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CD/5-FC系统对结肠癌细胞的杀伤作用
目的:探讨组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosine deaminase,CD)/5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)系统对不同分泌癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的大肠癌细胞LoVo和SW480的靶向杀伤作用.方法:脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列(TRS)驱动CD基因的组织特异性逆转录病毒载体GICEACDNa及非组织特异性逆转录病毒载体pCD2分别转导入大肠癌细胞LoVo和SW480,以G418筛选阳性克隆扩增后给予前药5-FC进行敏感试验.结果:LoVo-CEACD及LoVo-CD比LoVo对5-FC的敏感性明显提高(P<0.01,t=5.688,n=9;P<0.01,t=3.136,n=9),SW480-CEACD及SW480-CD比SW480对5-FC的敏感性明显提高(P<0.01,t=3.437,n=9;P<0.01,t=3.516,n=9),LoVo-CEACD比LoVo-CD对5-FC的敏感性明显增强(P<0.05,t=2.183,n=9),而SW480-CEACD对5-FC的敏感性小于SW480-CD,SW480-CEACD对前药5-FC的敏感性低于LoVo-CEACD(P<0.05,t=2.504,n=9),转CD基因之LoVo和SW480细胞体外实验均可观察到明显的旁观者效应.结论:组织特异性CD/5-FC系统对LoVo和SW480细胞均有明显的靶向杀伤效果,但对SW480细胞的杀伤作用小于LoVo细胞.
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真性红细胞增多症患者WT1基因甲基化状态的初步研究
真性红细胞增多症(PV)是一种克隆性干细胞疾病,以全血容量增多,血液黏稠度增高及脾肿大为主要表现.而再生障碍性贫血(AA)系多种病因引起的造血功能衰竭,以全血细胞减少为主要表现的一组综合征.两种红细胞疾病一种是红细胞增多,一种为红细胞减少,其表观遗传学是否有联系值得研究.在红细胞疾病的研究中,国外有学者报道[1],阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)患者WT1基因的mRNA表达增加且明显高于AA患者,并且WT1基因的mRNA表达与PNH单核细胞表面的CD16b缺失率呈正相关,推测WT1基因产物的表达增多可能与PNH的克隆扩增机制有关.
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对Hazelton等提出的云锡矿工肺癌主要危险来自砷的商榷
美国Hazelton等[1]2001年发表"利用两阶段克隆扩增生物学模型对中国云锡矿工砷、氡、纸烟、水烟暴露的历史队列分析"(简称H文),结果看到纸烟和砷是肺癌的主要归因危险:在842例死亡肺癌中,单独纸烟占21.4%,纸烟加砷19.7%,单独砷15.8%,砷加氡11%,纸烟加氡9.2%,砷加纸烟加氡8.7%,单独氡5.5%,本底8.7%.
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他克莫司与其它药物的相互作用
他克莫司( Tacrolimus, FK506)是一种新型的大环内酯类免疫抑制剂,通过与内源性细胞内受体(胞浆结合蛋白 FKBP12)结合形成一个 immunophilins复合物,抑制 T辅助细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞的早期活化基因的表达,从而抑制 T淋巴细胞的克隆扩增和细胞因子的产生。动物实验表明,他克莫司抑制 T细胞增殖反应能力比环孢素 A( CsA)强 100倍,而临床结果也表明其免疫抑制作用比 CsA强,不良反应较 CsA少。他克莫司正逐渐取代 CsA作为器官移植术后的首选免疫抑制剂。
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生发中心
生发中心是一个动态的微环境,出现于二级淋巴器官中淋巴滤泡的B细胞区.它起源于抗原刺激后B细胞的局部克隆扩增.
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5-羟甲基胞嘧啶在人子宫肌瘤增殖中新的表观遗传修饰的生物学作用探
背景与目的:子宫肌瘤或纤维瘤是女性生殖系统常见的良性肿瘤。目前研究发现,子宫肌瘤患者均存在至少一种DNA突变,提示肿瘤可能起源于每个突变干细胞的克隆扩增。表观遗传机制,如DNA甲基化、DNA羟甲基化、组蛋白修饰、微小RNA和非编码RNA,对于基因表达的调控起着重要作用。一种新近发现的表观修饰因子5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylation,5-hmC)及其调节剂TET(ten eleven translocation)酶类在恶性肿瘤发病中发挥作用。5-hmC和TET蛋白在肿瘤早期开始表达,且在人体不同组织中(如脑、肺、肝、心脏和肾等)表达水平不同。研究发现,在脑、肺、乳腺、前列腺、肝脏、肾脏、肠和子宫等恶性肿瘤中5-hmC水平相对于正常者明显降低,且TET也呈现较低表达。但其在良性肿瘤如子宫肌瘤中的表达及其表观遗传修饰的生物学作用尚不清楚。本研究通过对比人子宫肌瘤、正常子宫肌层组织及其原代细胞中5-hmC和TET蛋白表达情况,以探讨5-hmC和TET蛋白在子宫肌瘤发病机制中的作用。
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癌症基因组研究:问题与启示
癌症是目前威胁人类健康的危险的杀手之一.在西方国家,每3个人中有1人患有癌症,每5个人中有1个人死于癌症[1].随着现代生物医学的发展,人们已经认识到癌症是常见的基因疾病,其发生与DNA序列异常有关.DNA的突变和复制错误会不断引起序列的细微改变,当体细胞突变替换了某个重要基因的功能,突变细胞优势生长而形成肿瘤,相关靶基因的附加突变和克隆扩增,造成了肿瘤组织的浸润和转移.
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T细胞在系统性红斑狼疮中作用的研究进展
系统性红斑狼疮(SLE)是一累及多系统、多器官的自身免疫性疾病.大量自身抗体的产生和免疫复合物沉积在各组织、脏器中引起组织损伤是SLE的主要发病机制.而SLE中B细胞产生自身抗体呈T细胞依赖性,T细胞在SLE的发生发展中发挥重要作用.为阐明T细胞在SLE中的作用,首先需要了解SLE中T细胞的抗原识别特点和克隆扩增特点.
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T细胞受体多态性与自身免疫病相关研究进展
T细胞受体(Tcell receptor,TCR)是T细胞识别抗原和诱导免疫应答的基础.在自身免疫病状态下,T细胞根据疾病特异性抗原可产生相应的特异性TCR库克隆扩增.通过高通量分子测序技术检测TCR序列,找出疾病状态下和健康人中TCR库的差异,可进一步探索疾病的发病机制,并为进一步通过诱导免疫耐受干预疾病的发生发展提供了可能.此文概述了近5年来TCR测序和自身免疫病之间的原始研究,并对相关研究进展进行了总结.
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骨关节炎与免疫关联性初探
为了探讨免疫因素是否介导骨关节炎的发病,应用直接免疫荧光法检测了6例晚期骨关节炎患者滑膜液中浸润淋巴细胞分化抗原的表达,同时用微量酶联免疫技术测定了这些患者滑膜液中IL-10、IL-12和sFasL的含量.结果显示关节滑膜液中的淋巴细胞以CD8+细胞为主(67.0%±14.6%),远远高于CD4+细胞(15.0%±12.8%),两者相差显著(P<0.01).CD4+/CD8+比值<1.进一步分析表明其T细胞受体主要为αβ型TCR(64.0%±12.6%).滑膜液中IL-12含量(203.84±49.2)pg/ml高于IL-10(37.8±14.5)pg/ml,有明显统计学差异(P<0.01).外周血中IL-10和IL-12的含量分别为(43.37±14.2)pg/ml和(45.58±10.6)pg/ml.血清中sFasL含量较高(153.90±56)pg/ml,而滑膜液中则很低(<5pg/ml,P<0.01).提示在骨关节炎的晚期CD8+淋巴细胞和IL-12增高可能参与了关节的免疫损伤.
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生精细胞凋亡与P53
精子发生始于精原细胞的克隆扩增,经细胞的分化、有丝分裂、减数分裂、变态,终形成精子.精子发生受到许多因素的调节,其中主要受激素控制,促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinising hormone,LH)、雄激素等是生精细胞的存活因子[1].细胞内分子对精子发生的调节也不容忽视,如cAMP反应元素调节子(cyclin AMP-responsive element modulator,CREM)在减数分裂后精子细胞中高表达,是一种转录因子,CREM基因突变致精子缺失可引起不育;c-myc基因可促进生精细胞的凋亡.生精细胞的存亡还与周围的支持细胞以及间质细胞所形成的微环境有关[2].各种生长因子对精子发生也有直接或间接的调节作用,如表皮生长因子(epidermalgrowth factor,EGF)、转化生长因子(transforming growth factor,TGF),胰岛素样生长因子( insulin-like growth factor,IGF)等.在精子发生过程中,各级生精细胞都会发生凋亡.在生理条件下,凋亡是机体清除过量或异常生精细胞的一种方式.
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EB病毒潜伏感染基因组在上皮肿瘤细胞克隆扩增中的保留
目的:探讨EBV感染的上皮细胞在克隆扩增过程中细胞中EBV基因组保留或丢失的实质.方法:使用EBV潜伏感染的上皮肿瘤细胞系293-EBV,其中的EBV基因组通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)示踪,经过多次传代使细胞的GFP表达强度有强弱差异,且部分细胞完全丢失EBV基因组,然后通过显微共聚焦连续观察细胞的生长.将细胞分散至极低密度,观察单个细胞形成克隆过程中细胞的分裂及GFP表达强度的变化.结果:细胞在生长过程中由于黏性和运动性而移动,但GFP阳性的细胞在未分裂时荧光强度不变.细胞形成的克隆其形状有紧凑型和松散型.EBV阳性的细胞在紧凑型生长时易保留EBV基因组.随着细胞数增加,EBV阳性细胞在松散型生长时GFP表达逐渐变弱;而GFP表达弱的细胞易完全失去EBV基因组.结论:EBV阳性上皮细胞具有保留EBV基因组进行克隆扩增的能力,EBV保留的实质是EBV基因组能随着细胞增殖而复制和传代,这与细胞密度有关,还可能受上皮细胞环境的影响.
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β-防御素-1基因在大鼠皮肤和肾脏固有表达
目的:检测大鼠β-防御素-1基因表达的组织分布.方法:从Genbank检索到的Norway大鼠β-防御素-1 cDNA序列,据此设计一对特异引物,采用RT-PCR技术在Wistar大鼠10种受检测组织的总RNA中,扩增其特异cDNA片段,然后进行克隆扩增、限制性内切酶谱分析和DNA序列测定.结果:在10种大鼠组织中,仅从皮肤和肾脏扩增出一条长度为272bp的cDNA片段,在气管、子宫、子宫颈、膀胱、小肠、脾脏、骨骼肌、腮腺等均未检测出其mRNA.其RT-PCR产物经测序分析证明系大鼠β-防御素-1 cDNA.结论:本研究显示大鼠β-防御素-1基因除在肾脏表达外,亦在皮肤组织固有表达,提示β-防御素-1亦可能在大鼠皮肤天然抵抗微生物感染机制中发挥作用.
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垂体腺瘤发生的基因调控研究进展
垂体腺瘤通常是良性的单克隆肿瘤,占颅内肿瘤的25%.垂体腺瘤的病因学还不清楚,可能有多种因素参与其发生和发展,有多种异源的癌基因和生长激素的异常表达[1-7],但也不一定是肿瘤发生的直接因素,特别是很多这些因子都是细胞转化后诱导的[8-9],可能实际上只是附带现象而不是病因分子.有证据支持"本质缺失"机制:垂体腺瘤由体细胞克隆扩增而来,散在分布的腺瘤组织周围是低可塑性的正常组织.
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阵发性睡眠性血红蛋白尿症发病机制、诊断及治疗进展
阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种罕见的获得性造血干细胞基因突变引起的疾病.已明确磷脂酰肌醇聚糖A(PIGA)基因突变是PNH患者血管内溶血的分子病因,但克隆性增殖的机制仍有待揭示.PNH与再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征关系密切.流式细胞术检测锚连蛋白缺陷是诊断PNH的金标准,但基于细胞表型诊断的PNH在病因上仍是一组异质性疾病.依库珠单抗可有效减少PNH血管内溶血,显著改善患者的生命质量,但仍属对症治疗.对PNH发病机制的进一步研究有助于正确认识患者的内在病因、提高鉴别诊断能力和改善治疗.文章对结合近年来的研究进展进行综述.