL-1、IL-6及TNF-α mRNA水平的表达(P＜0.01).结论:TIPE2可能通过抑制AP-1蛋白增加非小细胞肺癌细胞系NCl-H1975对CDDP的化疗敏感性.
-
布鲁生抑制非小细胞肺癌细胞环氧化酶2表达的研究
背景与目的:布鲁生是中药马钱子有效成分之一,具有镇痛、抗炎和抑制血小板聚集等多种药理活性.鉴于该药物的细胞毒性,研究表明其具有明显的抑制肿瘤细胞生长的作用.本研究旨在观察布鲁生对人非小细胞肿痛细胞A549增殖与凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:MTT法检测布鲁生对A549细胞存活的影响;流式细胞仪、荧光显微镜法研究布鲁生对A549细胞凋亡的影响;酶联吸附法检测布鲁生对A549细胞释放PGE2的影响;RT-PCR法检测布鲁生对A549细胞COX-2 mRNA的影响;Western印迹法检测布鲁生对环氧化酶COX-2蛋白表达的影响:荧光素酶报告基因法检测布鲁生对COX-2转录活性的影响.结果:布鲁生能明显抑制A549细胞增殖,并旱剂量依赖性诱导A549细胞凋亡;能抑制A549细胞中环氧化酶COX-2的表达与PGE2的释放.过度表达COX-2能抑制布鲁生诱导的细胞凋亡;COX-2 SiRNA处理细胞后能明显增强布鲁生诱导的A549细胞凋亡作用.布鲁生能显著性抑制COX-2的转录激活.结论:COX-2是布鲁生诱导细胞凋亡重要的靶蛋白.
-
大分子灵芝多糖对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用
目的:探讨超滤管截留得到的大分子量灵芝多糖(ultrafiltered macromolecular Ganoderma lucidum polysaccharide,UM-GLP)对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用.方法:以非小细胞肺癌细胞A549和NCI-H1299作为研究对象,并以空白培养基和紫杉醇(PTX)处理分别作为空白对照和阳性对照.采用MTr法检测UM-GLP对A549和NCI-H1299细胞增殖的抑制作用,划痕实验检测UM-GLP对A549和NCI-H1299细胞迁移能力的抑制作用,Transwell实验检测UM-GLP对A549和NCI-H1299细胞侵袭能力的抑制作用.结果:MTT实验结果显示,随着UM-GLP和PTX药物浓度的增加,细胞增殖抑制率明显增加,UM-GLP浓度在0.5～2.0 mg/ml时,与PTX浓度在25～ 100 nmol/L的抑制效果相仿.A549和NCI-H1299细胞划痕实验结果显示,与空白对照组比较,UM-GLP组和PTrx组的迁移距离均明显缩短(P＜0.05).Transwell实验结果显示,UM-GLP(2 mg/ml)处理后,非小细胞肺癌细胞侵袭数量显著低于空白对照组(P＜0.05);并且UM-GLP对A549细胞侵袭能力的抑制作用与紫杉醇组(0.1μmol/L)相当,对NCI-H 1299细胞侵袭能力的抑制作用小于紫杉醇组(0.1 μmol/L) (P＜0.05).结论:大分子量灵芝多糖可有效抑制非小细胞肺癌细胞A549和NCI-H1299的增殖、迁移和侵袭能力.
-
白藜芦醇与吉非替尼的协同抗肺癌作用及机制研究
目的 探讨白藜芦醇是否能提高吉非替尼对肺癌细胞的杀伤活性并研究其机制.方法 MTT法检测人非小细胞肺癌细胞系PC9细胞在低浓度吉非替尼和白藜芦醇处理下的细胞活力.Western blot实验检测低浓度吉非替尼和白藜芦醇对PC9细胞c-met表达水平,表皮生长因子受体(EGFR)、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)磷酸化水平及caspases活化水平.流式细胞术检测PC9细胞在低浓度吉非替尼和白藜芦醇处理下的凋亡率.结果 低浓度吉非替尼联合白藜芦醇对PC9的细胞活力抑制率显著高于低浓度吉非替尼组和白藜芦醇组[(57.7±3.3)％比(12.4±1.1)％、(8.6±0.8)％,P＜0.05].白藜芦醇处理可诱导PC9细胞c-met蛋白的下调并显著增强低浓度吉非替尼对PC9细胞PI3K和AKT磷酸化水平的抑制作用.低浓度吉非替尼联合白藜芦醇组对PC9细胞活力的抑制率和凋亡诱导率显著高于低浓度吉非替尼组和低浓度吉非替尼+白藜芦醇+c-met质粒组[抑制率:(57.7±3.3)％比(12.4±1.1)％、(16.3±1.3)％,P＜0.05;凋亡率:(30.9±1.8)％比(7.2±0.5)％、(10.6±0.8)％,P＜0.05].低浓度吉非替尼联合白藜芦醇组对PC9细胞caspase-9及caspase-3的活化显著强于低浓度吉非替尼组和低浓度吉非替尼+白藜芦醇+c-met质粒组.结论 白藜芦醇可能通过下调c-met的表达提高肺癌细胞对吉非替尼的敏感性.
-
柚皮苷通过下调p70S6K抑制非小细胞肺癌细胞生长的作用机制研究
目的:研究柚皮苷对非小细胞肺癌细胞生长的作用及机制.方法:应用SRB法检测柚皮苷对非小细胞肺癌细胞株生长的抑制作用.用Western blot法检测柚皮苷对p70S6K的调控作用.利用质粒过表达p70S6K,用SRB法检测过表达p70S6K后对柚皮苷抑制细胞生长作用的影响.利用小干扰RNA阻抑p70S6K的表达,用SRB法检测阻抑p70S6K的表达对柚皮苷抑制细胞生长作用的影响.结果:柚皮苷呈浓度依赖性抑制非小细胞肺癌细胞的生长,并且可以下调p70S6K的表达.过表达p70S6K可以削弱柚皮苷抑制细胞生长的作用,敲降p70S6K可以增强柚皮苷抑制细胞生长的作用.结论:柚皮苷通过下调p70S6K抑制非小细胞肺癌细胞的生长.
-
橙皮苷对TGF-β1诱导的A549非小细胞肺癌细胞上皮间质转化的影响
目的:探讨橙皮苷对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人非小细胞肺癌细胞上皮-间质转化的影响.方法:以A549人非小细胞肺癌细胞系作为研究对象.用MTT法,分别检测橙皮苷对正常培养条件或TGF-β1刺激下细胞增殖的影响.应用2种方法评估橙皮苷对TGF-β1刺激条件下A549细胞的上皮间质转化:圆形度值定量评估细胞的形态变化;双抗体夹心酶联免疫吸附法(enzyme linked-immuno-sorbent assay,ELISA)检测上皮细胞钙黏蛋白(E-cad-herin,E-cad)、a-平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,a-SMA)、基质金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1)和基质金属蛋白酶-9(metallopreoteinases-9,MMP-9)水平.结果:0～40 μmol· L-1的橙皮苷对正常培养条件或TGF-β1刺激后A549细胞的增殖没有显著影响.5 ng·mL-1 TGF-β1能够诱导A549细胞的上皮间质转化:由上皮特征的铺路石状的细胞形态转化为梭形形态,圆形度值减少;E-cad分泌量减少和a-SMA合成量增加.另外,MMP-9分泌量增加,MMP-9/TIMP-1比值增加.在细胞出现形态改变后,应用橙皮苷(20μmol·L-1或40 μmol· L-)能够降低a-SMA、MMP-9水平和MMP-9/TIMP-1比值,增加E-cad水平,对细胞的圆形度值没有影响.结论:橙皮苷减轻TGF-β1诱导的非小细胞肺癌细胞的上皮间质转化程度,对非小细胞肺癌的转移和扩散有一定的抑制作用.
-
10-去乙酰基紫杉醇配伍紫杉醇对两种肿瘤细胞 生长抑制的作用
目的:观察紫杉醇配伍紫杉烷类成分10-去乙酰基紫杉醇(10-DAT)对A549、LS174T肿瘤细胞株的体外抑制作用.方法:采用A549、LS174T肿瘤细胞株进行MTT细胞毒性实验,观察10-DAT单独给药、10-DAT配伍紫杉醇对两种肿瘤细胞的生长抑制作用.结果:10-DAT单独使用时对LS174T细胞有一定的生长抑制作用,对A549则无抑制生长作用;但配伍紫杉醇反而会拮抗紫杉醇对A549和LS174T细胞的毒性作用.结论:10-DAT单独使用对LS174T细胞具有生长抑制作用,在高浓度下会拮抗紫杉醇对LS174T和A549细胞的细胞毒性,其原因可能源自两个化合物对微管蛋白的竞争性结合,确切机制有待进一步深入研究.
-
丹参酮ⅡA抑制非小细胞肺癌NCI-H520细胞生长的研究
目的:探讨丹参酮ⅡA抑制非小细胞肺癌NCI-H520细胞生长及其分子机制.方法:用不同浓度的丹参酮ⅡA (0,5,10,20μM)处理非小细胞肺癌NCI-H520细胞后,采用MTT法检测非小细胞肺癌NCI-H520细胞活力；采用流式细胞计检测非小细胞肺癌NCI-H520细胞周期;应用免疫印迹方法检测蛋白表达水平.结果:丹参酮ⅡA显著抑制非小细胞肺癌NCI-H520细胞生长,并呈浓度依赖方式；流式细胞检测到丹参酮ⅡA处理非小细胞肺癌NCI-H520细胞后,细胞周期S期细胞比例较处理前显著增多(P＜0.05)；免疫印迹实验检测到丹参酮ⅡA处理非小细胞肺癌NCI-H520细胞后,细胞周期蛋白Cyclin E及CDK2抑制剂P27较处理前显著上调(P＜0.05).结论:丹参酮ⅡA可能通过上调P27抑制CDK2,导致非小细胞肺癌细胞NCI-H520细胞周期S阻滞.
-
放射控导正反馈基因环路对肺癌wt-p53基因靶向性表达的研究
目的 构建pE6R4/p53/GFP重组质粒并检测其在人非小细胞肺癌H1299(p53-/-)细胞的辐射诱导表达.方法 用嵌合型增强子E6R4取代pci-neo质粒的CMV增强子,将wt-p53cDNA全长序列、IRES2-EGFP报告基因片段构建于嵌合型增强子E6R4下游,获得pE6R4/p53/GFP重组质粒,采用脂质体法将重组质粒转染人非小细胞肺癌H1299(p53-/-)细胞;采用RT-PCR方法鉴定wt-p53基因整合情况;Western-blot方法检测不同辐射剂量8mV X线照射后,被转染细胞中wt-p53蛋白表达水平和持续时间.结果 酶切和测序鉴定pE6R4/p53/GFP重组质粒构建正确;不同剂量8mV X线照射后,4Gy照射剂量时wt-p53基因表达强,且持续时间延长.结论 成功将辐射反应元件和正反馈基因环路技术相结合,实现了wt-p53基因的表达调控,为进一步研究非小细胞肺癌的放射-基因联合治疗奠定了基础.
-
人非小细胞肺癌细胞膜钾离子通道特性的研究
目的研究人非小细胞肺癌细胞膜钾离子通道特性。方法采用原代培养的非小细胞肺癌细胞、肺部良性病变和癌旁支气管上皮细胞，应用膜片钳全细胞记录方式检测细胞膜钾离子通道特性。结果 (1)非小细胞肺癌细胞膜K＋通道表达的K＋电流具有电压依赖性，能被K＋通道阻断剂TEA阻断。鳞癌细胞膜电流具有失活趋势和内向整流特点；腺癌细胞膜电流具有不失活特性，无内向整流特点。TP＝50～90?mV时，时间常数(τ值)为3.6～9.8?ms。非小细胞肺癌细胞膜电容为(15.35±0.65)?pF，K＋电流密度为(121.08±8.35)?A／F。(2)非小细胞肺癌细胞膜K＋电流幅度、电流密度和膜电容较支气管上皮细胞明显增高（P＜0.001），癌细胞τ值显著小于支气管上皮细胞的τ值（P＜0.001）。结论 (1)非小细胞肺癌细胞膜存在与延迟整流性类似的钾离子通道,且表达明显增加，活动明显增强。(2)检测肺癌细胞膜K＋通道可为研究肺癌发生、发展、侵袭和转移的信号传导提供理论基础和实验依据。
-
APE1表达变化对人非小细胞肺癌细胞 A549增殖的影响
目的：探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1（apurinic/ apyrimidinic endonuclease 1，APE1）对人非小细胞肺癌细胞 A549增殖能力的影响，为肺癌的个性化靶向治疗提供理论依据。方法：使用脂质体转染法将重组表达质粒 pSIREN - RetroQ - APE1- shRNA 和 pOZN - HA - APE1导入 A549细胞，免疫印迹检测 APE1表达情况。MTT、平板克隆实验、免疫印迹检测 APE1对非小细胞肺癌细胞增殖的影响，流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果：重组载体 pSIREN - RetroQ - APE1- shRNA 转染细胞后，显著抑制 A549细胞中 APE1蛋白的表达，与对照组相比，增殖速率明显下降（P <0.05），平板克隆形成显著减少（P <0.05），并阻止细胞周期 G0/G1期向 S 期转化，降低 CDK2表达。而过表达 APE1可增加 A549细胞活力，促进细胞增殖，促进细胞周期G0/ G1期向 S 期转化。结论：APE1表达下调对非小细胞肺癌细胞 A549生长具有抑制作用，为临床抑制肿瘤生长提供了新的作用靶点。
-
EMT 参与人非小细胞肺癌 A549细胞多西紫杉醇耐药性的发生
目的：建立耐多西紫杉醇的人非小细胞肺癌细胞株 A549/ Docetaxel，并初步探索其与上皮间质转化（EMT）的关系。方法：用抗肿瘤药物多西紫杉醇体外以浓度递增和短时反复作用的方法诱导和筛选人非小细胞肺癌 A549细胞耐多西紫杉醇的细胞株；用 MTT 的方法检测细胞耐药指数及生长曲线，流式细胞仪检测细胞周期，RT - PCR 和 Western blot 检测 EMT 相关蛋白 fibronectin、vimentin 和 E - cadherin 的表达。结果：A549/ Docetaxel 对多西紫杉醇和紫杉醇的耐药指数分别为8.91和2.82；耐药细胞生长缓慢，倍增时间延长，S期细胞增多，G2期减少。549/ Docetaxel 与亲本 A549细胞相比，上皮细胞标志分子 E - cadherin 的表达减少，而间质细胞标志分子 fibronectin 和 vimentin 的表达增加。结论：成功建立了一株耐多西紫杉醇的细胞株A549/ Docetaxel，耐药的发生可能与 EMT 相关。
