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  • 吉林省长春市肠道病毒Echovirus 18 VP1基因特征分析

    作者:孙炳欣;吴静;孙宇;崔薇;张兴国

    目的 分析2015年长春市一起发热伴出疹疫情中患者粪便肠道病毒Echovirus 18型(E-18)毒株VP1基因序列特征及其与国内外其他流行株的进化关系.方法 采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增VP1基因片段并测序,利用DNAman软件和Mega 6.0软件进行序列分析.结果 经RT-PCR方法扩增获得4株774 bp的VP1基因片段并测序,经同源性分析比较发现,各序列间核苷酸同源性为100%.与国内外E-18病毒VP1序列同源性比较发现,长春病毒株与2015年同时发现的河北省分离株同源性高,核苷酸同源性为97%,氨基酸同源性为99%.与Metcalf原型株比较,核苷酸同源性为80%,氨基酸同源性为93%,氨基酸对比发现有18个位点发生突变.结论 吉林省首次发现E-18型肠道病毒,为中国E-18病毒分子流行病学研究提供重要信息.

  • 一起甲型病毒性肝炎暴发疫情的病原学诊断与基因分析

    作者:高红;董红军;傅燕;胡逢蛟;方挺;张妹

    目的 查明引起2004年宁波局部地区甲型病毒性肝炎(甲肝)暴发疫情的病原并分析其基因特征.方法 用酶联免疫吸附试验检测血清中的甲肝病毒IgM抗体(HAV IgM)和戊型肝炎病毒IgM抗体(HEV IgM),利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测粪便样品中的HAV核酸(RNA)并扩增VP1基因,测序结果利用DNA star软件进行比对分析.结果 172份血清样品中HAV IgM均为阳性,HEV IgM均为阴性.172份粪便样品中共检测到HAV RNA阳性样品74份,占43.0%.选择5份样品进行HAV VP1基因扩增并测序,测序结果经过比对后发现4株宁波株(NB2004-10、NB2004-11、NB20IM-51和NB2004-71)的VP1基因是完全一致的;NB2004-75与以上4株的核苷酸的同源性为99.9%,氨基酸的同源性为99.7%;宁波株与HAV各基因型标准株比较,与IA亚型毒株AH2的核苷酸和氨基酸的同源性高,分别为98.9%和99.7%~100.0%;与中国其他地区流行株比较,核苷酸和氨基酸的同源性波动于89.4%~96.7%和97.0%~100.O%.结论 引起这次肝炎暴发疫情的病原是甲肝病毒,其基因型为LA亚型,与日本株AH2、AH3亲缘关系近,与中国其他地区流行株处于不同的进化簇上.

  • 无菌性脑膜炎暴发中病原学检测及埃柯30型肠道病毒的基因特征和分子进化分析

    作者:郑友限;刘建忠;翁育伟;陈炜;林碧莲;陈明春

    目的 了解引起福建省泉州地区2011年无菌性脑膜炎暴发疫情的埃柯30型肠道病毒(echovirus 30,ECHO30)病原及基因特征,分析基因变异情况及进化来源.方法 对泉州市2011年无菌性脑膜炎暴发疫情中的临床样本采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)方法进行肠道病毒通用型、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)核酸检测,随机选5份阳性样本进行肠道病毒VP1区核苷酸序列测定,将测序所得VP1序列用BLAST程序在GenBank上序列搜寻比对,确定其基因型,并通过构建进化树分析其遗传进化规律.结果 47份样本经rRT-PCR检测,有39份非EV71和Cox A16的其他肠道病毒核酸阳性,5份阳性样本的肠道病毒VP1区核苷酸序列均为876 bp,且同源性高,均大于98.9%,高仅相差一个核苷酸,与它们具有较高同源性的均是ECHO30.与本次分离株亲缘关系近的一组ECHO30分别是2008年河南省和浙江省的分离株,与中国台湾2001年无菌性脑炎分离株以及印度2011年分离株则距离较远;原型株Bastianni和20世纪90年代美国分离株和本次分离到的ECHO30毒株距离远.结论 2011年ECHO30在泉州地区发生一定程度的传播流行,并导致无菌性脑膜炎疫情的局部暴发流行,进化树分析表明本次分离株与国内近年ECHO30分离株亲缘关系较近,而与国外分离株则相对较远.

  • 2016年湖北省部分地区手足口病肠道病毒病原谱及柯萨奇病毒A6型和A10型基因特征分析

    作者:李静;张婷;邹文菁;杨朝晖;占建波

    目的 了解2016年湖北省部分地区手足口病病原谱特征,对其中的柯萨奇病毒A组6型(Cox A6)和A组10型(Cox A10)基因特征进行分析.方法 采集2016年湖北省部分地区手足口病患者阳性标本,提取病毒核酸,通过一步法反转录-PCR扩增肠道病毒VP1序列并测序,经Blast比对确定病毒基因型.对其中Cox A6和Cox A10的VP1全长序列进行同源性和系统进化分析.结果 病原学监测结果显示,肠道病毒71型(EV71)阳性率为29.4% (599/2 035),柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)阳性率为25.7% (522/2 035),其他肠道病毒阳性率为44.9% (914/2 035).对该地区收集的83份肠道通用阳性的非EV71和非Cox A16进行病毒分型分析,Cox A6阳性检出率为56.6% (47/83),Cox A10阳性检出率为22.9% (19/83),还检测出其他肠道病毒如Cox A2(2株)、Cox A4(7株)、CB4(2株)、CB5(2株)、CB6(1株)、Echo5(1株)、Echo9(1株)和Echo25(1株).对Cox A6和Cox A10的VP1基因同源性比对及系统进化分析显示,2016年湖北省22株Cox A6的VP1基因核苷酸同源性为95.1% ~ 100.0%,11株Cox A10的VP1基因核苷酸同源性为95.2% ~ 100.0%.我国与其他国家Cox A6和Cox A10可分别划分为8个(A~H)和7个基因谱系(A ~G).湖北省Cox A6与我国其他Cox A6位于H基因谱系上;湖北省Cox A10与我国其他Cox A10位于G基因谱系上.结论 2016年湖北省部分地区手足口病病原体除了EV71和Cox A16两种主要病毒外,还检测出Cox A6和Cox A10等手足口病的病原.其他肠道病毒中以Cox A6和Cox A10为主,仍需进一步加强对其他肠道病毒的监测和分子流行病学特征的分析.

  • 2014-2015年湖北省手足口病肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型VP1基因特征

    作者:占建波;李静;杨朝晖;詹发先

    目的 了解湖北省手足口病肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)的VP1基因特点,研究该省EV71和Cox A16的基因型别及分子进化特征.方法 对2014-2015年湖北省26株EV71和27株Cox A16流行株的VP1基因测序,分析其同源性和遗传进化特征.结果 2014-2015年湖北省EV71和Cox A16流行株VP1核苷酸和蛋白氨基酸序列同源性均较高,EV71流行株的蛋白氨基酸和核苷酸序列同源性分别为97.6% ~ 100.0%和92.3%~100.0%.Cox A16流行株的蛋白氨基酸和核苷酸序列同源性分别为96.6% ~ 100.0%和92.3% ~ 100.0%.EV71的VP1基因系统进化分析表明,湖北省流行的EV71与我国其他地区流行的EV71均位于一个大的分支上,均为C4基因型的C4a亚型.Cox A16流行株与B1b亚型代表株位于同一分支上,主要为B1b亚型.结论 2014-2015年湖北省EV71和Cox A16流行株分别为C4a亚型和B1b亚型,其核苷酸和氨基酸与国内外其他地区的手足口病病毒株均有较高同源性.

  • 杭州市肠道病毒71型的分离与VP1区域序列分析

    作者:邱晓枫;祝水芬;濮小英;叶榕;张国忠;李钧;缪凡;黄志成

    目的 了解杭州市2008年和2011年肠道病毒71型( EV71)流行株VP1基因特征.方法 手足口病患者咽拭子、粪便等样本先通过荧光RT-PCR方法初筛,然后选部分肠道病毒71型阳性样本进行病毒分离、培养;通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定上述培养物,并扩增VP1区全长基因和序列测定,利用生物信息学软件对序列进行分析,构建基因进化树.结果 从2008年和2011年手足口样本中分离到EV71阳性毒株各4株,VP1基因全序列测定结果显示其与C4亚型代表株核苷酸和氨基酸的相似性高,分别为93.8%~95.2%、99.0%~99.7%.结论 杭州市手足口病患者感染EV71病毒的流行株属C基因型的C4亚型.

  • 杭州地区急性呼吸道感染患儿人博卡病毒的检测及分析

    作者:周银燕;于新芬;潘劲草;寇宇;叶榕

    目的 了解杭州地区人博卡病毒(HBoV)的流行情况和基因变异情况.方法 对杭州地区160例儿童急性呼吸道感染患者咽拭子样本进行HBoV检测,并对阳性样本进行常见呼吸道病毒的检测,终选取HBoV单一阳性的HZ1株和HZ2株进行VP1基因扩增,将获得的序列上传Genbank并与其他国家和地区的8株HBoV的VP1基因进行序列比对和分析.结果 杭州地区HBoV的检出率为6.9%(11/160),与其他常见呼吸道病毒的合并感染率达到45.5%(5/11),HZ1株和HZ2株与其他国家和地区的8株HBoV的VP1基因相似性达到99%以上.结论 研究证明杭州地区急性呼吸道感染患儿中存在HBoV的感染,与其他呼吸道病毒有较高的合并感染,从分离到的HZ1株和HZ2株来看,杭州地区流行的是ST2基因型,其外壳蛋白VP1基因变异很小.

  • 青岛地区2007-2009年人肠道病毒71型的分子流行病学研究

    作者:刘晓琳;汪照国;杨婷婷;弋英

    目的 了解2007-2009年青岛地区引起手足口病的人肠道病毒71(EV71)型VP1基因编码区(CDS)分子流行病学特征.方法 采用荧光定量PCR对咽拭子标本进行总肠道病毒(EV)、柯萨奇病毒A16(CA16)和EV71检测.选取部分EV71检测阳性的标本进行VP1基因CDS序列的扩增及测序,对所获得的序列进行进化树分析.结果 青岛市2007-2009年的51株EV71病毒核苷酸和氨基酸的差异性分别为5.3%和1.7%.所有病毒均属于C4亚型中的C4a簇.2008和2009年的基因进化树均有多个分支产生,但每年都有一个主要分支(即优势株).2008年的优势株与2007年山东省临沂市优势株高度同源,2008年的次优势株和2009年的优势株同与2008年安徽省阜阳市优势株高度同源.2007年的2株EV71与2007年山东省临沂市流行株高度同源.结论 青岛市2008和2009年的EV71均有多个传播链存在,2008年的主传播链至2009年变为次传播链,但2008年的次传播链至2009年发展为主传播链.

  • 浙江省2008-2012年肠道病毒相关病毒性脑炎病原谱及分子流行病学特征分析

    作者:严菊英;缪梓萍;吕华坤;周佳悦;陈寅;卢亦愚;张严峻

    目的 了解2008-2012年浙江省肠道病毒相关病毒性脑炎病原谱及分子流行病学特征.方法 从监测点采集疑似病毒性脑炎患者脑脊液和粪便样本利用RD和Hep-2细胞分离病毒,采用肠道病毒标准血清定型,并对分离株VP1基因测序,进行同源性与进化分析.结果 从610例患者616份样本中分离到人类肠道病毒(HEV) 127株(20.6%),其中柯萨奇病毒(CV)60株,埃可病毒(ECHO:E) 67株,病毒血清型分别为CVA9、CVBl 、CVB3 ~5、E3、E4、E6、E9、E14、E25、E30.2008-2012年优势株分别为CVB3、CVB5、E6、E30和E30.各分离株VP1基因序列全长834 ~918个核苷酸,与相应原型株核苷酸(nt)和氨基酸(aa)的同源性分别为76.7%~85.0%和91.1%~ 97.9%;浙江分离株型内差异大为E6,nt和aa差异分别为20.4%和4.8%.基于VP1基因的进化分析结果表明,浙江分离株均位于HEV-B分支上,并显示出一定地域和时间效应;E6血清型内部又分成2小分支.结论 2008-2012年浙江省病毒性脑炎的主要病原为HEV-B,涉及12个血清型;不同年份优势流行株不断变化,E30为绝对优势株;浙江E6分离株存在2个亚类流行株.

  • 2014年山东省1株柯萨奇病毒B5分离株全基因序列分析

    作者:王敏;韦庆娟;李娟;江新泉;张振杰;童贻刚;丁淑军;王显军;史卫峰

    肠道病毒属于小RNA病毒科(picornaviridae)、肠道病毒属(enterovirus,EV).基于肠道病毒衣壳蛋白VP1序列,将人EV分为4个组:HEV-A、HEV-B、HEV-C和HEV-D,其中HEV-B包括所有的ECHO病毒、柯萨奇病毒(coxsackievirus, CV)B组(CVB)、CVA9、EV69以及近几年发现的一些新型别.目前,柯萨奇病毒B组有B1~B6血清型.

  • 2008~2011年贵州省肠道病毒71型分子流行特征分析

    作者:阎岩;郭军;周敬祝;唐光鹏;王定明

    为研究贵州省肠道病毒71型(EV71)的基因型和分子流行特征,监测了全省报告的手足口病病例,选择2008年以来贵州全省部分EV71阳性标本进行病毒分离及VP1全基因测序(含重症病例、死亡病例和轻症病例),与国内外近年流行毒株及各亚型代表株进行基因比对,分析同源性及基因亚型.2008年、2009年及2011年贵州省流行的主要病原为EV71,获得109株参比序列毒株的同源性为95.3%~99.7%,贵州省毒株与邻省及山东省、上海市、南京市、吉林省和宁波市代表株的同源性高,轻症与重死病例的核苷酸及氨基酸序列无明显的特征性差异,未出现不同基因亚型病毒的输入或改变,仍属C4a亚型.同地区、同年度内的核苷酸序列差异小于跨地区、跨年度差异.

  • 三门峡市手足口病病原分离检测及肠道病毒71型VP1基因分析

    作者:武恕星;武景福;杨洁;卫海燕;许玉玲;黄学勇

    了解三门峡市2011年手足口病例及健康儿童肠道病毒型别及生物学特征.本研究采集55份手足口病临床病例及60份健康儿童粪便接种敏感细胞进行肠道病毒分离,提取RNA,用荧光RT-PCR检测肠道病毒通用型(Pan-enterovirus,PE)、肠道病毒71型(Human enterovirus 71,EV71)、柯萨奇病毒A16型(Coxsackie virus A16,CA16).EV71、CA16分别用各自的VP1引物全序测定鉴定,对其它肠道病毒使用引物对012/011、008/013进行扩增测序,并与已知序列对比分型鉴定,并且对EV71病毒VP1基因特征进行了分析.临床病例肠道病毒检出率为52.73%(29/55)、健康儿童肠道病毒检出率为18.33%(11/60);临床病例检出22株EV71、4株CA16和3株其它肠道病毒,健康儿童检出肠道病毒11株,其中柯萨奇B组病毒占81.82%(9/11).对19株EV71病毒VP1基因分析证实,三门峡市2011年流行株为C4a亚群,其进化聚类以灵宝市、卢氏县聚类为明显.引起手足口病主要为EV71和CA16,健康儿童中存在大量的柯萨奇B组病毒,隐性感染广泛存在,2011年本地EV71病毒流行株为C4a亚群,有明显地域聚集特点.

  • 鸭甲肝病毒3型2012年山东分离株VP1基因的序列分析

    作者:徐倩;陈琳琳;张瑞华;杨蕾;谢之景;朱岩丽;姜世金;司兴奎

    为揭示近年来鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)中国分离株VP1基因的遗传变异规律,本研究对2012年从山东省分离到的13株DHAV-3的VP1基因分别进行PCR扩增、序列测序与分析.结果显示,13株DHAV-3的VP1基因均由720个核苷酸组成,共编码240个氨基酸,核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为94.6%~99.9%和95.0%~100%.与GenBank中公布的31株DHAV-3的VP1基因的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为92.5%~100%和90.8%~100%.系统进化分析显示,DHAV-3可分为两个基因型,其中除疫苗毒B63之外所有中国分离株均属于GⅠ型,越南分离毒株主要属于GⅡ型S1亚型,而韩国分离株组成GⅡ型中的S2亚型,具有明显的地域特征.

  • 新乡地区2011年肠道病毒71型VP1基因特征分析及手足口病流行特点

    作者:马建敏;卫海燕;于贺军;李坤;黄学勇

    为了解新乡地区2011年肠道病毒71型(EV71)VP1基因特征及手足口病流行特点,采用荧光RT-PCR对临床诊断的粪便标本进行总肠道病毒(EV)、柯萨奇病毒A16(CA16)和EV71检测;选取10例EV71阳性标本进行VPl序列扩增并测序,所得序列进行同源性分析和构建系统发生树;对2011年新乡市手足口病疫情监测数据进行分析.结果显示,重症标本的EV71阳性率(73%)显著高于CA16阳性率(19%)(P<0.01);10株新乡EV71分离株的核苷酸及氨基酸差异分别为2.8%和0.9%,属于C4亚型的C4a簇;9株VP1区第170位氨基酸为A,1株为V;与近缘的C4a型代表株相比,新乡优势株的氨基酸变异一般发生在VP1第292位氨基酸(T→A);2011年新乡市共上报手足口临床诊断病例1118例,92%的发病年龄在3岁以下,发病高峰分别出现在4和12月份,提示一定要加强手足口病预防控制,寒冷天气尤其不能忽视.

  • 2014年安徽省柯萨奇病毒A组16型分离株VP1基因特征研究

    作者:史永林;王贤;陈国平;张进;胡万富

    研究2014年安徽省手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿中分离的柯萨奇病毒A组16型(Coxsachivirus A 16,CVA16)毒株VP1区基因特征.收集安徽省2014年1月至11月期间413份HFMD患儿咽拭子标本接种敏感细胞分离肠道病毒,用荧光定量RT-PCR鉴定细胞培养物,对CVA16阳性培养物进行毒株VP1区RT-PCR扩增及核苷酸序列测定和基因特征分析,并与国内外参考序列构建基因亲缘性关系树.共分离鉴定出肠道病毒阳性培养物97份,其中CVA16病毒分离株17株,人肠道病毒71型(Human enterovirus 71,HEV71)分离株76株,其它肠道病毒分离株4株,总体病毒分离率为23.49%(97/413).CVA16基因亲缘性关系分析显示:安徽省2014分离的17株CVA16毒株都属于B1基因型B1b一个分支,它们之间在核苷酸和氨基酸水平上的同源性分布为分别为95.30%~100%和98.70%~100%,但在B1b分支内形成几个传播链.17株CVA16毒株VP1区核苷酸序列与国内云南、湖南、广东、西藏和江苏地区病毒分离株同源性较高,亲缘性关系近,其中与湖南2013年和广东深圳2014年CVA16病毒分离株同源性高,为96.40%~99.70%.2014年安徽省分离的CVA16病毒分离株属于B1基因型B1b亚型,为优势流行株;在B1b分支内形成多个小的病毒传播链共同流行.

  • 贵州省2011年急性胃肠炎诺如病毒的哨点监测及其基因特征分析

    作者:阎岩;吴悦;郭军;田克诚;王定明

    为了解贵州省2011年诺如病毒的基因型,监测了2011年5月至12月于贵州省人民医院就诊的急性胃肠炎病例,收集粪便标本,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)初步鉴定,并对阳性株的VP1基因区克隆及测序.检测标本70份,GⅠ型诺如病毒阳性1株,阳性率1.43%,GⅡ型诺如病毒阳性34株,阳性率48.57%,获得7份GⅡ型诺如病毒VP1基因序列,3株为GⅡ.4亚型,为新型变异株(GⅡ4 2011),与GⅡ4 2006b变异株的亲缘关系近,有1个氨基酸位发生了回复突变;4株为GⅡ.3亚型,分为2个基因簇,1簇与2008~2009年韩国株(HM635118)及上海株(GU991355)的亲缘关系近,1簇与2010年日本株(AB629943)及2007年印度株(EU921389)等的亲缘关系近,有4个氨基酸位点易发生回复突变.

  • 口蹄疫O/China/99毒株在不同宿主系传代的3A和VP1基因变异研究

    作者:张永光;吕建亮;王永录;方玉珍;蒋守田;张维德;刘湘涛;潘丽;刘力宽;裴仉福

    利用RT-PCR法扩增了经不同宿主系(乳鼠、BHK21细胞、PK15细胞)连传不同代次的口蹄疫O/China/99毒株的3A和VP1基因,并进行了核苷酸和氨基酸序列分析.结果表明,该毒株经不同宿主系传至90代后,VP1基因未发生大的变异,主要抗原位点也较稳定;而非结构蛋白3A基因却在不同宿主和代次发生突变缺失;经BHK21细胞传代后未发生缺失;经PK15细胞传代,在70~90代之间在第254~313位出现缺失;经乳鼠传代,在60~70代之间在第265~300位发生缺失,并在以后的90代毒中仍在此位缺失.这与代表性猪源流行毒O/YUN/TAW/97和O/HKN/21/70的3A基因在第276~305位发生缺失有相同之处.

  • 肠道病毒ECHO13中国分离株的基因特征

    作者:毛乃颖;许文波;杨秀惠;刘中华;严延生;潘伟毅;张勇

    为研究ECHO13病毒中国分离株的分子特征及其与世界其它分离株之间的基因关系,对1998年、2000年从中国福建省分离到2株ECHO13病毒进行基因序列对比分析.2株病毒分别命名为Fujian98-1和Fujian00-1,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出VP1蛋白编码基因全长861个核苷酸片段并进行序列测定,将2株ECHO13病毒的VP1序列与所有已发表的ECHO13病毒VP1基因全长进行同源性比较.结果显示,福建分离株之间核苷酸同源性为79.6%,氨基酸同源性为93.4%;与遗传距离近的法国CF1089-91(AJ537604)毒株的核苷酸同源性分别为80%和88%,与代表株Del Carmen的核苷酸同源性分别为75.8%和77.9%.通过VP1基因分析,福建2株病毒均属于ECHO13病毒,与血清中和试验鉴定结果一致.下载所有已发表的ECHO13病毒VP1序列并构建进化树,发现福建2株病毒分属不同的分枝,提示这2株病毒来自不同的病毒传播链.进一步分析发现,整个ECHO13病毒可划分为3个不同的基因型:A、B和C基因型.福建Fujian98-1和Fujian00-1分别被划分在基因型B和C中,各基因型之间的核苷酸差异均大于20%.为验证该分型方法,将26株来自不同国家和时间的ECHO13病毒和2株福建分离ECHO13病毒部分VP1基因序列进行对比分析,建立进化树.结果显示,所有ECHO13病毒被分在A、B和C3个基因型中,而2株福建分离病毒仍然被分在B和C基因型中.除了B基因型1株病毒以外,所有3个基因型之间的核苷酸差异均大于15%,与VP1全长分型结果基本一致,说明部分VP1序列的基因分析也能用于对ECHO13病毒进行规律和分子流行病学的研究中.该研究首次报道了ECHO13病毒中国分离株的VP1蛋白基因全长序列,并推荐按VP1基因全长核苷酸差异≥20%作为划分基因型的标准,将已知的ECHO13病毒划分为A、B和C3个基因型.同时也可用病毒VP1基因5′端部分序列替代VP1全长序列来划分基因型.

  • ECHO20病毒株KM/EV20/2010的分离鉴定及其VP1基因序列特征分析

    作者:潘玥;邵聪文;吉玛;朱艳菊;张云昆;马忠飞;刘建生;马绍辉

    目的 分离并鉴定2010年云南省昆明市甲型肝炎患儿粪便标本中混存的ECHO20 (Echovirus 20,ECHO20)KM/EV20/2010病毒株,分析其VP1基因遗传特征. 方法 采用KMB17细胞对大便标本进行病毒分离;采用微量细胞病变法,经WHO肠道病毒组合血清及单价血清对该分离株进行鉴定;采用RT-PCR法扩增病毒VP1基因并进行序列测定,并运用Mega 4.0等软件进行分析处理. 结果 分离毒株经微量中和试验鉴定为ECHO20血清型,编号为KM/EV20/2010;经RT-PCR法扩增获得为867 bp的VP1基因,与国内分离株核苷酸和氨基酸的同源性分别为79.5%~91.7%和98.9%~99.6%,与国外分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为80.2%~83.2%和96.4%~99.6%;在进化树上云南分离株与GenBank中登录的中国国内2001年山东分离株01352和1998年法国分离株94CF1666形成一个进化分支. 结论 KM/EV20/2010分离株为肠道病毒ECHO20型病毒,可用KMB17人二倍体胚肺成纤维细胞分离增殖.

  • 柯萨奇B5型病毒安徽分离株的鉴定及VP1区基因特征分析

    作者:史永林;张永根;胡万富

    目的 了解手足口病相关病原CVB5病毒安徽分离株VP1基因遗传进化特征. 方法 用RD和Hep-2两种细胞对采集的手足口病临床病例咽拭子标本进行病毒分离,出现CPE后培养物上清,采用微量中和试验鉴定毒株血清型;抽提病毒RNA,用RT-PCR扩增VP1基因,对扩增产物进行基因序列测定,采用ClustalX2.0和Mega5.0生物软件对测序结果与国内外参考毒株进行基因亲缘性进化分析. 结果 2株毒株微量中和试验鉴定为CVB5,基因测序显示VP1区核苷酸长度均为891 bp,其核苷酸和氨基酸序列同源性均为100%;基因进化分析显示,安徽分离株与山东、河南和浙江分离毒株亲缘性较近,处于同一进化分支Clade Ⅰ,核苷酸同源性为92.56%~98.94%,氨基酸同源性为92.93%~100%;与国外参考株及CVB5的原型株(Faulkner/)比对,核苷酸和氨基酸序列同源性分别为78.89%~83.84%和96.81%~98.59%. 结论 分离到的2株病毒均为肠道病毒CVB5,其VP1区基因和氨基酸序列变异较小,与国内流行参考株同源性高.

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