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酒制丹参、大黄对大鼠血液流变学影响的研究
丹参为常用中药，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦之功，主要用于月经不调、经闭痛经、瘕积聚、胸腹刺痛、热痹痉痛、疮疡肿痛、心烦不眠、肝脾肿大、心绞痛等证。常用酒炙，目的是增强活血作用。大黄具有泻热通肠、凉血解毒、祛瘀通经之功，主要用于实热便秘、积滞腹痛等证，酒炖后泻下缓和，增强活血祛瘀作用。为探讨两药酒炙后是否增强活血祛瘀作用，对其进行了活血祛瘀（包括血液流变学、血小板功能、微循环、离体心脏灌流等）的试验。本实验根据血瘀证患者血液流变性具有粘、浓、凝、聚的特性及“暴怒“、“寒邪“致血瘀的机理，给大鼠注射大剂量肾上腺素（Adr），再以冰水浸泡，二者综合作用可迅速复制出血瘀模型[1]。因血瘀模型形成较迅速，故采用先给药7 d，待中药作用出现时，再造模，观察其预防性实验效果。
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肾上腺髓质素对心功能的保护作用及机制
血浆肾上腺髓质素(Adm)对心功能及对肌浆网(SR)Ca2+摄取和释放的影响.本研究探讨Adm对心肌损伤的保护作用及机制.一、材料与方法1.ISO心肌坏死模型制备:雄性Wistar大鼠按Rona法[1]制作ISO心肌坏死模型.模型动物与对照动物各24只.2.离体心脏灌流与实验分组:摘取心脏挂于Langendorff灌流装置上,持续灌流60 min.记录左心室内压大变化速率(LV±dp/dt max)和平均冠状动脉灌流量(CPF)及灌流液LDH活性.将对照心脏随机等分为Adm组(灌流液中加Adm)和对照组(不加Adm),模型心脏随机等分ISO+Adm组(加Adm)与ISO组(不加Adm),n=12,灌流液Adm浓度为5×10-5 mol/L.3.心肌SR膜制备与鉴定:按Osada方法[2]制备心肌细胞SR膜.为提取足够的SR膜,将各组内灌流后的2个左心室合为1例,n=6.测定标志酶活性,以鉴定SR膜纯度.4.心肌SR钙摄取与释放量测定:参照文献[2].5.统计学处理:实验结果以±s表示,以组间t检验和配对资料t检验进行显著性检验.
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银茶胶囊心血管作用的实验研究
目的观察银荼胶囊对实验性动物心肌缺血及血小板聚集性的影响.方法自制银茶胶囊对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血、离体豚鼠心脏灌流以及血小板聚集性的测定试验.结果与结论银茶胶囊可拮抗垂体后叶素造成的心肌缺血,减少结扎冠状动脉造成的缺血区和心肌梗死范围,对ADP诱导的血小板聚集有显著的抑制作用.
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大鼠和豚鼠离体心脏起搏及表面电图记录电极的制作和应用
离体心脏灌流方法在生理、病理生理及药理学研究中已得到广泛的应用,为了便于在研究中多方面获得心电活动的信息,本室研制了大鼠和豚鼠离体心脏起搏及表面电图记录电极[1,2],此电极使用简单方便,组织损伤小,性能稳定.
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一种小动物离体心脏的电生理设备使用方法
随着膜片钳的出现,现代电生理有了突飞猛进的进展,许多新的通道被发现,但仅局限于细胞水平的研究,细胞与细胞间的电活动及细胞连接之间的研究不能完全在单细胞研究中解决;在体大鼠心脏的电生理研究,国内外文章较多,但因自主神经、呼吸的影响,难以分辨实验药物的具体作用位点:离体大鼠心脏灌流的电生理方法,可以在去除自主神经等影响下,单独观察药物、压力作用对心脏的作用.
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离体蛙心灌流实验方法的比较
目的 比较和评价两种蛙心灌流实验方法 的应用和效果.方法分别采取单管法和双管法制备牛蛙心脏灌流标本,观察和分析两种方法在标本制备时间、操作过程中对主动脉瓣的损伤、出现血液凝固的机率等方面的差异.结果 与单管离体蛙心灌流实验方法比较,采用新的操作方法实验标本制备时间缩短,降低了主动脉瓣损伤,凝血出现的机率降低,为接下来实验项目的顺利进行提供了活性较好的蛙心.同时双管法可直观地观察前后负荷、激素和电解质对心输出量的影响,单管法难以实现.结论 双管法对于单管法具有明显优势,更具有直观性,便于学生对理论知识更透彻地理解并掌握.
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丹瓜方对糖尿病大鼠离体心脏垂体后叶素所致心肌缺血模型的影响
目的:观察中药复方丹瓜方对高脂糖尿病大鼠离体心脏的垂体后叶素所致心肌缺血模型的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:选取SD大鼠,随机分出正常组大鼠,其余大鼠经糖尿病造模后,随机分为模型组、糖脉康组及丹瓜方低、中、高剂量组.干预12周后采用Langendorff恒流灌流装置及加有垂体后叶素的K-H液灌注离体心脏,分别观察并记录各时间段的冠脉流量、心率及心肌收缩幅度.结果:与正常组相比,中、高剂量组第30分钟心肌收缩幅度均升高(P＜0.05);与高剂量组相比,低剂量组和模型组第10分钟心率均降低(P＜0.05),低剂量组、模型组及正常组第30分钟心率均降低(P＜0.05);与中剂量相比,正常组及模型组第15分钟心肌收缩幅度均下降(P＜0.05或P＜0.01).结论:丹瓜方对糖尿病缺血缺氧心肌有一定的保护作用.
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一套研究机械电反馈的心室压力钳系统
在心脏机械电反馈的研究中准确控制机械刺激是非常重要的.本研究室构建了一套适用于离体家兔心脏的心室压力钳系统.该系统通过计算机控制压力钳,不仅能模拟正常生理条件下左心室的压力波形,还能在心室活动周期的特定时相、以适当波形对心室施加机械刺激.该系统集心脏灌流与起搏、表面心电图记录、单相动作电位记录、心室压力钳制与测定等多种功能于一体,特别适用于器官水平上观察机械电反馈现象并探讨其机制.
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巯基修饰剂对硫化氢的离体心脏灌流效应的影响
目的 观察巯基氧化剂及还原剂对大鼠离体心脏心功能的影响,以探讨巯基氧化剂二酰胺(diamide)及还原剂二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol,DTT)对心肌活动的调节意义,并观察其对硫化氢的离体心脏灌流效应的影响.方法 应用Langendorff灌流大鼠离体心脏,用生理浓度NaHS(100 μmol·L-1) 持续灌流20 min ,测量心率(HR) 、左室内压差(△LVP=左室收缩压-左室舒张压) 、左室内压变化速率(±dp/dtmax) 、冠脉灌流量(CPF)等指标;分别应用Diamide及DTT预灌流,后给予生理剂量NaHS灌流,观察其是否可以阻断NaHS的效应.结果 生理剂量NaHS持续灌流20 min内,可以明显抑制±dp/dtmax及△LVP(P<0.05) ,而对HR、CPF几乎没有影响.巯基氧化剂二酰胺可以大部分阻断H2S的心脏功能负性调节效应,而经巯基还原剂DTT灌流后,H2S可以发挥负性调节作用.结论内源性H2S可能通过作用于心肌组织蛋白质中Cys-SH位点,产生心肌的负性调节作用.
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离体兔心脏Langendorff逆向流下室颤与选择性心室肌电隔离
目的:研究以选择性射频消融形成心室肌电隔离区域,分析其电生理效应、室颤诱导能力,并判断该区域是否为维系心律失常、室颤存在的必要条件.方法:以单管法制备离体兔心脏逆行Langendorff灌流模型计20例.按射频消融部位分为4组(n=5),经导管作V型线性消融以形成心室肌电隔离.心室肌射频消融前后分别记录分析室颤的电生理特征和心室肌电隔离区域内外的诱导能力.结果:各组离体心脏心室肌射频消融厚度与环射频消融区域范围所占心脏表面积百分比相似(P>0.05).仅第4组3例形成环消融区内完全电隔离;其余形成环消融区内部分电隔离.3例完全电隔离者中,均不能在环消融区内诱发出室颤(与基线相比P<0.05);而除1例外,其余均可在环消融隔离区外起搏刺激诱发出室颤(与基线相比P>0.05).在部分电隔离者中,环消融区内只诱发出非持续性室颤;环消融隔离区外均可起搏刺激诱发出室颤(与基线相比P>0.05).结论:离体兔心脏Langendorff灌流模型选择性心肌电隔离试验显示完全或部分电隔离可以避免在这些区域内诱导室颤或持续性室颤,但不能避免在残留心肌中诱导室颤.实验所选各心肌区域不是维系室颤存在的必要条件.
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两种离体心脏灌注模型全心缺血前后左室功能的比较
本实验旨在观察Langendorff和工作心脏两种模型下离体大鼠心肌缺血-再灌注损伤前后左心室功能的变化及其差异,为模型的选择提供依据.一、材料与方法1.动物与分组:雄性健康SD大鼠24只(第二军医大学实验动物中心提供),体重310～450*!g.随机分成2组,每组12只大鼠,Ⅰ组为Langendorff灌流组,Ⅱ组为工作心脏灌流组.
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同步监测蟾蜍心脏机械和电活动简便而有效的方法
目的:通过灌流蟾蜍离体原位自发性搏动心脏,同步监测心输出量、心肌收缩力和心电图的变化,为研究心脏活动探索简便、有效和经济的实验方法.方法:在离体原位心脏左主动脉和后腔静脉插管回流,记录心输出量;在心尖部连接张力换能器,肢体皮下插入针状电极,利用BL-420S生物机能实验系统监测心肌舒缩张力和标准肢体II导联心电图.通过灌注β受体激动药异丙肾上腺素和其拮抗药普萘洛尔,观察各参数的变化,证实该实验方法的可行性.结果:在灌注任氏液的条件下,能够很好地监测到心脏舒缩张力和心输出量,以及心电图PR间期、QT间期、QRS波群时间和电压,适于分析二者之间的相关性.与给药前相比较,灌注10-5~10-4 g/L异丙肾上腺素显著增加了心输出量和心肌舒缩幅度,缩短了心电图PR间期,延长了QT间期(P<0.05,P<0.01).灌注普萘洛尔能够明显拮抗异丙肾上腺素的强心作用.结论:本实验方法适于同时监测蟾蜍心脏的收缩能力和心电图.
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离体蛙心灌流实验方法的比较研究
目的:比较和评价两种离体蟾蜍心脏灌流实验方法的应用及效果.方法:分别采用单管法和双管法制备离体蟾蜍心脏灌流标本,观察和分析两种方法在心脏插管所需时间、从处死动物到心脏离体所用时间、离体后心脏存活时间、操作中动脉瓣受损率及心律失常发生率等方面的差异.结果:单管法与双管法相比较,二者在心脏离体所需时间上无明显差别.使用双管法对心脏和动脉瓣受损率及心律失常发生率都明显低于单管法,心脏离体后的存活时间也较单管法长.单管法优点是心脏插管所用时间较双管法短.另外,双管法还可用于测定回心血量及心脏前、后负荷改变对心输出量的影响的研究,而单管法则不能实现这些功能.结论:在离体心脏研究实验中采用双管法明显优于单管法.
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用光学双标测技术探讨缺血－再灌注诱发心律失常发生机制
在多种心脏疾病包括心肌缺血、室颤及房颤等疾病中，活动电位、细胞内钙离子浓度、传导速度及活动电位期间都会发生改变。利用电压敏感染料和钙离子荧光试剂即光学标测技术可以无损伤、多位点同时记录离体心脏活动电位和细胞内钙离子浓度。本研究主要是在离体大鼠心脏上同时灌注电压敏感染料RH237（激发波长540 nm／发射波长585 nm）和钙离子荧光试剂Rhod 2－AM （激发波长540 nm／发射波长585 nm）。为了降低运动伪影，对心脏灌流blebbistatin之后，用2个CMOS相机实时记录心脏活动电位和钙离子浓度变化，然后停止灌流，诱发心脏整体缺血模型之后进行再灌注，同时记录心脏缺血期间及缺血再灌注诱发室颤时的活动电位、传导速度及钙离子浓度变化。结果表明，用RH237和Rhod 2－AM可以同时记录心脏表面活动电位和钙离子浓度，两种荧光试剂RH237与Rhod 2－AM无交叉影响。该方法是研究心律失常发生机制的强有力工具。
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冠脉通胶囊对离体豚鼠心脏灌流及大鼠心肌缺血的影响
实验材料动物:豚鼠,体重300g～400g,雌雄兼用,由昆明医学院动物科提供.
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介绍一种成年兔心肌细胞的分离与培养方法
详细介绍了成年兔心肌细胞的分离方法(胶原酶二步灌流法)以及分离后的心肌细胞的培养.根据实践经验,强调了灌流失败的主要原因是灌流管道末端插入过深以及胶原酶的用量不适.同时提出在整个灌流和细胞制备过程中,要严格控制灌流液及胶原酶液的pH为7.35～7.45,保持灌流液温度在37℃,以减少细胞的损伤和死亡.还提醒读者,同一种胶原酶可因生产批号不同对其用量及分离效果产生很大影响.
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成熟心肌细胞的培养技术
成熟心肌细胞的培养,首先要成功地无菌分离成熟的心肌细胞,这比单纯地分离成熟心肌细胞或单纯地培养胚胎期和新生期心肌细胞较困难.一般可作典型的Langandorff装置,配合无菌操作要求来得到用于培养的无菌成熟心肌细胞.实验动物等都经消毒灭菌,分离仪器保存在分层的通风橱中,以免在分离过程上空气传播的污染物污染溶液.其它预防污染的方法有:①用70%酒精彻底清洗分离装置,用无菌去离子水冲洗,在心脏灌流之前至少要进行两次冲洗;②在即将开始分离之前,对易于拆卸的装置进行灭菌,然后重新装好.分离用灌流液、酶液、保存液及培养液均用纯水和高浓度试剂制备,并经过常规灭菌.所有器械及操作均需无菌,若培养物遭受微生物感染,培养基中的pH平衡也会破坏,还可能产生对心肌细胞有害的活性物质.如细菌感染,可向培养基中加入抗生素,但由于真菌对心肌细胞的高度毒性,处理真菌或酵母污染,应以预防为主.
