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2001年各国口蹄疫疫情简介
口蹄疫(Foot and Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的主要感染偶蹄动物的急性、热性、高度接触性传染病,人和非偶蹄动物也可感染但症状较轻.口蹄疫可以经过多种途径传播,一旦发生则呈暴发流行.动物患口蹄疫后生产性能急剧下降,对于幼年动物会造成心肌损伤进而发生死亡.虽然口蹄疫的发病率不高(成年动物发病率低于5%),但是疫病的暴发往往给农业、旅游业带来巨大的损失.因此,口蹄疫被国际兽疫局(OIE)列为第一位A类烈性传染病.
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常用消毒剂对口蹄疫病毒的灭活试验
目的 研究几种常用消毒剂对口蹄疫病毒灭活效果.方法 采用悬液乳鼠皮下接种培养法进行了实验室和现场灭活病毒效果检测.结果 以含有效碘100 mg/L的碘酸和50 mg/L的聚维酮碘对悬液内口蹄疫病毒可达到完全灭活.以含有效氯750 mg/L的三氯异氰脲酸和250 mg/L的复方二氯异氰脲酸能完全灭活悬液内口蹄疫病毒.以含有效氯溴750 mg/L的溴氯海因,可有效灭活口蹄疫病毒.以含过硫酸钾125 mg/L和过硫酸氢钾250 mg/L也可完全灭活口蹄疫病毒.结论 本试验所用的含碘消毒剂、含氯消毒剂以及两种过硫酸盐类消毒剂对口蹄疫病毒都有较好的杀灭效果,说明该病毒对常用消毒剂比较敏感.
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食源性微生物危险性评估
早在20世纪初,奶源性结核病和沙门菌病的爆发就已经被人类所认识,并运用巴氏消毒法进行了安全性的控制与预防.20世纪末期,尽管食品科技取得了显著的进展,但世界上却爆发了多起由病原微生物引起的重大食品安全事件.大肠埃希菌O157∶H7于1982年首次报道,但由于缺乏有效、敏感的检测方法,限制了其宿主及污染源的尽早阐明,导致出血性大肠埃希菌O157∶H7在日本等国家的中毒爆发.沙门菌、李斯特菌、葡萄球菌、空肠弯曲菌、副溶血性弧菌、禽流感病毒、口蹄疫病毒等微生物污染的大流行,使国际组织和各国政府对食品安全给予了高度的重视.2002年世界卫生组织(WHO)再次公告,食源性疾病和食品污染是一个巨大的、不断扩大的世界性公共卫生问题.每年发生的食源性疾病达到数十亿例,发达的工业化国家每年也至少有三分之一的人群患食源性疾病,其中约有170万15岁以下儿童因食源性微生物污染引起的腹泻而死亡.
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口蹄疫病毒泛亚型O/CHINA/99株全长cDNA分子克隆构建和感染性鉴定
设计并合成了O型口蹄疫泛亚型代表毒株O/CHINA/99基因组9条引物,利用RT-PCR扩增各基因片段,酶切后连到pOK-12载体上,经酶切、PCR和序列测定表明,O/CHINA/99全基因组由8 200个核苷酸组成,构建的感染性cDNA与原毒株的序列同源性为99.1%;利用T7 RNA聚合酶系统进行体外转录,转录产物RNA用脂质体转入BHK-21细胞传代培养,可观察到典型的FMDV致细胞病变效应;拯救病毒接种2日龄乳鼠后,可出现典型的临床症状,并于16～48h内死亡.以上结果表明,O/CHINA/99株全长cDNA分子克隆构建成功,并从构建的全长cDNA拯救出了口蹄疫病毒.
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口蹄疫病毒结构蛋白P1-2A及蛋白酶3C基因的转基因番茄对豚鼠免疫反应的初步研究
构建了O型口蹄疫病毒China99株结构蛋白P1-2A、非结构蛋白3C以及部分2B基因(P1-2X3C)的植物双元表达载体pBin438/P1-2X3C,通过农杆菌介导法转化番茄子叶,经卡那霉素抗性筛选,获得40余株抗性植株,对得到的抗性植株进行分子生物学检测,65%的再生植株PCR检测阳性;RT-PCR结果证实P1-2X3C基因在转基因番茄中能够有效转录;ELISA和Western blot检测表明转基因植株中表达的目的蛋白具有免疫反应性.转基因番茄叶片蛋白粗提液经肌肉途径免疫豚鼠,于第3次免疫后28d用100ID50/0.2mL的同源强毒攻击,结果表明口蹄疫病毒P1-2X3C基因的转基因番茄表达产物具有良好的免疫原性,豚鼠3免后血清效价可达1:64～1:128,攻毒后两组免疫豚鼠保护率分别达3/5和5/5.
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口蹄疫病毒RT-LAMP检测方法的建立
利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),建立了口蹄疫病毒快速检测方法,同时评价了该方法的灵敏性和特异性.结果表明,根据口蹄疫病毒多聚蛋白基因保守区段设计的LAMP引物能够在65℃下,1 h内实现目标核酸区段的大量扩增,检测结果可直接用肉眼判断.该检测体系具有极高的特异性,只能检测到目标病毒,与其他类似病毒如猪水泡病病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒等无交叉反应,可检测到10-5稀释度的目标病毒核酸量,比普通RT-PCR的灵敏性高100倍,比荧光PCR高10倍.
关键词： 口蹄疫病毒 逆转录环介导等温核酸扩增 检测 -
口蹄疫病毒多基因重组质粒的体外表达及衣壳组装
PCR扩增获得包含口蹄疫病毒P1、2A、3C、3D及部分2B编码区的目的基因片段P12X3C3D,将P12X3C3D经AflⅡ和XbaⅠ双酶切后,定向克隆于真核表达质粒载体pcDNA3.1(+);另将PCR扩增获得的P12X3C3D直接与真核表达质粒载体pTARGETTM连接,进行筛选、鉴定及DNA序列分析,分别获得重组质粒pcDNA3.1/P12X3C3D、pTARGET/P12X3C3D.将重组质粒分别转染BHK-21细胞,通过双抗体夹心ELISA方法和间接免疫荧光标记方法检测细胞中表达的口蹄疫病毒抗原,用磷钨酸负染,以电子显微镜观察转染重组质粒的细胞中组装的口蹄疫病毒空衣壳.结果表明,口蹄疫病毒基因组片段正确克隆到真核表达质粒载体上,重组质粒pcDNA3.1/P12X3C3D、pTARGET/P12X3C3D均可在BHK-21细胞中表达FMDV目的蛋白.其中重组质粒pTARGET/P12X3C3D表达的口蹄疫病毒抗原蛋白,能够在细胞内正确组装成病毒空衣壳.
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正链RNA病毒起始RNA合成分子机制的研究进展
正链RNA病毒大多是人类和动植物的重要病原体,如脊髓灰质炎病(PV)、口蹄疫病毒(FMDV)、丙型肝炎病毒(HCV)、登革热病毒(DEV)、西尼罗河病毒(WNV)以及严重急性呼吸综合症病毒(SARS)等,都给人类的健康以及动植物的生长带来严重危害,造成巨大的经济损失.
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口蹄疫病毒基因组RNA结构与功能研究进展
1 概述口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)属小RNA病毒科FMDV属,根据动物交叉保护和血清学试验分为O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asial 7个血清型,型间无交叉反应.每型又根据抗原亲缘关系分为不同亚型.小RNA病毒科包括鼻病毒、肠道病毒、甲肝病毒、心病毒和口蹄疫病毒5个属.
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口蹄疫O/China/99毒株在不同宿主系传代的3A和VP1基因变异研究
利用RT-PCR法扩增了经不同宿主系(乳鼠、BHK21细胞、PK15细胞)连传不同代次的口蹄疫O/China/99毒株的3A和VP1基因,并进行了核苷酸和氨基酸序列分析.结果表明,该毒株经不同宿主系传至90代后,VP1基因未发生大的变异,主要抗原位点也较稳定;而非结构蛋白3A基因却在不同宿主和代次发生突变缺失;经BHK21细胞传代后未发生缺失;经PK15细胞传代,在70～90代之间在第254～313位出现缺失;经乳鼠传代,在60～70代之间在第265～300位发生缺失,并在以后的90代毒中仍在此位缺失.这与代表性猪源流行毒O/YUN/TAW/97和O/HKN/21/70的3A基因在第276～305位发生缺失有相同之处.
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口蹄疫病毒Asia1/YNBS/58株全基因组序列分析
蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)感染引起的偶蹄动物(猪、牛、羊、骆驼等)共患的一种急性、烈性、接触性传染病.
关键词： 口蹄疫病毒 Asia1/YNBS/58株 基因组 序列分析 -
O型口蹄疫病毒O/LZ株基因组全长cDNA的构建
目的构建O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)O/LZ株基因组全长cDNA. 方法根据FMDV基因组和克隆载体的限制性内切酶酶切位点,将FMDV基因组设计为4段,进行反转录和扩增(RT-PCR),得到的片段分别克隆到质粒pMD18T-vetcor,筛选阳性重组质粒,测序正确的重组质粒(pMD18-S、pMD18-I、pMD18-P1和pMD18-P2)保存备用.然后对S区、I区和P2片段重新设计引物,其中S区的上游引物引入T7启动子序列;I区上游引物引入6个C,下游引物带有FMDV基因组中唯一酶切位点NruⅠ;用于3′端扩增的下游引物引入16个T,并以pMD18-S和pMD18-I为模板,对S区和I区进行融合PCR获得IS,以pMD18-P2为模板对P2片段进行2次PCR,获的带16个T的P3片段.将扩增片段克隆到pMD18T-vetcor,在pBuescript Ⅱ SK(-)中进行长片段的连接,获得基因组全长cDNA 克隆. 结果获得O型FMDV O/LZ株全基因组,并在此基础上构建了O/LZ株FMDV全长cDNA. 结论成功构建了O型FMDV O/LZ基因组全长cDNA 克隆,为进一步获得具有感染性的FMDV 分子克隆,并研究该病毒基因组结构和功能奠定了基础.
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口蹄疫病毒致病分子机制
在病毒感染引起机体发病的过程中,既有病毒与细胞间的相互作用,又有病毒侵入细胞后的一系列反应,包括病毒与细胞间吸附、病毒粒子释放、病毒核酸在细胞内复制等过程.从理论上讲,口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)的任何一种结构蛋白和非结构蛋白、病毒BNA元件、参与病毒复制过程的宿主细胞蛋白和内膜(包括FMDV细胞受体)都可以被认为是毒力因子.这些因子缺陷或者缺乏,将可能引起病毒致病力的变化.
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口蹄疫病毒实验室研究的环境风险评估
以北京市某生物安全三级实验室为例,在对口蹄疫病毒研究的实验类型、实验剂量、生物安全防护设备以及实验室周边环境敏感程度进行综合分析的基础上,运用高斯扩散模型对实验室发生事故时可能产生的气溶胶扩散范围进行预测,综合各方面因素,得出该实验室在既定实验条件下研究口蹄疫病毒对周围环境是比较安全的综合风险评估结果,以供实验室管理者决策参考.
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从口蹄疫流行谈"生物入侵"
近英国惊暴口蹄疫,整个欧洲大陆一片恐慌.当数万只猪、牛、羊在英国遭屠宰焚尸之际,法国农业部又宣布,本国农场的死羊中检查出口蹄疫病毒,遂即下令将可能已感染的5万只羊宰杀销毁;接着爱尔兰和苏格兰也出现疫情,政府要求加强边境检查;比利时发现了可能因感染口蹄疫而死的猪,立即关闭了当地的牲畜交易市场;俄罗斯迅速作出禁止进口英国的任何肉制品的决定,并加强了对它国进口肉的检查……据新报道,欧洲以外的国家如沙特阿拉伯、蒙古、印度、阿根廷、日本等国也宣布本国发现了口蹄疫病例.这次口蹄疫的大范围传播,确令不少国家谈"疫"色变,担心灾害降临,尤其是美国、中国等大国,更是高度戒备,严阵以待,除暂停从英国等欧洲国家进口一切畜禽制品、奶类和饲料外,还加强了对进口货物和入境人员的卫生抽检和监控.
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O型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达
目的口蹄疫病毒的VP1蛋白是诱导中和抗体及激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白,利用Bac-toBac杆状病毒表达系统表达VP1基因,为建立O型口蹄疫抗体血清学诊断方法奠定基础.方法将O型口蹄疫病毒VP1基因插入pFastBacHIa载体,构建重组质粒pFast BacHIa-VP1.将该重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,VP1基因与Bacmid发生特异性位点转座.经PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到病毒基因组多角体蛋白基因启动子下游,提取阳性质粒转染Sf9昆虫细胞.结果 SDS-PAGE电泳和Western blot检测结果表明VP1基因成功地在Sf9昆虫细胞中进行了表达,蛋白分子量为26.4kDa.结论 VP1基因在Bac-to-Bac系统中的成功表达为口蹄疫病毒VP1蛋白的抗原性、免疫原性以及免疫抗体水平检测研究奠定了基础.
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争鸣:生态食品更利健康吗?
现今,牛肉里有朊病毒和激素,水果蔬菜里有杀虫剂和除草剂,鸡肉里有二恶英,猪肉里有口蹄疫病毒,鱼肉里有汞,鸡蛋里有沙门氏菌,大豆和玉米是转基因的……这些食品的丑闻已经使消费者胆战心惊,忍无可忍了.下一个又是什么呢?
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关于口蹄疫病毒的分类问题和建议
生物学分类有严格的规范和标准,尤其在病毒学分类上更有严格规定,因而极少出现一种病毒有多种属名、种名的现象;但在科学又发展和病毒学研究的历史长河中也出现一些初期有争论分类归属不定的情况,但随着科学实验和认识的不断深入根据新的研究成果进一步确认其分类依据,并经国际专业命名委员会认可并发布,因而对统一病毒的名称,分类地位,性质有重要的意义.
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口蹄疫祸畜也殃人
口蹄疫俗称"口疮"、"鹅口疮"、"蹄黄"等,它是由一种口蹄疫病毒引起的人和动物共患的急性发热性高度接触性的传染病.人类大概知道这种病约有500年了,确切认识此病也有100年历史.口蹄疫在世界上许多国家和地区的人和畜中都有发生,目前在非洲、亚洲和南美洲流行较严重,在欧洲某些国家如英国、法国也有发生.
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从口蹄疫流行谈"生物入侵"
近英国惊爆口蹄疫,整个欧洲大陆一片恐慌.当数万只猪、牛、羊在英国遭屠宰焚尸之际,法国农业部又宣布,本国农场的死羊中检查出口蹄疫病毒,当即下令将可能已感染的5万只羊宰杀销毁;接着爱尔兰和苏格兰也出现疫情,政府要求加强边境检查;比利时发现了可能因感染口蹄疫而死的猪,立即关闭了当地的牲畜交易市场;俄罗斯迅速作出禁止进口英国任何肉制品的决定,并加强了对他国进口肉的检查……
