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NADPH氧化酶在TNF-α诱导HUVEC HO-1表达中的作用
目的探讨NADPH氧化酶来源的活性氧(ROS)在TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血红素氧化酶1(HO-1)表达中的作用.方法用小分子RNA干扰(siRNA)技术消除HUVEC的NADPH氧化酶p47phox亚基,用分子探针2,7-DCF测定细胞内ROS的产生量以及用RT-PCR测定HO-1 mRNA的表达.结果TNF-α(200 U/mL)作用24 h后,HUVEC中ROS的产生量增加了138%,细胞内HO-1 mRNA表达较对照组增加146.5%;转染p47phoxsiRNA后,细胞内NADPH氧化酶p47phox亚基的mRNA表达消失,ROS的产生量降低至对照组水平,而HO-1 mRNA的表达水平降低约54%.结论TNF-α刺激后,HUVEC内产生的ROS主要来源于NADPH氧化酶的活化,但ROS仅部分介导了TNF-α对HO-1基因表达的诱导作用.
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SM22α通过p47phox调控足细胞氧化应激的研究
在足细胞凋亡的众多原因中,氧化应激是足细胞凋亡发生的基质,是肾脏病进展的重要特征.足细胞凋亡时,氧化应激的确切机制及信号通路尚不完全明确. 目的探讨平滑肌22 α(smooth muscle 22 alpha,SM22 α)通过phospho-p47phox(p47phox)调控血管紧张素Ⅱ (Angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导的足细胞的氧化应激.方法①通过实时定量PCR(quantitative real time-polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测足细胞在正常和AngⅡ刺激下,SM22 α、p47pphox等蛋白的表达情况.②应用Western Blot技术观察足细胞在正常和Ang Ⅱ刺激下SM22 α、p47phox表达变化.③敲减SM22 α,检测p47phox等的表达情况.④SM22 α的磷酸化p47phox的表达情况.结果①Ang Ⅱ诱导下,足细胞的SM22α的mRNA表达显著下调(t12h=2.215,P2h=0.041),p479phox的mRNA表达显著升高(t12h=3.955,P2h=0.025).②AngⅡ刺激下,SM22α表达下调(t12hh=2.215,P12h=0.041),加速了足细胞氧化应激的发生(12小时的时候达到高峰,t12h-DHF=2.547,P12HDHF=0.042,t12h.BA=3.689,P2h-TBA=0.022). 结论 AngⅡ诱导了SM22α功能失调,SM22α磷酸化后活化p47phhax,揭示了SM22α在足细胞的氧化应激中起到了重要作用.
关键词： 血管紧张素Ⅱ 足细胞 血管平滑肌22alpha 蛋白尿 p47phox -
P47phox基因C923T多态性与脑梗死的相关性研究及其对血脂的影响
目的 探讨P47phox基因第10外显子C923T(Ala308Val)多态性与脑梗死的关系及其对血脂的影响.方法 采用PCR-单链构象多态技术和DNA直接测序法检测110例脑梗死患者、10个脑梗死家系成员和100名健康对照者的P47phox基因第10外显子C923T多态性;酶法测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),免疫比浊法测定apoA-I及apoB100,酶联免疫吸附法测定脂蛋白a血清水平.结果 P47phox基因第10外显子C923T多态存在CC、CT、TT三种基因型,脑梗死组及其各亚组C923T多态基因频率分布与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);脑梗死组和对照组CT基因型血清TG水平均明显高于CC基因型(P＜0.05).结论 P47phox基因C923T多态性可能与脑梗死的易患性无关,但与血脂代谢有一定相关.
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姜黄素对鱼藤酮诱导的黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用
目的：观察姜黄素对由鱼藤酮诱导的慢性帕金森病大鼠模型黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法2014年12月—2015年5月，选取清洁级雄性 SD 大鼠80只按随机区组法分为溶剂对照组、姜黄素组、鱼藤酮组、治疗组，每组20只。采用脑切片免疫组化染色法检测大鼠脑黑质区酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞数，Western blotting 法检测大鼠脑黑质区沉默信息调节因子3（SIRT3）、P47phox 表达水平，流式细胞仪检测大鼠脑黑质区活性氧（ROS）水平。结果4组大鼠脑黑质区 TH 阳性细胞数比较，差异有统计学意义（ P <0.05）。鱼藤酮组大鼠脑黑质区 TH 阳性细胞数低于溶剂对照组、姜黄素组（P <0.05）；治疗组大鼠脑黑质区 TH 阳性细胞数低于溶剂对照组、姜黄素组，高于鱼藤酮组（P <0.05）。4组大鼠脑黑质区 SIRT3、P47phox 表达水平比较，差异均有统计学意义（P <0.05）。鱼藤酮组脑黑质区 SIRT3表达水平低于溶剂对照组、姜黄素组（P <0.05）；治疗组脑黑质区 SIRT3表达水平低于溶剂对照组、姜黄素组，高于鱼藤酮组（P <0.05）。鱼藤酮组脑黑质区 P47phox 表达水平高于溶剂对照组、姜黄素组（ P <0.05）；治疗组脑黑质区 P47phox 表达水平高于溶剂对照组、姜黄素组，低于鱼藤酮组（ P <0.05）。4组大鼠脑黑质区 ROS 水平比较，差异有统计学意义（P <0.05）。鱼藤酮组大鼠脑黑质区 ROS 水平高于溶剂对照组、姜黄素组（P <0.05）；治疗组大鼠脑黑质区 ROS 水平高于溶剂对照组、姜黄素组，低于鱼藤酮组（ P <0.05）。结论姜黄素可有效拮抗鱼藤酮诱导的慢性帕金森病大鼠多巴胺能神经元损伤，其机制可能与姜黄素通过促进SIRT3的表达清除小胶质细胞源性 ROS 有关。
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葡萄籽原花青素对自发性高血压大鼠左室重塑和氧化应激的影响
目的 观察葡萄籽原花青素(GSP)对自发性高血压大鼠(SHR)左室重塑和氧化应激的影响.方法 8周龄雄性SHR 24只随机分成4组(每组6只):SHR组、GSP低剂量组(50 mg·kg-1·d-1)和GSP高剂量组(200 mg·kg-1·d-1)及卡托普利组(30 mg·kg-1·d-1).6只同龄雄性Wistar-Kyoto大鼠设为对照组.治疗8 w后,测定尾动脉收缩压(SBP)、全心重量指数(HW/BW)和左心室重量指数(LVW/BW);生化法检测左室心肌组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和抑制羟自由基(OH·)能力;HE和Masson染色下观察心肌细胞形态和胶原分布,并测定心肌细胞横截面积(CSA)与心肌胶原容积分数(CVF);Western印迹法检测左室心肌组织p47phox蛋白表达.结果 GSP能显著降低SHR的SBP(P<0.01),改善左室重塑参数、减少心肌组织MDA含量及p47phox蛋白表达(P<0.05),提高SOD活性及抑制OH·能力(P<0.05),GSP高剂量组作用尤为显著(P<0.01).结论 GSP对SHR左室重塑有减轻作用,可能与降低SBP、抑制氧化应激及下调p47phox蛋白表达有关.
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高糖刺激下PKC/NADPH氧化应激途径对内皮细胞活性氧生成的影响及其机制探讨
目的:探讨高糖刺激下PKC/NADPH氧化应激途径对内皮细胞活性氧生成的影响.方法:实验分为正常对照组、NaOH对照组、DMSO对照组、20 mM葡萄糖处理4小时组(高糖组)、1 mol佛波酯预处理0.5小时再加入20 mM葡萄糖处理组(佛波酯组)和4 mol金丝桃素预处理0.5小时再加入20 mM葡萄糖处理组(金丝桃素组);Ⅱ型胶原酶消化法分离人脐静脉内皮细胞;流式细胞术检测细胞内活性氧;免疫荧光检测内皮细胞Ⅷ因子和NADPH氧化酶亚基p47phox定位.结果:①与正常对照组相比,高糖组细胞内活性氧增高(P＜0.05,n=3),与正常对照组和高糖组相比,佛波酯组HUVECs内活性氧的产生显著增加(P＜0.05,n=3),与正常对照组和高糖组相比,金丝桃素组HUVECs内活性氧的产生明显减少(P＜0.05,n=3);②正常对照组和金丝桃素组中细胞NADPH氧化酶亚基p47phox主要位于胞浆,而佛波酯组和高耱组的NADPH氧化酶亚基p47phox位于胞膜.结论:高糖通过PKC信号通路调节内皮细胞NADPH氧化酶亚基p47phox的移位从而增加细胞内活性氧的生成.
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氯胺酮抑制人离体中性粒细胞释放超氧阴离子的机制
目的 研究氯胺酮的异构体S(+)氯胺酮[S(+)-Ket]和R(-)氯胺酮[R(-)-Ket]对中性粒细胞释放超氧阴离子的影响及机制.方法 细胞色素C还原法测定3种刺激剂介导的中性粒细胞超氧阴离子释放量.用荧光分光法检测中性粒细胞内钙的水平.用Western Blot法检测中性粒细胞蛋白质p47phox磷酸化水平.结果 S(+)-Ket和R(-)-Ket可抑制N-甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,fMLP)介导的中性粒细胞释放超氧阴离子(P＜0.01).S(+)-Ket可抑制佛波豆蔻醚乙酸盐(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)介导的中性粒细胞释放超氧阴离子和钙离子的增加,而R(-)-Ket可轻度增加PMA介导的中性粒细胞释放超氧阴离子和促进钙离子的增加.S(+)-Ket抑制PMA介导中性粒细胞蛋白质p47phox磷酸化,而R(-)-Ket增强上述作用;钙螯合剂EGTA可取消R(-)-Ket对PMA介导中性粒细胞蛋白质p47phox磷酸化的抑制作用.结论 S(+)-Ket通过PKC-钙信息通道,抑制NADPH氧化酶p47phox, 抑制超氧阴离子的产生.
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玉夏胶囊对自发性高血压大鼠心肌损伤的保护作用
目的：观察玉夏胶囊对自发性高血压大鼠（SHR）心肌iNOS、NADPH氧化酶亚单位p22phox和p47phox表达的影响，探讨玉夏胶囊对SHR心肌损伤的保护作用机制。方法：14周龄雄性SHR 28只，随机分为SHR模型组[0．5％羧甲基纤维素钠（CMC-Na）5 mL／kg]、玉夏胶囊高、中、低（0．6、0．3、0．15 g／kg）剂量组，每组7只。另设WKY（0．5％CMC-Na 5 mL／kg）正常对照组7只。各组每日灌胃1次，连续10周，于给药前和末次给药后尾袖法测定血压；比色法测定心肌组织SOD、MDA、T-AOC及H2 O2的含量；硝酸还原酶法测定心肌组织NO含量；免疫组化法表达心肌诱导型一氧化氮合酶（ iNOS）阳性细胞；Western Blot表达心肌组织iNOS、p22phox及p47phox蛋白。结果：玉夏胶囊随着剂量的增加，能显著降低SHR的血压（P＜0．05或P＜0．01），减少 SHR心肌组织MDA、H2O2及NO的含量（P＜0．05或P＜0．01），提高SOD和T-AOC的含量（P＜0．05或P＜0．01），抑制心肌iNOS阳性细胞表达，下调心肌iNOS、p22phox和p47phox蛋白（P＜0．05或P＜0．01）。结论：玉夏胶囊具有抗SHR心肌氧化应激的作用，其机制可能与下调心肌iNOS及p22phox、p47phox所介导的氧化应激损伤有关。
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p47phox介导早产儿氧暴露后体内活性氧簇产生的机制
目的 探讨早产儿氧暴露后,患儿外周血单个核细胞(PBMCs)内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚单位p47phox调节细胞内活性氧(ROS)升高的机制.方法 胎龄＜32周需吸氧早产儿根据吸入氧体积分数(FiO2)不同分为3组:FiO2＜30％为低氧组、FiO2在30％～ 40％为中氧组、FiO2＞ 40％为高氧组.同期未吸氧的＜32周早产儿为对照组.氧疗48 h后,各组经桡动脉采血3 mL,分离PBMCs及血清,应用激光共聚焦显微镜检测PBMCs内ROS生成量,硫代巴比妥酸比色法检测血清丙二醛(MDA)水平,免疫荧光检测p47phox在细胞内定位及p47phox的活化率.结果 早产儿氧暴露后,随着FiO2的升高,ROS与MDA逐渐升高,p47phox由胞质向胞膜移位的细胞数增多,p47phox的移位率也在增加;与对照组相比,余3组ROS明显升高,差异有统计学意义(q =4.48、6.5、16.22,P均＜0.05);MDA水平显著增加,差异有统计学意义(q=5.08、8.22、12.76,P均＜0.05);p47phox的活化率比较差异也具有显著性差异(x2=134.008,P＜0.05);与中氧组相比,高氧组ROS和MDA显著升高,差异有统计学意义(q=15.03、4.53,P均＜0.05);p47phox的活化率明显增加,差异有统计学意义(x2=19.26,P＜0.05).结论 早产儿氧暴露后,p47phox可能通过向胞膜移位来调节PBMCs内NADPH氧化酶源性活性氧升高.
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黄芪多糖影响糖尿病大鼠心肌氧化应激损伤的分子机制
目的:探讨黄芪多糖通过调节还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶p22phox和p47phox亚基表达影响糖尿病大鼠心肌氧化应激损伤的分子机制.方法:腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病大鼠模型,48只SD大鼠分为对照组、糖尿病组、黄芪多糖小剂量(200mg/kg)干预组及黄芪多糖大剂量(700 mg/kg)干预组,12周后称重并计算心体比(H/B)和左室重量指数(LVMI),应用流式细胞仪检测心肌组织中活性氧(ROS)的表达,生化法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活性和心肌细胞GSH含量,Western blot及Real time PCR检测心肌组织中P22Phox、p47phox、核因子κb(NF-κB)、连接蛋白(FN)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)和p-Akt的蛋白及mRNA表达.结果:与对照组相比,糖尿病组H/B、LVMI、ROS水平、p22Phox、p47phox、NF-κB、FN、ColⅢ和p-Akt表达显著升高,SOD、GSH-px和心肌细胞中GSH含量显著降低；黄芪多糖干预后,大鼠心肌H/B、LVMI、ROS水平、p22Phox、p47phox、NF-κB、FN、ColⅢ和p-Akt表达显著低于糖尿病组,SOD、GSH-px和心肌细胞中GSH含量显著升高,且呈剂量依赖性.结论:黄芪多糖干预可减轻糖尿病大鼠心肌病变.
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p47phox在高脂血症白兔阴茎海绵体平滑肌中的表达及其意义
目的 观察p47phox在高脂血症白兔阴茎海绵体平滑肌中的表达及意义.方法 40只4月龄雄性新西兰白兔随机分为实验组20只(高脂饲料喂养8周)和对照组20只.喂养前后检测血胆固醇和体重,并应用Real-time PCR和Western blot技术检测阴茎海绵体平滑肌中p47phox的表达.结果实验组新西兰白兔的体重和血总胆固醇水平明显高于喂养前(均P＜0.01);Real-time PCR和 Western blot检测结果显示p47phox在高脂血症白兔阴茎海绵体平滑肌组织中表达较对照组增高(均P＜0.05).结论 p47phox在高脂血症诱导的白兔阴茎勃起功能障碍中可能发挥重要作用.
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p47phox基因第6外显子多态性与长沙市汉族人群脑出血的关联研究
目的 探讨p47ox基因第6外显子A566G(Asn166Asp)多态性与湖南省长沙市汉族人群脑出血的关系.方法 采用PCR-单链构象多态技术和DNA直接测序法检测湖南省长沙市汉族人群110例脑出血患者、10个脑出血家系成员110例和100名健康对照者的p47phox基因第6外显子A566G多态性,同时检测血脂水平.结果 脑出血组及脑出血家系组A566G(Asn166Asp)多态基因频率分布与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).脑出血家系组中患病组和未患病组及脑出血组的A566G多态分布与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).脑出血组中各基因型血脂水平与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 湖南省长沙市汉族人群p47phox基因A566G多态性可能与脑出血的易患性无关.
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早产儿不同浓度氧暴露后外周血单个核细胞内p47phox蛋白与活性氧产生的相关性研究
目的 观察早产儿不同浓度氧暴露后,外周血单个核细胞(PBMCs)内p47phox蛋白变化与活性氧(ROS)产生的相关性.方法 32周以下早产儿不同浓度氧疗48 h后,分离PBMCs,检测PBMCs内p47phox的定位情况、p47phox蛋白表达量及ROS的生成量.结果 p47phox随着吸氧浓度升高向细胞膜移位增加;p47phox的蛋白表达量及ROS生成量也随着吸氧浓度的升高而增加.结论 早产儿氧暴露后,p47phox可能通过更多的向胞膜移位,增加其表达量来引起ROS产生的增加.
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P47phx基因第4外显子多态性与湖南省汉族人群脑梗死的相关研究
目的 探讨P47p基因第4外显子G338A(Arg90His)和G457A(Thr129Thr)多态性与湖南省汉族人群脑梗死的相关性.方法 采用PCR-单链构象多态技术和DNA直接测序法检测湖南省汉族人群散发性脑梗死患者110例、10个脑梗死家系成员110例及100例健康对照组的P47p基因第4外显子G338A和G457A多态性.酶法测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),免疫比浊法测定apoA-Ⅰ及apoB100,ELISA法测定Lp(a)血清水平.结果p47phox基因第4外显子G338A多态存在GG、GA和AA3种基因型,脑梗死组及其各亚型组G338A多态A等位基因频率分布与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);G457A多态存在GG和GA两种基因型,脑梗死组及其各亚型组G457A多态基因频率分布与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);脑梗死组及其各亚型组血清TC、TG、LDL-c及Lp(a)水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);组内不同基因型间血脂、脂蛋白水平与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论p47phox基因G338A多态A等位基因可能是脑梗死,特别是有高血压病性和糖尿病性脑梗死患者的一个危险因素;G457A多态可能与脑梗死的发病无关.p47phox基因G338A和G457A多态性与血脂代谢可能有关.
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同型半胱氨酸对人离体嗜中性白细胞释放超氧阴离子的影响和机制
目的 用人离体嗜中性白细胞研究同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)对刺激剂介导的超氧阴离子释放和P47phox磷酸化的影响.方法 细胞色素C还原法测定3种刺激剂介导的嗜中性白细胞超氧阴离子释放量.用Western blot法检测嗜中性白细胞NADPH氧化酶P47phox的磷酸化.结果 Hcy呈浓度依赖性促进N-甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,fMLP)介导的嗜中性白细胞释放超氧阴离子,不影响佛渡豆蔻醚乙酸盐(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)和花生四烯酸(arachidonic acid,AA)介导的嗜中性白细胞释放超氧阴离子.酪氨酸激酶抑制剂5,7,45-三羟基异黄酮(genistein)可呈明显抑制fMLP介导的氧自由基产生,而蛋白激酶C抑制剂十字孢碱(staurosporine)仅有轻度抑制作用.Hcy刺激fMLP介导的嗜中性白细胞质因子P47phox磷酸化,与其对超氧阴离子释放的影响是一致的.结论 Hcy通过激活膜受体,激活P47phox磷酸化,促进中性白细胞释放超氧阴离子.
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大鼠局灶性脑缺血再灌注脑内p47phox表达变化的研究
目的 通过观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后p47phox基因在脑内表达动态变化,探讨p47phox在局灶性脑缺血再灌注后对脑缺血损害的作用及机制,可能为p47phox基因作为脑卒中的候选基因提供理论依据.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑缺血再灌注组和假手术组再灌后第1、3、6、12和24h和正常对照组p47phox基因在脑内的表达.结果 正常对照组和假手术组大鼠脑皮质内有少量p47phox mRNA表达,组内各时间点比较无统计学意义(P＞0.05);脑缺血再灌注组,缺血再灌注1 h后p47phoxmRNA表达增加,至3h达高峰(与假手术组和正常对照组相比差异显著,P＜0.01).结论 p47phox可能参与了脑缺血再灌注后损伤,并在其中发挥了重要作用.
关键词： 脑卒中 p47phox NAD(P)H氧化酶 缺血再灌注 -
山茱萸果核醇提物对大鼠肾性高血压及心肌肥厚的影响
目的:观察山茱萸果核甲醇提取物对大鼠肾性高血压及其所致心肌肥厚的作用及机制.方法:建立大鼠肾性高血压(2K2C)模型.将动物分为假手术组、模型组及山茱萸果核醇提物高、低剂量组,每组10只.术后4w进行药物处理,给药4w后测各组大鼠血压及左室体质量指数(LVM/BM)、心肌形态学变化；Western blot检测心肌组织中NAD(P)H氧化酶亚基P47phox、Nox4的表达情况.结果:模型组大鼠血压及LVM/BM显著高于假手术组,室内压大上升/下降速率显著下降；给予山茱萸果核醇提物后,各组大鼠血压及LVM/BM显著降低,室内压大上卜/下降速率显著升高,心肌细胞肥大及纤维化程度显著减弱；模型大鼠P47phox、Nox4的蛋白表达较假手术组显著增加,而山茱萸果核组大鼠左心室P47phox、NOX4蛋白表达显著下降,且呈剂量依赖性.结论:山茱萸果核醇提物具有显著降压作用,并能显著抑制肾性高血压大鼠心肌中NAD(P)H氧化酶亚基P47phox和Nox4的表达,这可能是山茱萸果核醇提物改善心脏功能,减缓心肌重构的基础.
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p47phox介导活性氧产生与疾病的关系
活性氧（reactive oxygen species）是指氧自由基和氧化作用较强的非自由基含氧产物。主要包括超氧阴离子（· O2－）、羟自由基（· O H ）、过氧化氢（H2 O2）和单线态氧（1 O2）等［1］。活性氧在机体的免疫过程和细胞信号转导中起着重要的作用。然而当活性氧过多积聚，超过抗氧化酶系统的清除能力，就会产生氧化应激。引发脂质过氧化反应损伤细胞膜、引起蛋白质变性、酶活性丧失等损害作用［2‐3］；诱导或加重心血管疾病、高血压、肿瘤、炎症及肺部疾病的发生和进展［4］。机体有多种酶体参与活性氧的生成，如烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ nico‐tinamide adenine dinucleotide phosphate ，NADPH ）氧化酶（NADPH oxidase ，NOX）、线粒体呼吸链复合酶、黄嘌呤氧化酶、细胞色素P450、一氧化氮合成酶等［1，3］。其中 NADPH氧化酶是体内活性氧生成的重要来源。而 p47phox 对于激活NADPH氧化酶起着至关重要的作用。本文主要从 p47phox介导活性氧产生及与疾病的关系方面的进展作一综述。
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人参皂甙Rbl对转化生长因子-β1诱导的肾小管上皮细胞p47phox的表达及细胞外基质的影响
目的 探讨人参皂甙Rbl(G-Rb1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞(NRK52E)氧化应激的作用及对细胞外基质(ECM)的影响.方法 将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组,10 ng/mL TGF-β1刺激组,不同剂量的G-Rb1干预组(在10 ng/mL TGF-β1基础上分别加入10 ng/mL、20 ng/mL、40 ng/mL G-Rb1),40 ng/mL G-Rb1组,100 nmol/L NADPH氧化酶抑制剂DPI组.采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;应用免疫组化技术、Western blot检测NADPH氧化酶亚单位p47phox的表达;实时荧光定量PCR(RT-PCR)、酶联免疫吸附法观察细胞外基质主要成分胶原I(Col-I)和纤维粘连蛋白(FN)的变化.结果 与正常对照组相比,TGF-βI可显著增强NRK52E细胞内ROS水平和p47phox的表达,ColI和FN的含量也显著增加(P<0.05).G-Rb1和DPI明显抑制了TGF-βI诱导的细胞内ROS的产生和p47phox 的表达,同时降低了Col-I和FN的水平(P<0.0S).结论 TGF-βI可以诱导NRK52E细胞ROS和p47phox水平的升高,刺激细胞外基质成分Col-I和FN的形成.G-Rb1呈剂量依赖性地抑制了TGF-βI刺激的NRKSZE细胞内的ROS水平的升高和细胞外基质的增加.其作用机制可能与降低p47phox的表达有关.
关键词： 人参皂甙Rb1 氧化应激 转化生长因子-β1细胞外基质 p47phox -
灯盏花素对糖尿病大鼠肾脏P47phox基因mRNA表达影响的实验研究
目的:探讨灯盏花素对SD大鼠糖尿病模型肾组织中p47phox基因mRNA表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为糖尿病模型(A)组、糖尿病灯盏花素治疗(B)组和正常对照(C)组,取其肾组织采用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法检测各组SD大鼠肾组织中p47phox基因的mRNA表达,并进行比较分析.结果:(1)对A组、B组和C组样本实时荧光定量PCRCT(cycle time)均数进行方差分析,差别有统计学意义(P＜0.05).2周时A组和B组肾组织中p47phox基因的mRNA表达分别是C组的1.92倍及1.87倍,6周时分别是C组的5.69倍及4.08倍.(2)与C组比,A组和B组的血肌酐、尿素氮和肾重/体重有升高.A组和B组相比,B组下降,相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:(1)糖尿病时肾脏p47phox基因的mRNA表达水平升高,氧化应激增强.(2)灯盏花素治疗降低肾脏p47phox基因的mRNA表达水平,抑制氧化应激.(3)灯盏花素治疗后糖尿病SD大鼠的血肌酐,尿素氮水平降低,肾重/体重降低.提示灯盏花素治疗能改善糖尿病SD大鼠肾脏功能,抑制肾脏肥大.
