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腺病毒介导的HSV-tk/GCV自杀基因系统体内外旁观者效应的观察
目的观察腺病毒介导的HSV-tk/GCV自杀基因系统的体外、体内接触及体内远端旁观者效应. 方法采用向体外培养的tk阴性人肝癌BEL-7402细胞中加入不同比例tk阳性同种细胞;向荷tk阴性BEL-7402瘤小鼠瘤体内注射不同数量tk阳性同种细胞;向双侧荷瘤小鼠一侧瘤体内注射重组腺病毒,GCV作用后用不同方法来观察不同情况下的旁观者效应. 结果体外组中观察到明显旁观者效应,当tk阳性细胞占10%时,混合细胞存活率为36.6%;体内接触组中也观察到旁观者效应,实验组瘤体生长明显受到抑制(P<0.05);体内远端组中,未观察到旁观者效应(P>0.05). 结论腺病毒介导的HSV-tk/GCV自杀基因系统在体外及体内接触时均存在旁观者效应.
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18氟-胸腺嘧啶核苷正电子发射体层-CT显像在胸部肿瘤上的初步研究
目的 评价18氟-胸腺嘧啶核苷(18F-FLT)正电子发射体层(PET)-CT显像对胸部肿瘤定性诊断的价值.方法 对17例做了18氟-脱氧葡萄糖(18F-FDG)PET-CT检查,但定性诊断困难的患者,在第2～3天进行了18F-FLT PET-CT显像.分析病变在两种不同显像剂PET-CT上的表现,分别测量二者的大标准摄取值(maxSUV).结果 8例恶性病变(5例肺癌、1例纵隔淋巴瘤、1例胸椎恶性肿瘤、1例胸椎转移瘤),其中7例见FLT异常摄取,5例肺癌平均maxSUV为4.2(鳞癌2例、腺癌2例、肺泡癌1例);9例良性病变(5例肺结核、1例肺炎、3例纵隔淋巴结结核)无或轻度摄取FLT,其中6例肺内良性病变平均maxSUV为1.6;9例良性病变中8例见FDG异常浓聚,其中6例肺内良性病灶平均maxSUV为3.9,3例纵隔淋巴结结核也见FDG明显摄取,平均maxSUV为11.0.11例肺内病灶FDG和FLT显像的敏感性、特异性、准确性分别为100.0%(5/5)、16.7%(1/6)、54.5%(6/11)和80.0%(4/5)、66.7%(4/6)、72.7%(8/11).结论 胸部肿瘤18F-FLT显像的特异性较高,在18F-FDG显像阳性,难以确定病变性质时,FLT可以作为FDG的有益补充,二者联合显像有助于提高胸部肿瘤诊断的准确性.
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淋巴瘤细胞株Raji摄取~(18)F-氟脱氧葡萄糖和~(18)F-氟脱氧胸腺嘧啶核苷的体外实验研究
目的 研究测定人淋巴瘤细胞株Raji摄取~(18)F-氟脱氧葡萄糖(~(18)F-FDG)和~(18)F-氟脱氧胸腺嘧啶核苷(~(18)F-FLT)的方法并比较两者的差异.方法 在不同条件下测定淋巴瘤细胞株Raji对~(18)F-FDG和~(18)F-FLT的细胞结合率:细胞数量1×10~5～1×10~7/瓶;~(18)F-FDG和~(18)F-FLT的放射性活度1.85～29.6 kBq;反应时间20～120min;葡萄糖浓度0～11.1mmol/L.结果 每瓶1×10~7个细胞、加入3.7 kBq ~(18)F-FDG、葡萄糖浓度在0～2.78 mmol/L、作用100min,~(18)F-FDG细胞结合率达到(50.42±1.07)%;每瓶1×10~7个细胞、加入3.7 kBq ~(18)F-FLT、作用100min,~(18)F-FLT细胞结合率达到(59.48±0.77)%;~(18)F-FDG和~(18)F-FLT的细胞结合率之间具有统计学差异(F=1192.805,P<0.001).结论 Raji细胞与~(18)F-FDG的结合率与细胞数量、作用时间及葡萄糖浓度有关,与~(18)F-FDG的放射性活度无关;Raji细胞与~(18)F-FLT的结合率与细胞数量和作用时间有关,与~(18)F-FLT的放射性活度及葡萄糖浓度无关;同等条件下,Raji细胞对~(18)F-FLT的细胞结合率高于~(18)F-FDG.
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维甲酸对体外培养兔视网膜色素上皮细胞DNA合成的影响
目的:研究维甲酸(retinoic acid,RA)对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞生长、增殖的影响.方法:通过细胞生长曲线的测定,观察10-6mol/L RA对RPE细胞生长的影响;通过3H-TdR掺入和液闪测定10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L RA作用RPE细胞5天、7.天时每分钟脉冲值(CPM),并计算抑制率.结果:RA作用的前3天内,对RPE细胞生长无明显影响;3天后RA对RPE细胞生长起抑制作用,这种抑制作用一直持续到第8天.终浓度为0.1%的无水乙醇与空白对照相比,经统计学处理,差别不显著(p＞0.05).在10-10～10-5mol/L范围内,RA对RPE细胞DNA合成有明显抑制作用(p＜0.01).结论:RA可抑制RPE细胞生长、增殖,且呈量效关系,RA的这种作用与抑制RPE细胞DNA合成有关.
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胸腺嘧啶核苷诱导肝癌HepG2细胞同步化
目的 探讨胸腺嘧啶核苷(TdR)诱导肝癌HepG2细胞同步化的方法.方法 于对数生长期的HepG2细胞中加入含终浓度为2.5 mmoL/L的TdR培养28 h后,PBS洗除TdR,加人新鲜血清培养基,此时记为0时刻,分别继续培养0、2、3、4、5、6、7、8、9、12、18、24、28 h,收集细胞,同时实验设立对照组,采用流式细胞术检测细胞周期.结果 分别于去除TdR后培养4、8、24 h获得78.1%的S期细胞、67.2%的G2/M期细胞、86.3%的G1期细胞.结论 终浓度为2.5 mmoL/L的TdR处理肝癌HepG2细胞28h,再以新鲜培养基培养不同时间,可以获得同步化效果较好的S、G2/M和G1期细胞.
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卵巢癌胸苷磷酸化酶及其mRNA的表达及临床意义
目的:研究卵巢肿瘤中胸腺嘧啶脱氧核苷磷酸化酶(TP)及其mRNA的表达与微血管密度(MVD)的关系及其临床意义.方法:卵巢良性肿瘤21例,卵巢癌35例.术后肿瘤组织用免疫组化法检测TP及factorⅧ的表达,计算MVD;用原位杂交(ISH)法检测TP mRNA.结果:卵巢癌TP、TP mRNA的阳性率分别为71.4%和48.5%,明显高于良性者的38.0%和28.0%(P＜0.001,P＜0.05).有淋巴结转移者TP、TPmRNA的表达率分别为100%和77%,明显高于无淋巴结转移者的65.3%和38.4%(P＜0.05).卵巢癌TP、TP mRNA表达与病理组织类型、细胞分化程度、临床期别、患者腹水多少无关.卵巢癌的MVD平均为28.27±22.34,明显高于良性者的12.53±16.58(P＜0.01).TP与MVD具有相关性,TP阳性者MVD明显增高.结论:TP和TP mRNA在卵巢癌中表达增强,是卵巢癌重要的促血管生成因子, TP表达与淋巴结转移、患者预后有关.
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三氟啦嗪对视网膜色素上皮细胞游离钙和三磷酸肌醇的影响
增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy, PVR)是一种严重的致盲性眼病，因此，研究药物对PVR的防治作用具有重要的临床意义。本研究拟用钙调素（calmodulin, CaM)抑制剂——三氟啦嗪( trifluoperazine ,TFP) 作用于体外培养的豚鼠视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium, RPE)细胞，应用IP3［3H］检测系统测定 RPE细胞内IP3浓度的动态变化，同时，应用Fura-2/AM荧光负荷技术测定RPE细胞内游离Ca2+（［ Ca2+］）i水平的变化,探讨在 TFP抑制RPE细胞增生过程中，IP3与［ Ca2+］i浓度的关系。1 材料和方法 材料：(IP3)［3H］检测试剂盒购自Amersham公司，液体闪烁计数仪LS-6500 Beckman产品，超高速离心机LE-89 Beckman 产品， F-2000荧光分光光度计日立公司产品，Fura-2/AM荧光指示剂Sigma产品。豚鼠RPE细胞培养及鉴定同文献［1］。药物作用曲线及细胞活力测定同文献［2］。 RPE细胞3H-TdR掺入法：取生长状态良好的RPE细胞，以5×106细胞/ml密度接种于96孔培养板，常规培养 24 h。空白对照加入不含任何药物培养液，实验组按实验设计需要的含药培养液，各浓度及对照均设 3孔，培养 72 h后，以每孔37 kBq的3H-TdR标记RPE细胞 6 h，收集细胞于玻璃纤维膜上，烘干，加入闪烁液，液闪计数仪测定3H-TdR掺入每分钟计数值（counts per minute , CPM）。以上实验同样条件重复2次，并以cpm值计算DNA合成抑制率，即（对照组cpm－实验组cpm）/对照组cpm。 IP3活性检测方法：各组RPE细胞（5×106个细胞），以平衡盐液冲洗 2次，以 1 mmol/L 二氯化锂抑制IP3水解，37℃培养箱孵育30 min,液氮终止反应，－70℃保存。将各个样品于 0℃下研磨成粉末，再加入15%三氯乙酸2 ml, 4℃ 2 000 r/min离心15 min，取上清 1 ml加入水合饱和乙醚充分混合，再4℃ 2 000 r/min离心15 min，反复3次，下层水相用2 mol/L NaHCO3调pH值为7．5，－20℃保存，待测IP3,按说明书制成曲线，测IP3浓度。 细胞内［Ca2+］i测定：处于融合状态的豚鼠RPE细胞，在无血清的改良依格培养液中孵育24 h，制成细胞悬液，细胞活性在95％以上，以终浓度为 5 μmol/ml Fura-2/AM负载40 min［3］，用分光光度计检测，发射波长为510 nm，激发波长为340 nm和380 nm，大荧光由0．1％Triton测得，小荧光由10 mmol/L的EGTA测得，每次测量前输入在上述两激发波下测得的自发荧光值及解离常数（224 nmol/L）, 微机自动算出［Ca2+］i值。
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糖基化产物对牛视网膜微血管周细胞增生和胞浆[Ca2+]i水平的影响
目的 探讨糖基化产物对牛视网膜周细胞(pericyte,PC)增生和胞浆[Ca2+]i水平的影响.方法 采用细胞计数结合噻唑蓝比色测定,氚标胸腺嘧啶核苷(3H-thymidine,3H-TdR)掺入和钙荧光探剂(Fura-2Acetoxymethyl ester,Fura-2AM),研究PC在牛血清白蛋白早期糖基化产物(early glycation pro-ducts of bovine serum albumin,EG-BSA)和牛血清白蛋白糖基化终产物(advanced glycation end products of bovine serum albumin,AGE-BSA)培养下,PC增生数、DNA合成量及胞浆[Ca2+]i水平的改变.结果 培养4 d后,细胞计数法:EG-BSA和AGE-BSA组PC数分别为17.87±2.36,14.77±3.72,较其对照组(20.54±0.82,20.31±0.93)减少13.00%和27.00%(P＜0.01);MTT法:EG-BSA和AGE-BSA组分别为0.4619±0.0946,0.3884±0.1013,较其对照组(0.5236±0.0539,0.5227±0.0519)减少12.00%和25.70%(P＜0.01);3H-TdR掺入量:EG-BSA和AGE-BSA组分别为39450.16±8870.68,33667.85±10581.70,较其对照组(56373.63±2317.97,56542.04±1961.23)减少30.00%和40.46%(P＜0.01);胞浆[Ca2+]i水平:EG-BSA和AGE-BSA组分别为(129.55±30.41) nmol/L,(179.71±56.69) nmol/L,较其对照组[(79.70±6.94) nmol/L,(83.96±6.39) nmol/L]增高163.00%和214.00%(P＜0.01).结论 EG-BSA和AGE-BSA能不同程度地抑制视网膜微血管PC增生和DNA合成,并使胞浆[Ca2+]i水平增高,尤以AGE-BSA为著.
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二氧化硅对体外培养细胞生长的影响
①目的探讨不同质量浓度的二氧化硅对体外培养细胞生长的的影响.②方法将4种不同质量浓度的二氧化硅(0、20、100、200 mg/L)加入含体外生长的大鼠肠上皮细胞株(IEC-18)和小鼠成纤维细胞株(L929)的培养液中,同时加入不同浓度的3H胸腺嘧啶核苷(3HTdR),共同培养4、24、72 h后收集细胞,加闪烁液在液闪仪上计数.③结果大鼠肠上皮细胞和小鼠成纤维细胞在加入二氧化硅后3HTdR的参入量明显增加(F=157.0～684.8,q=9.56～51.50,P＜0.01).④结论二氧化硅可刺激细胞的生长代谢,加速细胞分裂.
