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线粒体钙单向转运体拮抗剂钌红对阿霉素肾病模型大鼠的保护作用
目的 探讨钌红(ruthenium red,RR)对阿霉素大鼠肾病模型肾脏病理的改善作用及可能机制.方法 32只SD大鼠分生理盐水对照组、RR对照组、阿霉素(adriamycin,ADR)组和ADR+ RR组.予以尾静脉注射1次ADR建立大鼠肾病模型,分别予RR对照组和ADR+ RR组腹腔注射RR 2周.在ADR注射后6周处死大鼠,分析RR对肾小球病变的保护作用.进而在体外培养的小鼠足细胞系分析RR对ADR诱导的足细胞凋亡和线粒体Ca2+的影响.结果 与ADR组比较,ADR+ RR组大鼠肾小球新月体样病变指数降低(P=0.024).与ADR组足细胞比较,ADR+ RR组小鼠足细胞凋亡率降低(3.23％±0.95％ vs 13.62％±0.92％,P=0.028,n=3),线粒体Ca2+降低(P=0.000,n=12).结论 线粒体钙单向转运体拮抗剂钌红可显著改善ADR肾病模型大鼠肾脏病理改变,拮抗ADR诱导的小鼠足细胞线粒体Ca2+超载和足细胞凋亡.
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苄阿米洛利和钌红对颈动脉窦压力感受器放电的阻断作用
目的 研究苄阿米洛利、阿米洛利和钌红对颈动脉窦压力感受器放电的作用,探讨压力感受器上机械敏感通道的性质.方法 制备家兔离体颈动脉窦-窦神经标本,采用颈动脉窦窦内外双重灌流,钳制窦内压并记录窦神经放电,观察上述药物对压力感受器放电的作用.结果 苄阿米洛利以浓度依赖性方式阻断窦神经放电,IC50值为18.5 μmol/L,该阻断作用在冲洗后能大部分消除;阿米洛利(2 mmol/L)可阻断95%的窦神经放电,其作用可逆;钌红(100 μmol/L)以不可逆的方式抑制89%的窦神经放电活动.结论 分属A类和C类纤维的压力感受器活动均可被阿米洛利类药物和钌红阻断,提示2类压力感受纤维末梢上有相似的机械敏感通道,但是有关的机械-电转导分子还有待进一步研究.
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不同动脉压力感受器对钌红反应的敏感性差异
目的 研究钌红对压力感受器不同纤维的作用是否存在差异以及这些差异与感受器纤维类型的关系.方法 制备家兔离体颈动脉窦-窦神经标本,采用颈动脉窦窦内外双重灌流,钳制窦内压同时记录窦神经细束(含少量纤维)放电,然后应用Spike2软件分析,获得单纤维放电的信息.结果 在20 μmol/L钌红作用下,根据对钌红的反应,可将窦神经压力感受纤维分为钌红敏感纤维和钌红不敏感纤维2类.进一步分析发现这2类纤维的电生理特点分别与C类和A类压力感受器相对应.结论 窦神经中存在对钌红反应不同的2类纤维,可能分属A类纤维和C类纤维,提示这2类压力感受器的机-电换能机制可能存在某些差异.
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银染法鉴定细菌生物被膜
细菌生物被膜的主要成分是多糖蛋白复合物,Costerton等人[1]在70年代通过扫描电镜观察到了细菌生物被膜的存在,但是通过钌红等染色后进行电镜观察,操作复杂,周期长,不易推广.近年来,临床微生物学研究工作者开始探索采用染料对细菌胞外糖进行染色,观察细菌生物被膜[2].本实验是通过银染色的方法鉴定细菌生物被膜的存在,该方法简单、可靠,现将报道如下.
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辣椒素对颈动脉窦压力感受性反射的易化作用
在30只隔离灌流颈动脉窦区的麻醉大鼠,观察了辣椒素(capsaicin,CAP)对颈动脉窦压力感受性反射的影响.结果显示(1)以CAP(1 μmol/L)隔离灌流大鼠左侧颈动脉窦区时,颈动脉窦压力感受性机能曲线向左下方移位,曲线大斜率(peak slope,PS)由0.34±0.01增至0.42±0.01(P＜0.01),反射性血压下降幅度(reflex decrease,RD)由36.51±1.26增至45,01±0.71 mmHg(P＜0.01).阈压、平衡压和饱和压分别从70.43±2.09、95.5±1.71和177.60±1.37 mmHg下降至52.86±2.80、87.00±1.58、163.55±2.12 mmHg(P＜0.01).其中PS和RD的变化呈明显的剂量依赖性.(2)用香草酸受体亚型(vanilloid receptor subtypel,VRl)阻断剂钌红(ruthenium red,100 μmo1/L)预处理后,CAP的上述反射效应即被阻断.(3)先给予KArp通道阻断剂格列苯脲(glibenclamide,20 μmo1/L)也取消了CAP对压力感受性反射的影响.结果表明,CAP对大鼠颈动脉窦压力感受性反射有易化作用,此作用似与VR1介导的KATP通道开放有关.
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肾动脉内注射辣椒素兴奋肾神经传入纤维的自发活动
应用记录肾传入神经多单位和单位放电的方法,观察肾动脉内注射辣椒素对麻醉家兔肾神经传入纤维自发放电活动的影响.结果表明:(1)肾动脉内注射辣椒素20、40和60nmol/kg可呈剂量依赖性地兴奋肾传入纤维的活动,而动脉血压不变;(2)静脉内预先应用辣椒素受体阻断剂钌红(40 mmok/kg),可完全阻断辣椒素对肾传入纤维的兴奋作用.(3)静脉内预先注射一氧化氮合酶抑制剂L-NAME(0.1 mmo/kg),能延长并增强肾传入神经对辣椒素的反应.以上结果提示:肾动脉内应用辣椒素可兴奋肾传入纤维的自发放电活动.一氧化氮作为抑制因素参与辣椒素诱导的肾传入神经兴奋.
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颈动脉注射辣椒素对脑干心血管相关核团一氧化氮合酶和Fos表达的影响
实验采用NADPH-d 组化技术和Fos 蛋白免疫组化技术相结合的方法, 观察了颈动脉注射辣椒素时, 大鼠脑干心血管相关核团内NOS和Fos蛋白的分布以及两者的共存关系。结果显示: (1) 颈动脉注射辣椒素可诱发脑干中后区(AP)、孤束核(NTS)、巨细胞旁外侧核(PGL)和蓝斑(LC)等多个部位Fos样免疫反应(FLI)神经元显著增加, 而中脑中央灰质(PAG)和中缝核群(RN)的FLI神经元无明显改变。(2) PGL和NTS 内NO合成神经元以及PGL内双标神经元数量也明显增加, 而PAG和RN中 NO合成神经元无明显变化, 在LC和AP仅偶见或未见NO合成神经元。(3) 预先应用辣椒素受体阻断剂钌红或NMDA受体阻断剂MK-801, 则明显减弱辣椒素的上述效应。以上结果表明, 颈动脉注射辣椒素可兴奋脑干心血管活动相关核团神经元, NO在脑干核团对辣椒素的反应中发挥间接的调制作用, 辣椒素的效应由香草酸受体(辣椒素受体)介导并有谷氨酸参与。
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后区微量注射辣椒素对大鼠血压、心率和肾交感神经放电的影响
在36只麻醉Sprague-Dawley大鼠, 观察了后区内微量注射辣椒素(10 μmol/L, 50 nl)对平均动脉压(MAP)、心率(HR)和肾交感神经放电(RSNA)的影响.实验结果如下:(1)后区内注射辣椒素可引起 MAP、HR 和RSNA明显增加, 分别由12.34±0.53 kPa、 328.52±7.54 bpm 和100±0% 增至15.17±0.25 kPa (P<0.001)、 354.81±8.54 bpm (P<0.001) 和156.95±7.57% (P<0.001);(2) 静脉注射辣椒素受体阻断剂钌红(100 mmol/L, 0.2 ml) 后, 辣椒素的上述效应可被明显抑制;(3) 预先应用NMDA 受体阻断剂MK-801 (500 μg/kg, 0.2 ml, iv)也明显抑制辣椒素的兴奋效应.以上结果提示, 后区微量注射辣椒素对血压、心率和肾交感神经放电有兴奋作用, 而此作用由辣椒素受体介导并有谷氨酸参与.
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辣椒素引起脑干内心血管活动相关核团中c-fos的表达
在16只切断两侧缓冲神经的大鼠, 观察颈总动脉注射辣椒素对脑干内心血管活动相关核团c-fos原癌基因表达的影响.在溶剂对照组大鼠脑干, 仅见少数Fos蛋白样免疫反应(FLI)神经元.与对照组相比, 颈总动脉注射辣椒素(10 μmol, 0.1 ml)时, 脑干内巨细胞旁外侧核(PGL)、蓝斑(LC)、后区(AP) 和孤束核(NTS)等部位的FLI神经元显著增加, 而中脑中央灰质(PAG)和中缝核群(RN)的FLI神经元则无明显改变.应用辣椒素受体阻断剂钌红(RR;200 mmol, 0.1 ml), 可明显抑制辣椒素的上述效应.以上结果提示, 辣椒素可通过激活辣椒素受体(VR), 引起脑干内多个心血管活动相关核团的神经元兴奋, 但对PAG和RN无影响.
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辣椒素对大鼠延髓腹外侧头端区神经元电活动的影响
在35只切断两侧缓冲神经的麻醉大鼠, 应用细胞外记录的电生理学方法, 观察颈总动脉注射辣椒素(capsaicin)对延髓腹外侧头端区(RVLM)巨细胞旁外侧核(PGL)自发电活动的影响.所得结果如下: (1)颈动脉注射辣椒素(10 μmol, 0.1 ml), MAP由10.74±0.13升至12.56±0.21 kPa (P<0.001); HR由374±4增至395±5 bpm (P<0.001); 30 个PGL神经元自发放电单位的放电频率由12.6±0.7增至20.9±1.1 spikes/s (P<0.001).(2)在10个放电单位, 应用辣椒素受体阻断剂钌红(ruthenium red; 200 mmol, 0.1 ml)后, 明显抑制辣椒素的上述效应.以上结果提示, 辣椒素可能通过激活RVLM神经元上的辣椒素受体, 进而兴奋PGL 神经元.
关键词： 辣椒素 RVLM神经元自发放电 辣椒素受体 钌红 -
瞬时感受器电位离子通道香草素受体亚家族4调控肝星状细胞活化增殖作用研究
目的：探讨瞬时感受器电位离子通道香草素受体亚家族4(transient receptor potential vanilloid receptor 4, TRPV4)对肝星状细胞( hepatic stelate cell,HSC)活化增殖的作用及可能的作用机制。方法以含50% CCl4的花生油溶液(1 mL·kg-1)皮下注射,建立大鼠肝纤维化模型。应用蛋白印迹等方法在体观察 TRPV4及肌动蛋白α(α-smooth muscle actin,α-SMA)的蛋白表达变化。以转化生长因子-β1(trans-forming growth factor-β1, TGF-β1)(10μg·L-1)刺激肝星状细胞株(HSC-T6),离体观察TRPV4及α-SMA的蛋白表达变化。应用TRPV4非特异性抑制剂钌红( ruthenium red, Ru)及TRPV4-siRNA特异性沉默 TRPV4,观察 HSC-T6增殖及α-SMA、蛋白激酶B( protein kinase B, Akt/PKB)蛋白表达变化。结果肝纤维化组织与TGF-β1活化的HSC中TRPV4及α-SMA 蛋白表达明显增加。阻断 TRPV4可明显抑制HSC增殖,且α-SMA、Akt 蛋白表达明显降低。结论 TR-PV4参与调控HSC的活化增殖,调控Akt蛋白磷酸化。
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阳离子通道阻断剂-钌红促进破骨细胞分化的影响
目的 探讨阳离子通道阻断剂钌红对破骨细胞分化的影响及其机制.方法 钌红处理Raw246.7后,50 μg/L核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导6d,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察TRAP+(核≥3)细胞的形成；TRAP试剂盒检测细胞中TRAP酶的活性;实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测破骨细胞特异性标志基因TRAP、组织蛋白酶K(CK)和金属基质蛋白酶-9(MMP-9) mRNA表达量；RT-qPCR、Western blot分别检测核因子-κB受体活化因子(RANK)在mRNA和蛋白水平上的表达.结果 钌红促进RANKL诱导Raw246.7细胞形成TRAP阳性多核细胞,对照组TRAP吸光度(A)值为0.33±0.04,而钌红组TRAP A值为0.43±0.03;同时也上调了破骨细胞标志性基因TRAP、CK和MMP-9的mRNA表达以及RANK在mRNA和蛋白水平的表达.各指标在两组中的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 钌红促进Raw246.7向破骨细胞分化,这一过程与钌红上调RANK表达有关,即与RANK-RANKL轴相关.
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钌红减轻严重烧伤早期心肌细胞和线粒体损害
目的:探讨钌红对严重烧伤早期心肌细胞和线粒体损害的治疗作用.方法:健康成年Wistar大鼠24只,随机分为正常对照组、烧伤组和钌红治疗组(n=8).烧伤组、钌红治疗组大鼠造成30%TBSAⅢ°烧伤,伤后30min经腹腔补液.钌红治疗组同时于颈外静脉推注钌红(剂量2mg/kg),3h后再推注1次.烧伤组和钌红治疗组动物于伤后6h抽血并活杀.测定线粒体呼吸功能、Ca2+浓度([Ca2+]m)及血清LDH、CK.结果:钌红治疗组较烧伤组[Ca2+]m显著降低,线粒体呼吸控制率(RCR)、Ⅲ态呼吸速率(ST3)明显升高,Ⅳ态呼吸速率(ST4)降低,钌红治疗组血清CK、LDH显著低于烧伤组,分别是烧伤组的65.0%和45.5%.结论:钌红可减轻严重烧伤早期心肌线粒体和细胞损害.
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辣椒素受体拮抗剂治疗避水应激引起内脏痛觉过敏作用
目的 研究避水应激引起内脏痛觉敏感性的变化及特异性辣椒素受体(VR1)拮抗剂辣椒平与非特异性VR1拮抗剂钌红对避水应激引起内脏痛觉过敏的治疗作用.方法 将6周龄雄性Wistar大鼠54只分为无应激对照组(Neg组,n=18)、生理盐水对照组(NS组,n=12)、辣椒平治疗组(CZP组,n=12)、钌红治疗组(RR组,n=12),Neg组又分为三个小组,分别为直肠内注入生理盐水组、直肠内注入辣椒素组、直肠扩张组,NS组、CZP组和RR组只分为直肠内注入辣椒素组和直肠扩张组两小组,每小组均为6只动物.给予避水应激.每天1 h连续10 d.第11天Neg组与NS组腹腔注射溶媒,CZP组腹腔注射辣椒平,RR组腹腔注射钌红,30 min后每小组6只动物直肠内注入生理盐水或辣椒素,进行疼痛评分,或给予结直肠扩张(CRD)刺激,进行腹直肌肌电记录.结果 避水应激引起动物对直肠注射辣椒素敏感性增加,腹腔注射辣椒平与钌红均能抑制注射辣椒索引起的疼痛反应;避水应激也引起动物CRD刺激后腹直肌肌电活动增加,腹腔注射辣椒乎与钉红均能降低肌电活动的增加幅度,而钌红则完全抑制肌电活动的增加.结论 辣椒素受体拮抗剂可抑制避水应激引起的内脏痛觉过敏,辣椒素受体参与内脏痛觉过敏的发生过程.
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钌红、维拉帕米对去甲肾上腺素诱导的心肌c-fos、c-myc表达的影响
目的了解经典的钙通道阻断剂维拉帕米和肌浆网Ca2+释放抑制剂钌红对去甲肾上腺素(NE)诱导的心肌c-fos、c-myc基因表达的影响.方法通过离体心脏灌流,采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法,测定左心室c-fos、c-myc表达水平.结果钌红明显降低NE诱导的c-fos、c-myc表达,维拉帕米部分阻断NE诱导的c-fos表达,但对c-myc基因表达无明显影响.结论 NE诱导的心肌c-fos、c-myc基因表达有赖于细胞内钙([Ca2++];)的增高.
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博莱霉素对肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖及功能的影响
目的观察博莱霉素(BLM)肺损伤早期肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ）的超微结构和肺表面活性物质（PS）中磷脂（PL）及其组分的变化，探讨与ATⅡ增殖活性及修复功能的关系. 方法 BLM气管内滴注(4 mg*mL-1，5 mg*kg-1)制作28只大鼠肺损伤模型分为3，7，14，28 d组，分别行肺组织标本电镜组织化学染色和支气管肺泡灌洗液（BALF）的PS中PL及其组分测定并把二者作对照分析，观察PS形态组成成分的质与量的改变与ATⅡ结构的变化间的关系. 结果①注药后各组均可见PS层丧失连续、均匀绒状结构，脱落入肺泡腔或聚集成块现象或散落于肺泡腔内. 其中以3 d组较为明显. 钌红阳性表面层的厚度与对照组比较，3 d组较厚，且染色深，7, 14 d组无明显差别，28 d组较淡薄. BALF的PS中PL含量趋于增加. 其中磷脂酰甘油（PG）含量3 d组升高，7, 14, 28 d组降低. 磷脂酰肌醇（PI）含量变化则与此相反. ②3, 7 d组可见ATⅡ变性坏死，甚至崩解，以3 d组较明显. ATⅡ增生各组均可见，以7 d组较明显. 板层小体3 d组数量减少，并呈空泡状. 7 d组开始增多，以14, 28 d组较为明显. ③3, 7 d组基底膜水肿、裸露，甚至断裂，炎性细胞和间隔中的成纤维细胞等渗出到肺泡腔.14 d组可见有ATⅡ转化为ATⅠ，并逐渐伸展、粘附于裸露基底膜，14， 28 d组也可见裸露及断裂基底膜被沉着的细胞外基质（ECM），纤维素样物质埋于其中或修复. 结论①BLM肺损伤PS的形态以及质与量的改变，能较特异的反映PS系统损伤程度与ATⅡ增殖活性. ②BLM肺损伤早期ATⅡ具有一定的增殖、分化修复能力，且逐渐增强.
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钌红染色对研究肺泡Ⅱ型上皮细胞的价值
目的观察钌红染色方法对博莱霉素(BLM)肺损伤早期肺表面活性物质(PS)的超微结构的效果.方法 BLM气管内滴注制作大鼠肺损伤模型,分为3, 7, 14和28 d组,用钌红行肺组织标本染色,观察PS的改变与肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)结构变化间的关系.结果注药后各组均可见PS层丧失连续、均匀绒状结构,脱落入肺泡腔或聚集成块或散落于肺泡腔内,以3 d组较为明显.钌红阳性表面层的厚度与对照组比较,3 d组较厚(P<0.01),且染色深,7及14 d组无明显差别,28 d组较淡薄(P<0.01).相应的3及7 d组可见AT-Ⅱ变性坏死,甚至崩解,以3 d组较明显.各组均可见AT-Ⅱ增生,以7 d组较明显.板层小体3 d组数量减少,并呈空泡状.7 d组开始增多,以14及28 d组较为明显.14 d组可见有AT-Ⅱ转化为AT-Ⅰ,并逐渐伸展、粘附于裸露基底膜.结论钌红染色法可敏感显示BLM损伤AT-Ⅱ后PS的形态特征而直接反映AT-Ⅱ增殖活性的变化.
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辣椒素对家兔窦房结起搏细胞的电生理效应
目的:研究辣椒素对离体家兔窦房结起搏细胞的电生理效应及其作用机制.方法:应用经典玻璃微电极方法.结果:辣椒素(10μmol/L)使窦房结起搏细胞的零相大上升速度(Vmax)由(2.4±0.5)V/s降至(1.7±0.2)V/s(P＜0.05);舒张期除极速度(VDD)由(91±34)mV/s降至(70±30)mV/s(P＜0.01);起搏放电频率(RPF)由(186±14)beat/min降至(162±10)beat/min(P＜0.01);大舒张电位(MDP)绝对值由(49±3)mV降至(44±2)mV(P＜0.01);动作电位幅度(APA)由(55±4)mV降至(49±4)mV(P＜0.05).复极化90%时间(APD90)则由(149±21)ms延长至(167±27)ms(P＜0.01).应用辣椒素受体阻断剂钌红(10μmol/L)对辣椒素的上述电生理效应无影响.提高灌流液中钙离子浓度(5 mmol/L)以及应用L型钙通道开放剂Bay-K-8644(0.5μmol/L)均可抑制辣椒素对起搏细胞的电生理效应.β-肾上腺素能受体激动剂异丙1肾上腺素(20 nmol/L)可逆转辣椒素所引起的除极化时间延长和MDP的降低.结论:辣椒素对家兔窦房结细胞有负性变时作用,这些效应可能与其抑制钙离子内流及/或钾离子外流有关,而非由辣椒素受体介导.
