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核酸基础序列扩增法检测移植术后巨细胞病毒IE-mRNA的实验研究
传统检测移植术后巨细胞病毒(Human cytomegalovirus, HCMV)感染的方法很多,但各一定的局限性.我们自2004年1月建立了核酸基础序列扩增法(NASBA法)检测IE-mRNA和pp67-mRNA的试验条件,对42例器官移植受者的外周血标本进行了检测,并与pp65抗原检测结果相比较.
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白介素-1受体拮抗剂基因多态性与胃癌易感性关系的研究
目的:探讨白介素-1受体拮抗剂(IL-1RN)基因在国人胃癌及正常人群中的多态性,初步分析其基因型与其胃癌的相关性.方法:收集50例胃癌癌旁正常组织和50名正常健康人外周血标本,提取DNA进行PCR扩增,经琼脂糖凝胶电泳对IL-1RN基因多态性进行分析.结果:IL-1RN基因有5种不同组合的等位基因,我们的研究结果只有1/1、1/2、2/2三种多态,其余多态均为阴性.其中IL-1RN*1等位基因频率在正常人和胃癌患者中分别为73%和49%,IL-1RN*2等位基因频率则分别为27%和51%.正常人和胃癌患者中3种基因型频率分别为1/1:54%(27/50)和24%(12/50);1/2:38%(19/50)和50%(25/50);2/2:8%(4/50)和26%(13/50).携带IL-1RN*2等位基因会增加罹患胃癌的危险性,1/2杂合子和2/2纯合子比1/1纯合子分别增加2.96倍(P=2.96,95%CI=1.22-7.21;χ 2=5.68,P<0.05)和7.31倍(P=7.31,95%CI=2.13-25.09;χ2=10.01,P<0.01).结论:IL-1RN基因1/2、2/2多态性与国人胃癌易患性相关,可作为胃癌遗传易感性的检测指标,用于胃癌易患个体的预警和胃癌的预防.
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IL-1B及IL-1RN基因多态性与胃癌易感性的关系
目的:获取白介素1B(IL-1B)基因启动子区域C-31T,C-511T,C+3954T位点单核苷酸多态性和白介素1受体拮抗剂(IL-1RN)基因串联重复多态性在江苏高发区人群胃癌患者与健康对照中的频率分布资料,初步探讨其各基因型与胃癌易感性的关系.方法:采用人群为基础的病例对照研究方法,共收集285例胃癌患者与265例性别、年龄和地区频数匹配的对照外周血标本,同时调查流行病学资料.从外周血提取基因组DNA,以聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法对各位点进行基因分型.结果:IL-1B基因-31位点3种基因型CC,CT,TT在胃癌病例组中频率分别为21.8%,48.6%和29.6%;在对照组中为27.9%,48.8%和23.3%(P=0.203).相似的,-511位点TT,CT,CC基因型在病例与对照组中频率分别为18.2%,56.5%,25.3%和24.9%,52.5%,22.3%(P=0.184).在调整年龄、性别等因素后,携带-31TT基因型者比CC型胃癌发生的危险性增加75%(P=1.75,95%CI=1.08-2.85);携带-511CC基因型者比TT型危险性增加63%(P=1.63,95%CI=0.98-2.73).分层分析表明,这一危险性在H pylori 感染阳性人群中更为显著.IL-1RN和IL-1B+3954位点各基因型在病例与对照组中的分布没有显著性差异.结论:IL-1B基因启动子区域-31,-511位点多态性可能与中国人群胃癌易感性相关,尤其在H pylori感染人群中.
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麻醉药物致Brugada心电图的分子遗传学及其与恶性心律失常的相关性探讨
目的:探讨麻醉药物致Brugada ECG的分子遗传学机制,揭示基因型与临床表型、及其与恶性心律失常的相关性。
方法:以麻醉前ECG正常,麻醉过程中或麻醉后出现Brugada ECG的患者为研究对象,排外高血压、冠心病、某些药物以及其它因素所致复极化异常因素。收集患者临床资料和外周血标本并进行DNA提取。以DNA直接测序法筛查候选基因SCN5A、SCN1b、SCN3b和GPD1L,若发现基因变异,与200例正常人DNA序列对照以明确基因突变或单核苷酸多态性。分析该基因变异与Brugada ECG的相关性及其致恶性心律失常的危险分层。 -
国人SCN5A基因突变R965C与发热致Brugada心电图相关
目的:筛查发热致Brugada心电图(ECG)患者的基因突变,探讨其基因型与临床特征及其与致恶性心律失常的关系。
方法:收集发热诱发Brugada ECG患者临床资料,排外高血压、冠心病、电解质异常、药物以及其它因素所致复极化异常征象。采集患者及其家系成员外周血标本。采集患者外周血标本并提取DNA。对临床收集发热诱发Brugada ECG患者进行随访。利用DNA直接测序法,对候选基因SCN5A、SCN1b、SCN3b、GPD1L进行基因测序以寻找基因突变或单核苷酸多态性。 -
膜型和可溶性CD28分子在衰老过程中的调节性表达
为研究CD28分子在衰老过程中的表达情况,我们于2004年9~12月选择了513名健康人外周血标本进行膜型CD28分子(membrane CD28,mCD28)的表达以及其中300名健康人外周血血清进行可溶性CD28分子(sCD28)含量的测定,报道如下.
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胰腺癌患者外周血和十二指肠液中K-ras基因点突变的研究
从1999年起,我们开展了对胰腺癌患者外周血及十二指肠液标本K-ras基因点突变的检测,现报告如下.资料与方法1.标本来源:收集我院1997年2月至2002年10月胰腺癌患者外周静脉血标本21例,其他外周血标本中急性胰腺炎5例、慢性胰腺炎8例、壶腹癌8例、胆管癌7例、十二指肠乳头癌4例、胰岛素瘤4例及胆石症7例.同期收集胰腺癌患者十二指肠液标本23例,其他十二指肠液标本中急性胰腺炎8例、慢性胰腺炎6例、壶腹癌7例、胆管癌7例、十二指肠乳头癌4例及胃癌5例.
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脑胶质瘤Th1/Th2类细胞因子的漂移及意义
我们采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测了4株脑胶质瘤细胞株、52例新鲜脑胶质瘤标本和15例脑胶质瘤患者外周血标本的Th1/Th2类细胞因子的表达情况,初步探讨了脑胶质瘤Th2类细胞因子漂移的意义。 1.材料与方法:胶质瘤细胞株SHG-44、U251、C6和9L,购自上海细胞生物研究所或本室保存。胶质瘤组织标本52例,取自我院患者,术前均未接受放疗、化疗或免疫治疗。术后病理:星形细胞瘤Ⅰ级4例,星形细胞瘤Ⅱ级6例,间变性星形细胞瘤23例,多形性胶质母细胞瘤9例,少突胶质细胞瘤3例,脉络丛乳头状瘤1例,室管膜瘤2例,髓母细胞瘤4例。胶质瘤患者外周血标本15例,取自术前静脉血。细胞传代收获1×106个细胞;胶质瘤组织约1 cm3大小,仔细去除坏死组织;外周血5~10 ml,肝素抗凝,Ficoll梯度离心法分离出单个核细胞;总RNA的提取采用异硫氰酸胍一步法[1]。(1)检测指标:以IFN-γ、IL-2代表Th1类因子,IL-4、IL-6、IL-10、IL-13代表Th2类细胞因子,β-actin为内参照。(2)逆转录反应:5~10 μg细胞总RNA,加入0.1 mol/L DTT 2 μl、4×dNTP 1 μl、M-MLV 1 μl (200 U)、下游引物P2 1 μl(50 pmol/L),总体积20 μl。37℃ 1 h后,95℃ 10 min灭活M-MLV。(3)PCR反应:继续加入25 mmol/L MgCl2 8 μl、4×dNTP 1 μl、上游引物P1 1 μl,总体积98 μl;95 ℃ 5 min后,加入Taq DNA聚合酶2 μl (1 U/μl) 。循环条件为94 ℃ 1 min,58℃ 1 min,72℃ 1 min,循环35次,后72℃延长7 min。(4)1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR结果。
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叶酸代谢酶的基因多态性与神经管畸形的关系
高同型半胱氨酸血症与神经管畸形(NTDs)的发生密切相关.导致同型半胱氨酸在体内蓄积的因素较多,其中与叶酸代谢有关的酶主要是5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、胱硫脒合酶(CBS)及蛋氨酸合酶(MS).研究表明,MTHFR的热敏感多态性和CBS的基因多态性均可引起高同型半胱氨酸血症.本研究利用采集的外周血标本,检测mthfr第677位和cbs第833位核苷酸的多态性,初步探讨MTHFR和CBS的基因突变与NTDs之间的潜在关联.
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S-100B蛋白与神经系统疾病
近年来,S-100B蛋白作为脑损伤的神经生化指标,在中枢神经系统损伤的研究中日益受到重视.由于外周血标本易取得,且相对于CT、MRI检查较经济,对于不太适用于伴有意识障碍、人工通气、血流动力学不稳定及不合作的患者,外周血中可以反映脑损伤程度并易于观察其动态变化的神经生化指标,是对临床诊断、治疗、判断预后极好的补充.
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肺癌患者Vit D与调节性T细胞检测的临床价值
本文收集临床肺癌外周血标本,采用电化学发光、流式细胞技术检测肺癌患者外周血Treg细胞与25-羟基维生素D水平,并探讨两者的相关性及其临床价值,为肺癌预防和干预提供依据.
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HLA-DR4亚型及其分子三维结构模拟分析在骨髓移植中的应用研究
目的:建立HLA-DR4亚型的套式PCR-SSP分型方法,为临床骨髓移植提供可靠依据,并寻找HLA-DR4亚型与各种白血病之间的联系.探讨HLA三维构象模拟分析在预测GVHD中的作用,以及寻找HLA移植可容许抗原.方法:盐析法提取75例人外周血标本DNA.建立并使用套式PCR-SSP分型方法.使用MLR实验对1例无血缘关系骨髓移植供、受体进行GVHD发病风险分析.
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培美曲塞个体化治疗分子生物学基础的研究进展
近年来,随着基因组学和蛋白质组学的研究进展,肿瘤的治疗翻开了一个新的篇章--个体化治疗.这种新的理念主要指:通过检测患者肿瘤组织或外周血标本的某些标志物的表达,来预测患者对药物的敏感性和毒副反应,从而达到佳的治疗效果.培美曲塞(pemetrexed)是一种新型多靶点抗肿瘤药物.2004年2月被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于不能手术切除的恶性胸膜间皮瘤(MPM)的一线治疗.同年8月,FDA再次批准pemetrexed作为晚期NSCLC的二线治疗药物[1].2008年底,pemetrexed已跻身于NSCLC的一线治疗地位.
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用巢式PCR扩增ZFY基因产前诊断胎儿性别
近年来的研究表明,Y染色体上锌指结构基因(zinc-finger-Y gene,ZFY)是继SRY之后又一与性分化有关的单拷贝基因,并与精子的发生有关[1,2].为此,我们利用巢式PCR技术,以ZFY作为检测指标,参考有关文献自行设计内外两侧两对巢式PCR引物[3],对绒毛、羊水和孕妇外周血标本进行ZFY基因的特异扩增,初步建立了一种用PCR技术产前检测胎儿性别的方法.
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肺癌患者外周血癌细胞检测的研究进展
肺癌细胞的血行播散是肺癌转移复发的主要方式,因此检测外周血中是否存在肺癌细胞可能是预测患者肿瘤复发、转移和预后的重要指标[1].外周血标本较易获得,随着分子生物学技术的发展,目前已经能对外周血中微量的肿瘤学标志物进行检测,提高了外周血检测的特异性和敏感性.本文对肺癌患者外周血癌细胞检测的研究进展作一简要综述.