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从NOX4与炎性因子角度探讨清热、活血组分联用治疗缺血性脑卒中火毒证大鼠脑组织损伤的机制
目的 从NOX4与炎性因子角度探讨清热、活血组分联用治疗缺血性脑卒中火毒证大鼠脑组织损伤的机制.方法 采用腹腔注射角叉菜胶复合线栓致大脑中动脉闭塞复制大鼠缺血性脑卒中火毒证模型.将SD大鼠随机分为8组:空白对照组(N组)、假手术组(S组)、模型组(缺血1.5h再灌注24 h,M组)、清热组分苦碟子注射液3.6 mL/kg组(A组)、活血组分血栓通注射液40 mg/kg组(B组)、苦碟子注射液1.8 mL/kg+血栓通注射液20 mg/kg组(C组)、苦碟子注射液1.8 mL/kg+血栓通注射液80 mg/kg组(D组)、苦碟子注射液7.2 mL/kg+血栓通注射液20 mg/kg组(E组).Longa5级评分法进行大鼠神经功能评分;TTC染色法检测大鼠脑梗死面积百分比;免疫组化法检测梗死侧大脑皮层中IL-1β、TNF-α的阳性细胞表达;Western Blot法检测梗死侧大脑皮层中NOX4蛋白表达情况.结果 神经功能评分示:S组未见神经功能缺损,M组神经功能缺损重;与M组相比,A组、B组神经功能损伤减轻(P＜0.05);与A组、B组相比,C组、E组神经功能缺损减轻,但差异无统计学意义(P＞0.05),D组神经功能缺损减轻为明显,差异有统计学意义(P＜0.05).TrC染色示:S组未见白色梗死灶,M组白色梗死区域明显;与M组相比,A组、B组白色梗死区域减少,梗死体积百分比减小(P＜0.05.P＜0.01);与A组、B组相比,C组、E组白色梗死区域减少,梗死体积百分比减小(P＜0.05),D组脑梗死体积百分比小(P＜0.01).免疫组化示:与S组相比,M组大脑皮层IL-1β及TNF-d阳性细胞数增多,黄色深染,凋亡细胞增多(P＜0.01);与M组相比,A组、B组IL-1β及TNF-oα阳性细胞数减少,颜色变浅;与A组、B组相比,C组、D组IL-1β阳性细胞表达量不同程度减少(P＜0.01),E组无明显差异(P＞0.05);与A组、B组相比,C组、D组、E组TNF-α阳性细胞表达量均不同程度减少(P＜0.01).Western Blot示:与S组相比,M组大鼠缺血侧大脑皮层中NOX4蛋白表达量显著增多(P＜0.01);与M组相比,A组、B组NOX4蛋白表达量均显著下降(P＜0.05,P＜0.01);与A组、B组相比,C组、D组、E组NOX4的蛋白表达量均不同程度下降(P＜0.05).结论 清热、活血组分联用可通过调节NOX4及炎性因子(IL-1β、TNF-α)的表达治疗缺血性脑卒中火毒证产生的脑组织损伤.
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芝麻素对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺血管重构的影响
目的:观察芝麻素(Ses)对野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压(PH)大鼠肺血管重构的影响.方法:雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠48只适应性喂养1周,随机分为正常对照组、MCT组、Ses低、高剂量组(50,100 mg·kg-1),每组12只.MCT(60 mg·kg-1)皮下注射诱导PH大鼠模型.连续给药4周后,右颈外静脉插管测定大鼠右心室收缩压(RVSP)、平均肺动脉压(mPAP).分离大鼠右心室(RV)、左心室+室间隔(LV+S)并称重,剥离大鼠胫骨并测量其长度,计算RV/(LV+S)及RV/胫骨长度的比值.HE染色观察肺小动脉病理学变化,Masson染色观察肺小动脉胶原沉积的变化.免疫组化检测肺动脉α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.比色法测定肺动脉总抗氧化能力(T-AOC)及丙二醛(MDA)含量.Real-time PCR和Western blot检测肺动脉collagen Ⅰ,NOX2及NOX4 mRNA和蛋白表达.结果:Ses连续给药4周后能明显降低MCT诱导的PH大鼠RVSP及mPAP,减轻RV/(LV+S)及RV/胫骨长度的比值,降低肺动脉α-SMA,collagen Ⅰ表达、减轻肺血管及右心室重构.同时,Ses还能明显抑制肺动脉NOX2及NOX4的表达,降低其MDA含量及提高T-AOC水平.结论:Ses能够缓解MCT诱导的PH大鼠肺血管重构,其机制可能与抑制NOX2及NOX4的表达、进而降低氧化应激损伤有关.
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红杉醇对2型糖尿病大鼠主动脉NOX4及eNOS表达的影响
观察红杉醇(sequoyitol,Seq)对2型糖尿病大鼠主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及NADPH氧化酶4 (NOX4)表达的影响.采用小剂量链脲佐菌素(STZ,35 mg·kg-1)加高脂高糖饮食诱导2型糖尿病动物模型,灌服Seq(12.5、25及50 mg·kg-1 ·d-1)治疗6周后,于末次给药后测定空腹血糖.使用离体主动脉环灌流法,观察主动脉环对乙酰胆碱和硝普钠的舒张反应,HE染色观察主动脉病理学变化,放射免疫法检测血清胰岛素水平；比色法测定主动脉总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量；real-time PCR、Westernblotting及免疫组化检测主动脉eNOS及NOX4 mRNA和蛋白表达.结果显示,红杉醇给药6周后能明显降低糖尿病大鼠空腹血糖,减轻胰岛素抵抗,改善主动脉内皮依赖性舒张功能,上调主动脉eNOS的表达,提高T-AOC及NO水平,降低NOX4的表达及MDA含量.上述结果表明,Seq可能通过下调NOX4表达、上调eNOS表达进而对糖尿病大鼠主动脉内皮功能损伤产生保护作用.
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柚皮苷抑制TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞的氧化应激和炎症反应
目的:探讨柚皮苷对TNF-α诱导的HUVECs损伤的保护作用及其可能的作用机制.方法:用TNF-α诱导HUVECs的氧化应激和炎症反应模型,采用流式细胞仪检测HUVECs中ROS表达水平;采用Western blot法检测Nox4,p22phox,ICAM-1,VCAM-1,Bcl-2和Caspase-3,-9的蛋白表达情况以及NF-κB与PI3K/Akt活性;采用Real time RT-PCR法检测Nox4,p22phox,ICAM-1,VCAM-1 mRNA的表达情况.结果:柚皮苷可以抑制TNF-α诱导的HUVECs中ROS的产生,Nox4,p22phox,ICAM-1和VCAM-1的mRNA及蛋白过表达,NF-κB通路的激活以及下调凋亡蛋白Caspcase-3,-9的表达;柚皮苷还可以上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达和减弱TNF-α对PI3K/Akt通路的抑制作用.结论:柚皮苷可以抑制TNF-α诱导的HUVECs的Nox4/NF-κB信号通路,激活PI3K/Akt信号通路,减弱TNF-α诱导的HUVECs的氧化应激和炎症反应.
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心脑疏通胶囊对心肌缺血的影响及机制初探
目的 探讨心脑舒通胶囊对异丙肾上腺素介导的心肌缺血的保护作用与其抑制NADPH氧化酶Nox2和Nox4的关系.方法 观察心脑舒通胶囊(XNST capsule)对异丙肾上腺素诱导的心肌缺血大鼠心电图,血清乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、左心室NADPH氧化酶Nox2和Nox4表达水平的影响.结果 同对照组比较,异丙肾上腺素(ISO)诱导的模型组大鼠心电图ST位移值(0.27±0.05比0.01±0.00,P＜0.05)和N-ST(9.63±0.37比0.47±0.08,P＜0.05)显著增加,血清中LDH[(1356.0±292.8)U/L比(640.0±145.3)U/L,P＜0.05)]、CK[(978.0±223.5)U/L比(470.0±113.7)U/L,P＜0.05]和MDA[(9.06±2.17)μmol/L比(5.40±1.78)μmol/L,P＜0.05]的蛋白水平增高,而血清中SOD蛋白水平明显减少[(71.0±12.8)U/ml比(107.0±16.7)U/ml,P＜0.05].与ISO模型组比较,心脑舒通胶囊治疗显著降低大鼠心电图ST位移值[0.16±0.04(低剂量组)比0.27±0.05,P＜0.05;0.13±0.03(高剂量组)比0.27±0.05,P＜0.05]和N-ST[4.70±0.42(低剂量组)比9.63±0.37,P＜0.05;3.83±0.28(高剂量组)比9.63±0.37,P＜0.05]以及血清中LDH[(938.0±275.9)U/L(低剂量组)比(1356.0±292.8)U/L,P＜0.05;(889.0±125.6)U/L(高剂量组)比(1356.0±292.8)U/L]、CK[(607.0±137.2)U/L(低剂量组)比(978.0±223.5)U/L,P＜0.05;(579.0±125.6)U/L(高剂量组)比(978.0±223.5)U/L,P＜0.05]和MDA[(6.60±1.92) μmol/L(低剂量组)比(9.06±2.17)μmol/L,P＜0.05;(6.20±1.63) μmol/L(高剂量组)比(9.06±2.17)μmol/L,P＜0.05]的蛋白表达水平,而心脑舒通胶囊治疗后大鼠血清中SOD蛋白水平升高[(89.0±13.9)U/ml(低剂量组)比(71.0±12.8)U/ml,P＜0.05;(94.0±15.3)U/ml(高剂量组)比(71.0±12.8)U/ml,P＜0.05].此外,心脑舒通胶囊可显著降低异丙肾上腺素诱导的心肌缺血大鼠左心室中NADPH氧化酶Nox2和Nox4的表达水平.结论 心脑舒通胶囊可显著改善异丙肾上腺素诱导的心肌缺血,其机制与其抑制NADPH氧化酶Nox2和Nox4介导的氧化应激有关,为心脑舒通胶囊的临床应用提供了进一步的理论依据和实验基础.
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吴茱萸次碱对肺动脉高压大鼠右心室重构的影响
目的:观察吴茱萸次碱(Rut)对野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压(PH)大鼠右心室重构的作用及机制.方法:SD大鼠48只适应性喂养一周,随机分为正常对照组、MCT组、MCT+Rut(20 mg/kg)及MCT+Rut(40 mg/kg)剂量组(n=12).MCT(60 mg/kg)皮下注射诱导PH大鼠模型.连续给药4周后,右颈外静脉插管测定大鼠右心室收缩压(RVSP)、平均肺动脉压(mPAP).分离大鼠右心室(RV)、左心室+室间隔(LV+S)并称重,剥离大鼠胫骨并测量其长度,计算RV/(LV+S)及RV/胫骨长度的比值.HE染色观察右心室病理学变化,Masson染色观察右心室胶原沉积的变化.比色法测定右心室总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量.Real time PCR、Western blot及免疫组化检测右心室NADPH氧化酶4(NOX4) mRNA和蛋白表达.结果:Rut连续给药4周后能明显降低MCT诱导的PH大鼠RVSP及mPAP,减轻RV/(LV+S)及RV重量/胫骨长度的比值,改善右心室病理变化,降低右心室胶原的沉积及collagen Ⅰ、collagenⅢ的表达,提高右心室T-AOC水平,降低右心室NOX4的表达及MDA含量.结论:Rut能够缓解野百合碱诱导的PH大鼠右心室重构,其机制可能与抑制NOX4的表达,进而降低氧化应激损伤有关.
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红杉醇对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞NOX4、eNOS表达的影响
目的:观察红杉醇(Seq)对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用及机制.方法:原代培养HUVECs,红杉醇(0.1,1,10 μmol/L)预处理1h后,30 mmol/L葡萄糖诱导内皮细胞损伤.5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,2'7'-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)免疫荧光法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,比色法检测细胞一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)及过氧化氢(H2O2)水平,real-time PCR和Western blot检测细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及NADPH氧化酶4(NOX4) mRNA和蛋白表达.结果:Seq预处理1h后能明显减轻高糖诱导的血管内皮细胞损伤,促进细胞增殖,降低胞内NOX4的表达及ROS、MDA及H2O2水平,上调eNOS的表达及NO水平.结论:Seq对高糖诱导的内皮细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能与其抗氧化、上调eNOS的表达有关.
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穿山龙多糖影响NADPH氧化酶/ROS信号通路抗H2O2诱导的HUVECs细胞损伤作用研究
目的 检测穿山龙多糖(RDNP)是否可以通过影响NADPH氧化酶/ROS信号通路对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤产生保护作用.方法 H2O2作用HUVECs 4 h造成损伤,分别给予25、50、100、200、400、800 μg/mL RDNP进行干预,选取适当浓度进行后续实验.采用MTT法测定细胞活力;试剂盒检测 LDH、MDA、SOD、T-AOC、GSH-Px、ROS水平;Western Bolt及 qRT-PCR法检测Nox4、p22phox的蛋白及mRNA表达.结果 加入50、100和200 μg/mL浓度的RDNP与H2O2模型组间相比,活力增加,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).因此选择50、100、200 μg/mL RDNP剂量组进行实验.不同浓度RDNP均可以显著改善H2O2损伤,使细胞形态逐渐趋于正常,以200 μg/mL RDNP给药组的效果为显著.RDNP可以降低H2O2损伤HUVECs模型中LDH、MDA及ROS的水平,并增强细胞内SOD、 GSH-Px、T-AOC活力;且从mRNA水平及蛋白水平抑制Nox4、p22phox的表达.结论 RDNP可以通过干扰NADPH氧化酶/ROS信号通路抑制H2O2造成的HUVECs氧化损伤,保护内皮细胞.
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枸杞多糖对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其抗氧化应激的机制研究
目的：探讨枸杞多糖（lycium barbarum polysaccharides，LBP）对缺血再灌脑损伤小鼠的保护作用及其可能的机制。方法通过颈总动脉栓线造成大脑中动脉缺血，缺血2 h 后将栓线拔出以实现大脑中动脉血流再灌注，形成小鼠短暂性大脑中动脉阻塞（transient middle cerebral artery occlusion，tMCAO）模型，观察 LBP（25 mg／kg，50 mg／kg和100 mg／kg）对小鼠脑梗死范围，脑含水量，神经症状的影响，采用 Westernblot 法检测缺血大脑皮质NOX4蛋白的表达，采用 DHE 染色法检测脑组织中 ROS 的生成，采用分光光度计检测缺血侧脑组织匀浆 SOD 活力，GSH－Px 活力，及 MDA 含量。结果LBP 对缺血再灌注小鼠神经症状有明显的改善作用，能明显降低脑梗死范围和脑含水量。 Westernblot 结果显示：小鼠缺血再灌后，缺血侧大脑皮质 NOX4蛋白水平明显增高，LBP 能显著降低 NOX4蛋白水平。 DHE 染色显示，LBP 能显著降低缺血再灌后 ROS 的生成。 LBP 能升高 SOD 和 GSH－Px 活力，降低 MDA 含量。结论LBP 对缺血再灌注小鼠脑损伤有明显保护作用，该作用可能与其抑制脑缺血再灌注引起的氧化应激损伤有关。
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人肾脏相关基因Nox4过表达慢病毒载体的构建与定位检测
目的:克隆Nox4基因入pLenti6.3慢病毒表达载体,为探索Nox4基因在ROS产生中的作用提供实验基础.方法:根据NCBI人Nox4 mRNA序列设计引物,再利用酶切连接反应将Nox4插入到入门载体pENTR3C中,成功构建pENTR3C-Nox4后,通过LR反应,将Nox4和EGFP tag插入到慢病毒表达载体pLenti6.3中,经酶切和测序验证正确后,将重组表达质粒转染入人Hela细胞,通过Western-Blot验证Nox4的表达情况,免疫荧光验证Nox4在细胞内的定位情况.结果:入门载体及表达质粒测序比对完全正确,转染Hela细胞后可见明显的表达条带,并且主要定位于细胞器内质网中.结论:成功构建了带有EGFP tag的Nox4基因慢病毒重组表达载体,转染Hela细胞后,其能正确表达并定位于内质网中,为研究Nox4在调节ROS产生中的作用奠定了基础.
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NOX4和eNOS在小鼠慢性缺氧肺血管重塑中的表达及意义
目的 观察内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和NOX4 在小鼠慢性缺氧肺动脉高压形成过程中的改变.方法 用HE染色法和免疫组织化学法观察C57BL/6J小鼠在常氧和慢性持续缺氧(10±0.5% O2)1、3、7、14 d后肺血管的改变及非肌型小血管α-SMA 和 eNOS蛋白表达的改变.用Real Time PCR 法检测各组小鼠肺组织中eNOS和NOX4 mRNA的含量.结果 C57BL/6J小鼠慢性缺氧后肺小动脉血管管壁增厚、肺泡内肺动脉α-SMA表达增加,肺组织eNOS和NOX4 mRNA以及肺动脉内皮细胞eNOS蛋白的表达随缺氧时间延长进行性升高.结论 eNOS和NOX4可能在慢性缺氧肺动脉高压的发病机制中发挥重要作用.
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丹酚酸B通过调节Nox4信号通路改善高脂饮食小鼠骨代谢的实验研究
目的 探讨丹酚酸B对高脂饮食小鼠股骨代谢的影响以及可能的作用机制.方法 C57 BL/6 J♂小鼠30只,分为正常组、高脂组和高脂+丹酚酸B组,每组10只.除正常组外,其他两组给予高脂饮食,高脂+丹酚酸B组给予丹酚酸B(125 mg·kg-1·d-1)干预.12周后,分离小鼠股骨,分别用三点弯曲实验测定骨生物力学性能,HE染色和番红O-固绿染色观察骨微结构,免疫组织化学染色分析股骨核因子-κB-p65(nuclear factor-kappa B,NF-κB-p65)、组织蛋白酶K(cathepsin K)和NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,Nox4)的表达情况.结果 高脂饮食能明显降低小鼠股骨的硬度形变量和峰值压力,使骨小梁变细且排列不规则.丹酚酸B能明显抑制高脂饮食诱发的小鼠股骨强度下降以及改善股骨微结构.同时,在高脂饮食的刺激下,小鼠股骨中Nox4、NF-κB-p65和cathepsin K的表达明显增高,丹酚酸B能抑制高脂饮食诱发的这种变化.结论 丹酚酸B可能通过调节Nox4/NF-κB/cathepsin K信号通路而改善高脂饮食小鼠的骨代谢,本研究为丹参及其有效成分用于骨质疏松的防治提供科学实验依据.
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灵芝多糖抑制NADPH氧化酶表达防治大鼠动脉粥样硬化
目的 探讨灵芝多糖对食饵性实验动脉粥样硬化(AS)大鼠的防治作用及其作用机制.方法 将40只大鼠随机分为正常对照组、动脉粥样硬化模型组、灵芝多糖低、中、高剂量预防组.12周末颈动脉取血检测血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;处死大鼠,光镜观察各组主动脉粥样斑块形成情况;取主动脉测定活性氧(ROS)含量;免疫印迹观察其Nox4、p22phox蛋白表达情况.结果 灵芝多糖各剂量组均可有效抑制动脉粥样硬化病理进程,降低血清MDA、SOD及主动脉ROS含量等氧化应激反应指标,减少主动脉Nox4、p22phox蛋白表达.结论 灵芝多糖通过下调Nox4、p22phox等NADPH氧化酶蛋白表达水平抑制主动脉氧化应激反应,明显改善大鼠动脉粥样硬化.
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辛伐他汀对内皮细胞NADPH氧化酶表达和活性氧生成的影响
目的 探讨辛伐他汀对内皮细胞NADPH氧化酶表达及活性氧生成的影响.方法 以不同浓度辛伐他汀和10-8 mol·L-1辛伐他汀不同处理时间培养内皮细胞,用RT-PCR检测NADPH氧化酶各亚单位(NOX4、NOX2、p67phox、p22phox、RAC)表达的变化;用流式细胞仪检测细胞内活性氧的浓度.结果 辛伐他汀能下调NOX4、p67phox、p22phox mRNA表达,同时下调细胞内活性氧浓度.结论 辛伐他汀可能通过下调NADPH氧化酶表达,以减少活性氧生成从而达到抗氧化损伤作用.
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染料木素拮抗对氧磷诱导的大鼠胸主动脉组织 p22phox 表达上调
目的：探讨染料木素是否通过下调 p22phox、Nox4的表达，抑制活性氧的生成而拮抗对氧磷损伤的血管内皮功能。方法取♂ SD 大鼠胸主动脉。①溶媒对照组：用0.1％的二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）处理大鼠胸主动脉30 min；②染料木素（genistein，GST）处理组：GST （100μmol · L －1）处理大鼠胸主动脉30 min；③对氧磷（paraoxon，PO）处理组：PO（40.5μmol·L －1）处理大鼠胸主动脉30 min；④ PO ＋GST 处理组：PO（40.5μmol·L －1）＋GST（100μmol·L －1）处理大鼠胸主动脉30 min。RT-PCR法检测各组 p22phox、Nox4 mRNA 表达的变化；Western blot观察 p22phox 和 Nox4蛋白表达的变化。结果较之溶媒对照组，PO 处理可使 p22phox、Nox4 mRNA 及蛋白表达明显增加；GST 处理则使 p22phox、Nox4 mRNA 及蛋白表达明显减少；PO ＋GST 共同处理组，Nox4 mRNA 及蛋白表达增加。与PO 单独处理组比较，PO ＋GST 共同处理组 p22phox mRNA及蛋白表达明显减少。结论对氧磷可通过上调血管组织p22phox、Nox4 mRNA 和蛋白的表达，导致血管内皮氧化损伤；染料木素可下调二者的表达，保护血管内皮。
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甲基阿魏酸对乙醇诱导HSC-LX2细胞NOX4和α-SMA表达的影响
目的 探讨甲基阿魏酸(MFA)对乙醇诱导人肝星状细胞(HSC-LX2)的NADPH氧化酶4(NOX4)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 以不同浓度的乙醇刺激HSC-LX2细胞不同时间,MTT法和Western blot法确定乙醇佳作用浓度和作用时间点;用不同浓度MFA培养细胞1d、2d和3d,MTT法检测MFA对HSC-LX2细胞生长抑制率;将HSC-LX2分为正常组、乙醇组和乙醇+药物干预组,MTT法检测不同浓度MFA对乙醇诱导HSC-LX2细胞增殖的影响,荧光酶标仪检测各组活性氧簇(ROS)的表达,RT-PCR法检测各组α-SMA、NOX4和p22phoxmRNA表达,Western blot法检测各组α-SMA、NOX4和p22phox蛋白表达.结果 与正常对照组相比,50 mmol/L乙醇诱导HSC-LX2细胞24 h,ROS、α-SMA、NOX4和p22phox表达显著增加(P＜0.05);与模型组相比,MFA对乙醇诱导HSC-LX2细胞ROS、α-SMA、NOX4和p22phox高表达有抑制作用(P ＜0.05,P＜0.01).结论 MFA可以抑制乙醇诱导HSC-LX2细胞ROS、α-SMA、NOX4和p22phox的高表达.
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NaHS抑制Nox4和p22p hox的表达保护小鼠脑缺血再灌注损伤
目的：探讨NaHS对小鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制。方法将105只C57小鼠随机分成假手术组（15只）、模型组（45只）和NaHS组（45只），后两组按时间点24 h、48 h、72 h再分为3个亚组，每亚组15只。采用线栓法阻塞左侧大脑中动脉制作脑缺血再灌注损伤模型。NaSH组造模前30 min、造模后24、48 h各腹腔注射NaHS一次，100μmol/kg；假手术组和模型组注射等体积生理盐水。采用Berderson改良量表评估神经功能，采用TTC染色法测量脑梗死体积，分别用PCR和免疫印迹法检查缺血脑组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4和p22-phox mRNA和蛋白表达水平。结果与假手术组比，造模后24、48、72 h，模型组脑梗死体积均明显增高（P<0.05），神经功能均显著变差（P<0.05），缺血脑组织NOX4和p22-phox mRNA和蛋白表达水平均明显增高（P<0.05），造模后48 h达高峰。而与模型组比，造模后24、48、72 h，NaHS组脑梗死体积均明显降低（P<0.05），神经功能均显著改善（P<0.05），缺血脑组织NOX4和p22-phox mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。结论NaHS可能通过抑制Nox4和p22p hox的表达保护小鼠脑缺血再灌注损伤；伤后48 h可能是脑缺血再灌注损伤发展的一个关键点。
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舒心通脉片改善异丙肾上腺素介导的心肌缺血的机制
目的:探讨舒心通脉片改善异丙肾上腺素介导的心肌缺血的作用机制与其抑制含Nox4的NADPH氧化酶介导的氧化应激.方法:研究舒心通脉片对异丙肾上腺素诱导的心肌缺血大鼠心电图和左心室Nox4表达水平的影响,以及大鼠给药后血清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、磷酸肌酸激酶(creatine phosphokinase,CK)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)浓度的变化.结果:舒心通脉片可抑制异丙肾上腺素介导的心肌缺血大鼠中ST段位移值的增加,降低血清中LDH和CK水平,升高SOD活性,降低左心室中Nox4的表达水平.结论:舒心通脉片可改善异丙肾上腺素诱导的心肌缺血,其机制可能与降低Nox4介导的活性氧的产生和升高SOD活性有关.
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山茱萸果核醇提物对大鼠肾性高血压及心肌肥厚的影响
目的:观察山茱萸果核甲醇提取物对大鼠肾性高血压及其所致心肌肥厚的作用及机制.方法:建立大鼠肾性高血压(2K2C)模型.将动物分为假手术组、模型组及山茱萸果核醇提物高、低剂量组,每组10只.术后4w进行药物处理,给药4w后测各组大鼠血压及左室体质量指数(LVM/BM)、心肌形态学变化；Western blot检测心肌组织中NAD(P)H氧化酶亚基P47phox、Nox4的表达情况.结果:模型组大鼠血压及LVM/BM显著高于假手术组,室内压大上升/下降速率显著下降；给予山茱萸果核醇提物后,各组大鼠血压及LVM/BM显著降低,室内压大上卜/下降速率显著升高,心肌细胞肥大及纤维化程度显著减弱；模型大鼠P47phox、Nox4的蛋白表达较假手术组显著增加,而山茱萸果核组大鼠左心室P47phox、NOX4蛋白表达显著下降,且呈剂量依赖性.结论:山茱萸果核醇提物具有显著降压作用,并能显著抑制肾性高血压大鼠心肌中NAD(P)H氧化酶亚基P47phox和Nox4的表达,这可能是山茱萸果核醇提物改善心脏功能,减缓心肌重构的基础.
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胆管结扎与再通对大鼠肝内细胞表型和NOX4蛋白表达的影响
目的 设计并建立胆管结扎及结扎后再通的大鼠肝纤维化模型,观察胆管结扎及再通对大鼠肝组织内细胞上皮-间质表型和氧化应激相关蛋白表达的影响.方法 12只雄性Wista大鼠随机分为假手术组、胆管结扎2周组、胆管结扎4周组和胆管结扎2周后再通2周组,通过组织HE染色、Masson染色等方法评估模型大鼠肝纤维化病变程度;通过免疫组化和Western blot等方法并检测上皮、间质标记蛋白及氧化应激相关蛋白的表达情况.结果 相较于假手术组,随着胆管结扎时间的延长,模型组大鼠肝纤维化明显加重,α-SMA、collagen I、NOX4和Vimetin等蛋白表达显著升高,而E-cadherin表达则明显降低;结扎后再通组大鼠肝纤维化较单纯胆管结扎4周组大鼠明显减轻,NOX4及间质细胞标记蛋白表明显低于单纯结扎4周组,内皮细胞标记蛋白表达较单纯结扎4周组则显著升高.结论 胆管结扎可上调大鼠肝内间质表型相关蛋白及NOX4蛋白的表达,同时抑制上皮表型相关蛋白的表达;当实施再通手术后,原胆管结扎大鼠肝内上皮表型相关蛋白表达增加,而间质表型相关蛋白及NOX4蛋白的表达明显减少.
