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力达霉素辅基蛋白-FITC偶联物的制备
目的 构建荧光衍生化的LDM辅基蛋白为日后研究LDM对肿瘤组织的靶向性打下基础. 方法 采用FITC直接标记法对LDM辅基蛋白进行标记,用Sephadex G15葡聚糖凝胶柱和透析法去除未标记上的FITC,用MALDI-TOF质谱检测连接效果. 结果 LDM辅基蛋白与FITC偶联的分子比为1:1. 结论 LDM辅基蛋白可以标记上FITC荧光物质.
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新型荧光试剂柱前衍生高效液相色谱定量分析小鼠脑脊液中氨基酸类神经递质
目的 采用新合成的荧光试剂柱前衍生氨基酸类神经递质,建立其测定方法,并测定小鼠脑脊液中氨基酸类神经递质的含量.方法 以1,3,5,7-四甲基-8-苯基-(4’-O-(Ⅳ-琥珀酰亚胺乙酸酯))-二氟化硼-二吡咯甲烷(TMPABOSu)作为柱前荧光衍生试剂,在pH 8.8的硼酸-硼砂缓冲溶液中,30℃衍生反应5 min后获得稳定的荧光衍生产物,在反相色谱柱上,采用梯度洗脱进行5种氨基酸类神经递质标准品衍生物的分离检测,荧光激发波长为497 nm,检测波长为509 nm.结果 5种氨基酸类神经递质的线性范围为0.01~1.2 μmol/L,线性回归系数均大于0.998 1,检出限为l nmol/L(S/N=3:1).小鼠脑脊液中天门冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、γ-氨基丁酸和丙氨酸的含量分别为0.06、0.20、0.26、0.03和0.07 μmol/L,标准加入回收率为96%~104%,RSD为0.7%~2.9%.结论 该方法的灵敏度高、重现性好,为小鼠脑脊液中氨基酸类神经递质的分析检测提供了一种新方法.
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RP-HPLC测定不同地区、不同采集期桑叶中1-脱氧野尻霉素
桑叶异名铁扇子,为桑科植物桑Morus alba L.的干燥叶[1],始载于<神农本草经>,味苦、甘,性寒,归肺、肝经,具有祛风清热、凉血、明目等功效,用于风热感冒、肺热燥咳、头晕头疼、目赤昏花等症;历代中医药书籍中记载桑叶能够治疗消渴症,近代医家也常将桑叶用于糖尿病,且取得满意疗效.现代医学研究证明桑叶有效成分之一多羟基生物碱具有降低血糖等作用[2,3].1-脱氧野尻霉素(1-DNJ)是桑叶中的一种生物碱,其作为α-葡萄糖苷酶的抑制剂,具有降血糖、抗病毒、抗肿瘤转移等作用[4~6].目前,1-DNJ主要是采用硅烷衍生化后用GC-MS法鉴定其结构[7],因其分子结构中缺少发色团,所以很难采用HPLC法直接测定.本实验采用荧光试剂9-芴基氯甲酸甲酯与1-DNJ柱前衍生,然后用HPLC法进行含量测定,取得了满意的效果.本方法准确、灵敏度高,可用于桑叶中1-脱氧野尻霉素的定量分析.
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一种改良的骨髓染色体制备与G显带方法
目前制备骨髓染色体方法主要有直接法、短期培养法和同步化法.同步化法操作技术要求高、分裂指数低,不易推广[1].随着间期荧光原位杂交技术及比较基因组杂交技术应用于白血病的研究,拓展了染色体分析的范围,提高了识别异常的能力,但因荧光试剂和检测设备昂贵,尚难广泛应用于临床.我们介绍一种改良的骨髓染色体制备与G显带方法.我们应用该方法对150例恶性血液病患者进行骨髓染色体检查,获得了满意效果.现将具体方法介绍如下.
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新型荧光试剂可检测出微小卵巢肿瘤
日本东京大学等机构研究人员在英国《自然?通讯》杂志上报告说,他们开发出了一种新型荧光试剂,在卵巢癌诊断中可检测出1毫米以下的微小肿瘤,有助提高卵巢癌手术的效果。
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用光学双标测技术探讨缺血-再灌注诱发心律失常发生机制
在多种心脏疾病包括心肌缺血、室颤及房颤等疾病中,活动电位、细胞内钙离子浓度、传导速度及活动电位期间都会发生改变。利用电压敏感染料和钙离子荧光试剂即光学标测技术可以无损伤、多位点同时记录离体心脏活动电位和细胞内钙离子浓度。本研究主要是在离体大鼠心脏上同时灌注电压敏感染料RH237(激发波长540 nm/发射波长585 nm)和钙离子荧光试剂Rhod 2-AM (激发波长540 nm/发射波长585 nm)。为了降低运动伪影,对心脏灌流blebbistatin之后,用2个CMOS相机实时记录心脏活动电位和钙离子浓度变化,然后停止灌流,诱发心脏整体缺血模型之后进行再灌注,同时记录心脏缺血期间及缺血再灌注诱发室颤时的活动电位、传导速度及钙离子浓度变化。结果表明,用RH237和Rhod 2-AM可以同时记录心脏表面活动电位和钙离子浓度,两种荧光试剂RH237与Rhod 2-AM无交叉影响。该方法是研究心律失常发生机制的强有力工具。