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六甲铵等对梭曼膦酰化电鳐AChE老化的影响
生理pH条件下,由于梭曼膦酰化乙酰胆碱酯酶(AChE)老化的速度非常快,不能够准确测定某些药物对膦酰化AChE老化的速率的影响;在碱性条件下,由于膦酰化AChE老化速率变慢,可以通过测定酶活性间接研究某些化合物对老化是否具有延缓作用.因酶活性受外界条件诸如金属离子、温度、pH变化的影响较大,因此,采用酶活性测定方法研究药物对老化的影响难免会影响结果的准确性.同位素分析方法检测灵敏度高,为了更为准确的判定药物对梭曼膦酰化AChE老化是否具有延缓作用,我们采用放射性同位素标记梭曼,通过直接测定重活化产物研究了六甲铵、十甲铵对梭曼膦酰化AChE老化的影响.(1)首先利用层析法,在尽量延缓老化条件下,制备出梭曼膦酰化乙酰胆碱脂酶.
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胸液端粒酶测定对肺癌与结核性胸腔积液的诊断价值
结核病和肺癌都可出现胸腔积液,但是肺癌与结核性胸腔积液的早期病因诊断有时非常困难,临床上有20%～30%患者通过常规的诊断方法不能明确胸腔积液的性质[1].为了探讨胸腔积液端粒酶活性测定对肺癌与结核性胸腔积液的鉴别诊断意义,特做该项研究.
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生物被膜克雷伯杆菌β-内酰胺酶活性的检测
近年来研究证明克雷伯杆菌易形成生物被膜（BF）［1］，关于生物被膜克雷伯杆菌产β-内酰胺酶活性的研究国内外尚未见到报道。本实验检测浮游克雷伯杆菌、生物被膜克雷伯杆菌及亚胺培南诱导后生物被膜克雷伯杆菌产β-内酰胺酶的能力，探讨生物被膜中克雷伯杆菌的耐药机制。 材料与方法材料：抗菌药物：亚胺培南（美国默沙东公司）。试剂：2.5%戊二醛、1%锇酸、枸橼酸铅等，均为国产分析醇。菌株：选取产β-内酰胺酶肺炎克雷伯杆菌30株（中国医科大学附属第二临床学院细菌室分离）。培养基：胰酶大豆肉汤（TSB，法国BioMerieux公司）。Nitrocefin （英国Oxiod公司）。器材：医用硅胶膜（北京医用硅胶研究所）；扫描电镜（S-800 日本Hitachi公司）；低温超速离心机（上海安亭公司）；可见紫外分光光度计：日本岛津制作所MIB-2000型外接岛津超级恒温水浴槽。方法：(1) 生物被膜的建立：取30株肺炎克雷伯杆菌，经37 ℃孵育24 h，配制成0.5 mol/L菌悬液，将每株菌菌悬液3等份分为3组，A组为浮游克雷伯杆菌，B组及C组菌以硅胶膜为载体，用改进的平板培养法［2］建立生物被膜，标本经固定、脱水、置换、干燥、枸橼酸铅染色等处理后通过扫描电镜观察鉴定［3］。(2) 诱导β-内酰胺酶产生：亚胺培南低抑菌浓度(MIC)的测定，采用标准微量稀释法，其MIC值介于0.07～0.5 mg/L，将1/2 MIC亚胺培南加入C组菌悬液中孵育。(3) β-内酰胺酶粗酶提取液的制备：A、B、C 3组菌孵育至第3天，将细菌硅胶膜及胰酶大豆肉汤在超声水浴震荡（120 W，15 min）。提取的菌悬液于4 ℃ 6 000 r/min离心30 min，弃去上清液，以0.05 mol/L，pH 7.0磷酸钾缓冲液洗涤两次后，将收获的菌体悬浮在同样适量的缓冲液中，用冻融法［4］使细菌菌体破坏，然后以低温2 000 r/min离心60 min，上清液即为粗酶提取液。(4) β-内酰胺酶定性：用Nitrocefin纸片测定。(5) β-内酰胺酶活性测定：以Nitrocefin为底物，在紫外分光光度计波长482 nm处进行时间扫描测定酶活性。(6) 统计分析：对A组和B组、A组和C组、B组和C组数据进行配对t检验，分析差异的显著性。
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端粒酶活性测定对肺癌的诊断价值
肺癌的发病率及病死率逐年递增,成为人类因癌症死亡的主要原因.但肺癌的早期诊断仍较困难.我们采用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测肺癌组织及脱落细胞中的端粒酶活性,探讨其在肺癌早期诊断中的作用.
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胸腔冲洗液端粒酶活性测定诊断肺癌胸膜微转移的临床价值研究
肺癌细胞胸腔种植及胸膜微转移是影响肺癌预后的主要因素之一.因此,若能在术中早期检出脱落的癌细胞并给予有效的治疗,是提高疗效的关键.
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113例婴儿及其母G-6-PD酶活性检测结果分析
G-6-PD缺陷病是一种不完全性显性伴性遗传病,其病理基因在X染色体长2区8带上,现将我院对113例婴儿及其父母G-6-PD酶活性测定结果分析下.
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次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶的活性测定及临床应用
次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶(IMPDH)是一种鸟嘌呤从头合成途径的限速酶,在细胞增殖过程中发挥着重要作用.目前临床常用的作用于IMPDH的药物为IMPDH抑制剂,主要应用于抗免疫排斥、抗肿瘤、抗病毒或抗寄生虫等领域.IMPDH抑制剂的血药浓度与临床疗效之间存在一定关联性.但由于该关联的个体间变异通常较大,故测定IMPDH酶活性可作为一项监测其药物疗效的特异性生物标志物,与药动学监测相结合,可提高IMPDH抑制剂临床应用的安全性和有效性.本文旨在综述国内外近年来有关IMPDH酶活性的测定方法与临床应用现状,为临床IMPDH抑制剂药效学监测的开展和应用提供方法与依据.
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基于HepaRG活细胞的N-乙酰基转移酶1活性测定方法的建立与评价
目的 建立基于人类肝癌HepaRG活细胞的N-乙酰基转移酶1(NAT1)活性测定方法,并对其测定结果 进行评价.方法 HepaRG细胞用含10％牛血清和青、链霉素培养液进行培养.用免疫印迹技术考察培养24,48和72 h的HepaRG细胞中NAT1表达情况;用噻唑蓝实验测定NAT1底物4-氨基水杨酸(4-ASA)孵育24和48 h对细胞活力的影响,分别用液-质联用技术及免疫印迹技术考察不同浓度4-ASA对HepaRG细胞中NAT1活性及蛋白表达的影响,比较基于HepaRG活细胞的NAT1活性测定方法与传统组织/细胞裂解法对NAT1活性测定结果的影响.结果 与培养24 h的HepaRG细胞相比(0.71±4.00×10-3),培养48和72 h的HepaRG细胞中NAT1的表达量显著增加,分别为(0.80±7.00×10-3)和(1.04±0.04),差异均有统计学意义(均P＜0.05).与对照组相比,浓度为5～100μmol· L-1的4-ASA孵育HepaRG细胞24和48 h,对其活力无明显影响(均P＞0.05);25～100 μmol·L-1的4-ASA孵育HepaRG细胞8h,对NAT1蛋白表达无明显影响(均P＞0.05),且50～ 75 μmol·L-1的4-ASA孵育HepaRG细胞,培养液中4-ASA代谢物的生成量与底物浓度成正比.NAT1活性测定结果显示,HepaRG活细胞法测得的结果略低于传统的组织/细胞裂解法所测得的结果(P ＜0.05或P＜0.01),但两者的酶促反应趋势比较相似.结论 以4-ASA为反应底物建立的基于HepaRG活细胞的NAT1活性测定方法具有操作简单、结果稳定、可动态检测等优势,有望用于NAT1活性的动态测定及NAT1特异性抑制的高通量筛选.
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对长期冷藏保存的双胸蚓溶栓酶活性分析
目的：探讨双胸蚓属蚯蚓体内提取的溶栓酶保存与稳定性。方法采用Folin-酚试剂法,对4℃冷藏保存220个月的溶栓酶制剂的酶活性测定,并观测对人实验性血凝块的溶解作用。结果4℃冷藏保存220个月的溶栓酶制剂的活性为55.1 U/ml；完全溶解(30±5)mg 血凝块的时间为(4.3±0.8)h,与冷藏保存初酶活性测定值和溶解血凝块时间变化在10%左右。结论发现在4℃保存的溶栓酶制剂能持续较长时间,提示该溶栓酶具有较强的稳定性。
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利用细胞培养基或动物血浆中的荧光标记产物测定鞘磷脂合酶活性
鞘磷脂合酶(SMS)催化神经酰胺(ceramide,Cer.)转变为鞘磷脂(sphingomyelin,SM).近来的研究表明神经酰胺和鞘磷脂参与了代谢综合征的过程,因而鞘磷脂合酶被认为是开发抗代谢综合征药物的潜在靶点.鞘磷脂合酶有两个同工酶,分别称为鞘磷脂合酶1 (SMS1)和鞘磷脂合酶2(SMS2).这两种同工酶的亚细胞定位不同,在不同组织中的表达水平也有差异.到目前为止,己发表有多种方法测定组织和细胞匀浆中的总SMS活性,这些方法通过分析总反应体系或细胞内的酶促反应产物来衡量SMS活性.本文介绍一种测定SMS活性或筛选SMS抑制剂的新方法.我们将荧光标记的神经酰胺(NBD-Cer.)作为底物与细胞孵育,或者将该底物注射到小鼠体内,然后监测在细胞培养基或小鼠血浆中出现的荧光标记的鞘磷脂(NBD-SM)的含量.采用这种办法可有效检测出D609(一种鞘磷脂合酶抑制剂)对细胞和小鼠整体SMS活性的抑制作用.我们进一步采用该方法检测了SMS1基因敲除小鼠和SMS2基因敲除小鼠的SMS活性,结果发现注射底物后,SMS2基因敲除小鼠(而不是SMS1基因敲除小鼠)血浆中NBD-SM的堆积被明显阻断.因而该方法可用于检测生理或药理条件下在体或离体组织的SMS活性、筛选SMS抑制剂、甚至筛选SMS2特异性抑制剂.
关键词： 鞘磷脂合酶 酶活性测定 鞘磷脂合酶抑制剂筛选 鞘磷脂 神经酰胺 -
北京协和医院儿科成功绘制我国溶酶体疾病谱
北京协和医院儿科历经14年对1226例溶酶体病患者进行临床研究和总结，完成了国内首次单中心大样本病例总结和国际罕见单人种大样本分析，首次报道了中国人溶酶体病的疾病谱。溶酶体病是由于溶酶体内60余种酸性水解酶中的任何酶发生缺陷所造成的疾病，目前已知的病种超过50余种，其中绝大多数属于常染色体隐性遗传病。溶酶体病十分罕见，总发生率不详。本项科研成果是国内大样本的总结，为我国溶酶体病的发生率统计提供了关键数据。在该项目的促进下，北京协和医院溶酶体病诊断技术不断提高，实现了从单纯酶活性测定到酶活性测定结合基因突变家系分析诊断技术的突破，更加有效地保证了诊断的准确率。该项目组还参与了全球多中心的临床药理Ⅲ期研究，参与制定国内仅有的2个溶酶体病的专家共识，帮助其他两个诊断中心培训数名诊断试验技术人员。北京协和医院儿科以高质量的诊断和产前诊断水平，得到国内业界的高度评价。
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溶血对部分血清酶活性测定的影响
溶血是影响酶活性检测的常见因素,使测定结果受到干扰而引起误差.作者将健康人取血后分别分离的正常血清和用冰冻方式破坏血细胞后制成的溶血血清同批在干式生化分析仪测定部分酶活性,观察溶血血清和正常血清的酶活性变化情况,并进行了讨论和分析.
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理论K值和酶校准品K值测定酶活性结果的比较
目的：比较理论K值和酶校准品K值所测酶活性结果差异，使血清酶活性测定结果更加准确。方法在贝克曼D X C800全自动生化分析仪上，分别用理论K值和酶校准品的K值测定同一质控物的6种酶活性，进行偏差比较和可接受性判断。结果除AST外，其它5种酶的校准K值测定结果的相对偏差都明显小于理论K值测定结果的相对偏差，理论K值测定结果，AST小于1/2CLIA’88(%)允许误差，可接受，γ-GGT、ALP、AST、ALT、CK和LDH大于1/2CLIA’88(%)允许误差，不可接受，校准K值测定结果，γ-GGT和LDH结果相对偏差大于1/2CLIA’88(%)允许误差，不可接受，ALP、ALT、AST和CK相对偏差均小于1/2CLIA’88(%)允许误差，可接受。结论建议临床实验室使用适合生化检测系统的酶校准品K值测定血清酶活性。
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急性有机磷农药中毒患者血清淀粉酶的检测
近年来,急性有机磷农药中毒(AOPP)患者血清酶活性的测定,已广泛应用于临床[13],对及时掌握病情和组织损害程度及预后有重要价值,而淀粉酶活性测定报道很少.现将我院1998年6月～1999年6月45例AOPP住院患者血清淀粉酶检测结果报告如下.
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小儿急性氟乙酰胺中毒66例心肌酶分析
为了探讨小儿急性氟乙酰胺中毒患者心肌酶活性测定的临床意义。我们对我院1997年1月-1999年6月收治的66例(7个月～9岁)氟乙酰胺中毒患者心肌酶谱进行分析。1 检测方法对66例确诊为氟乙酰胺中毒患者24h内进行采血，全自动生化分析仪检测心肌酶，同时选健康儿童25名做对照，结果比较采用t检验。2 结果AST、LDH、α-HBDH、CK、CK-MB(x±s，U／L)分别为：中毒组(101.15±70.18)、(510.39±378.40)、(444.85±337.65)、(844.97±725.97)、(47.30±36.00)；对照组：(17.88±9.86)、(181.44±39.88)、(121.20±40.25)、(92.12±49.94)、(11.04±6.62)，经t检验，两组比较相差高度显著性(P＜0.001)。3 讨论氟乙酰胺进入人体后，干扰体内能量代谢，致心肌损害，心肌细胞内酶溢出，血中心肌酶活性升高，病情越重，血心肌酶活性越高，早期监测心肌酶活性，对估计病情和了解心肌损害程度有重要的意义，动态监测心肌酶活性，对估计病情和了解心肌损害程度有重要的意义，动态监测心肌酶活性，有利于疗效观察和预后判断，临床上应及早检测心肌酶活性并定期复查。CK活性升高为显著，可能与骨骼肌的损害有关，尤其是持续性抽搐，在分析检测结果时应结合临床表现。
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血清α-HBDH与LDH比值在心肌炎诊断中的临床探讨
血清心肌酶活性测定以往常用于急性心肌梗死的诊断及预后和肝、胆、胰腺疾病的鉴别诊断.且α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)与乳酸脱氢酶(LDH)比值已被做为急性心肌梗死的诊断指标之一[1-3].有关α-HBDH与LDH比值在心肌炎诊断中的临床研究报道甚少.我们在临床工作中发现,3～14岁有心肌炎症状的患者,血清α-HBDH与LDH比值明显高于正常对照组(P<0.01),但患者其他指标均不符合1994年第六届全国儿科心血管学术会议修订的确诊标准,我们称其为"疑似心肌炎",经临床按心肌炎治疗后均有效.因此推断α-HBDH与LDH比值是心肌炎早期诊断有价值的指标.
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有机磷农药中毒的急救与护理
有机磷农药为持久性抗胆碱酯酶药,属有机磷酯或硫代磷酸类化合物,中毒原因可为:①生产及使用过程不当.②自服和误服,表现为:头晕、头痛、恶心、呕吐、腹泻、多汗、胸闷、视力模糊、瞳孔缩小、肌肉震颤,重者可出现昏迷、肺水肿、呼吸肌麻痹、脑水肿等.如抢救不及时或治疗护理不当则死亡率高.我院1998年至2000年共抢救有机磷农药中毒110例,其中死亡5例,现将抢救过程中的护理体会阐述如下: 1 急救原则 1.1 迅速清除毒物.首先问清病史,要与其它中毒相鉴别,经皮肤吸收中毒者,脱去污染的衣裤,用温水或肥皂水彻底清洗肢体皮肤.避免使用热水,因使皮肤血管扩张,促进毒物吸收. 1.2 洗胃:洗胃是彻底清除体内未吸收的毒物,是抢救成功的关键.如口服中毒者,我们体会到不论病情轻重虽在6～8h以内,应首先抽出胃内容物,进行毒物鉴定,并用2%苏打或1%食盐水总量1万ml反复彻底洗胃,若口服在8h以内或中毒时间不明确应给予洗胃,以洗出液与进液颜色一致,无农药味为宜.洗胃毕给予50%硫酸镁60ml导泻.敌百虫中毒禁用碱性溶液洗胃,对硫磷中毒时忌用高锰酸钾,因易氧化成对氧磷而增加毒性. 洗胃采用洗胃机或灌流式,如饮食过多或食用了粗纤维食物,应先压舌剌激催吐再插管洗胃.洗胃液的水温39～41℃,灌入量年龄偏小每次50～80ml,成人每次150～200ml左右反复抽吸.水温不可过高过低,过高可加速毒物吸收,过低刺激胃粘膜,特别是气温较低时引起病人寒颤不适.注意洗胃液的量不宜过大,以免驱毒入肠,加重中毒. 1.3 血胆碱脂酶测定有机磷农药中毒是抑制胆碱脂酶活性,使其失去水解乙酰胆碱的能力,从而使体内乙酰胆碱积蓄引起组织器官的功能改变.因此,胆碱脂酶活性测定不仅可作为有机磷农药中毒的诊断,而且是判断中毒程度,疗效及预后的参考指标,也可作为临床护理观察的常规要求之一. 1.4 迅速建立静脉通道,积极使用解毒药在清除毒物的同时,必须及早、足量、快速,反复地静注阿托品.阿托品拮抗乙酰胆碱积聚而引起的症状,达到轻度阿托品化,如出现面色潮红、口干、瞳孔散大、不安等要及时向医生汇报或减量观察. 1.5 保持呼吸道通畅,保持有效呼吸和循环功能.及时清除呼吸道分泌物及呕吐物,防止窒息.重症、昏迷给予氧气吸入,呼吸肌麻痹,呼吸衰竭使用呼吸机必要时行气管切开,切开后的纱布及内套管每日更换1～2次,常用庆大霉素,α-糜蛋白酶配制成1:5000～1:10000的浓度以雾化吸入或气管内滴药,可达到湿化气道、消炎、化痰等作用.
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职业接触卫生杀虫剂对施药人员健康影响及预防
为保护建国五十周年首都国庆阅兵部队驻地负责杀虫施药人员安全,防止发生中毒,我们于1999年7月～9月,对25名职业接触杀虫剂的卫生员进行了健康检查、血液胆碱酯酶活性测定和预防中毒效果观察,结果报告如下.
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浆膜腔积液中腺苷脱氨酶活性测定的临床意义
恶性肿瘤和结核以及炎症是引起胸腹腔积液的主要原因,在原发病不清楚的情况下,胸腹腔积液性质的确定和良恶性的鉴别对病因的诊断具有指导作用.目前除细胞学和常规检查外,鉴别恶性、炎性浆膜腔积液与结核性胸腔积液的方法比较少[1].我们测定了33例恶性、72例炎性、45例结核性浆膜腔积液的腺苷脱氨酶(ADA)活性水平,以探讨浆膜腔积液中ADA活性测定的临床意义.
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血清谷胱甘肽-S转移酶对病毒性肝炎诊断价值的探讨
目前临床上肝脏酶活性测定的方法很多,而谷胱甘肽-S转移酶(GST)可作为一项新的肝损害诊断指标,本文采用临床化学方法测定各型肝病患者血清谷胱甘肽-S转移酶,以探讨其在肝病中的诊断价值.报告如下:
