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人参三七川芎提取物延缓内皮细胞复制性衰老的机制研究
目的:探讨人参三七川芎提取物对内皮细胞复制性衰老(humanumbilical vein endothelial cells,HUVECs)的影响.方法:体外培养的HUVEC-2C传代至第8代,造成内皮细胞复制性衰老模型.细胞分为4组,8代衰老模型组、维生素E(Vit E)组(50 mg·L~(-1))、中药高、低(50,20 mg·L~(-1))剂量组,采用衰老相关卢β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法观察细胞衰老改变,流式细胞仪分析细胞周期,激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧(ROS)含量,硝酸还原酶法检测培养液一氧化氮(NO)和抗超氧阴离子水平,Western-blot法检测各组细胞AngII1型和2型受体(AT_1R和AT_2R),NAD(P)H氧化酶p47phox的蛋白表达.结果:8代衰老模型组β-gal染色阳性细胞数明显增多,细胞停滞在G_0/G_1期,激光共聚焦显微镜下ROS荧光强度明显增强,培养液中抗超氧阴离子、NO含量减少,p47phox,AT_1R,AT_2R蛋白表达上调.给予高、低剂量中药处理后,可明显改善细胞的衰老状态,β-gal染色阳性细胞数减少,G_0/G_1期细胞减少,G_2/M期细胞增加,ROS荧光强度减弱,抗超氧阴离子、NO含量较8代衰老模型组增加,p47phox,AT_1R,AT_2R蛋白表达下调,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论:人参三七川芎提取物能够延缓内皮细胞复制性衰老,通过活性氧途径下调NADPH氧化酶p47phox的表达,终使ROS产生减少;同时,中药提取物还能降低衰老内皮细胞AT_1R,AT_2R的表达,改善内皮功能,这可能是益气活血中药延缓内皮细胞衰老的主要原因之一.
关键词： 人参三七川芎提取物 NAD(P)H氧化酶 细胞复制性衰老 ROS -
高血压病患者吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22PhoxmRNA的表达水平
目的研究高血压病人及家系中血吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA表达水平的变化.方法研究对象分为有高血压家族史的高血压组(FH)和正常组(FN),无高血压家族史的高血压组(NFH)和正常组(N).通过密度梯度离心法获取血中吞噬细胞,采用RT-PCR技术检测吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA的表达量;比色法检测血清中抗活性氧单位水平.结果FH组(6.60±0.59)、NFH组(6.07±0.56)分别较FN组(4.99±0.29)、N组(4.13±0.51)P22phoxmRNA高表达(P＜0.01);FH组较NFH组、FN组较N组P22phoxmRNA高表达(P＜0.01).高血压组血清抗活性氧单位水平较正常组降低.结论高血压组血吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA较正常组有显著的高表达,且其表达可能受遗传因素的影响.
关键词： 高血压 吞噬细胞 NAD(P)H氧化酶 氧化应激 基因 -
p22phox基因多态性与上海地区人群2型糖尿病的相关性
目的 研究NAD(P)H氧化酶p22phox基因多态性与上海地区人群2型糖尿病(T2DM)相关性. 方法 应用PCR-RFLP方法对194名T2DM患者和105名健康对照者(NC)行NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T、A640G基因型检测,并测身高、体重、血脂、FPG、Fins、HbA1c.结果 T2DM组CT+TT基因型频率(20.62%vs3.81% P=0.002)及T等位基因频率(16.75%vs2.86%, P=0.000)明显高于NC组,两组间AG+AA基因型频率(13.33%vs12.88% P=0.562)及A等位基因频率(14.04%vs12.38% P=0.195)差异无统计学意义.多元回归分析,242T等位基因、BMI、FPG、HbA1c是T2DM的危险因素. 结论 结果表明p22phox亚基T等位基因可能与上海地区人群T2DM相关.NAD(P)H氧化酶p22phox亚基A640G基因多态性与该人群T2DM无相关性.242T等位基因与BMI、FPG、HbA1c相关,可能是T2DM的危险因素.
关键词： 糖尿病 2型 NAD(P)H氧化酶 基因多态性 -
NAD(P)H氧化酶及其基因多态性对心脑血管疾病的作用
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NAD(P)H)是人体中重要的生物分子,而NAD(P)H氧化酶催化NAD(P)H的反应产物为超氧阴离子(superoxide anion,·O-2),后者在维持机体免疫、代谢、血管生理功能等诸多方面都具有关键作用.NAD(P)H氧化酶基因多态性的发生可影响到酶生物活性功能,进而引发机体相应生理、病理反应的改变.
关键词： NAD(P)H氧化酶 基因多态性 心脑血管 -
球型脂联素对高糖环境NIT-1胰岛β细胞功能的影响
用β细胞株NIT-1来研究球型脂联素对高糖损伤β细胞分泌功能及相关基因表达的影响.结果 显爪球型脂联素可恢复部分β细胞功能相关基因的表达,抑制高糖诱导NAD(P)H氧化酶组分p47phox表达增加,但未能改善高糖诱导的胰岛素mRNA水平下降及胰岛素分泌缺陷.
关键词： NIT-1β细胞株 球型脂联素 NAD(P)H氧化酶 -
NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与缺血性脑血管病的关系
目的:探讨在中国人群中NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T多态性与缺血性脑血管病(ICVD)的相关性.方法:共收集了112例ICVD患者(TIA36例,脑梗死76例)和105例对照者,用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)的方法确定其基因型.结果:ICVD组和对照组的TC基因型频率分别为0.152和0.057,未发现有TT基因型.ICVD组的TC基因型频率显著高于对照组(P=0.024,OR2.95,95%CI 1.12～7.81).ICVD亚组间的分析显示,TIA与对照组之间CT基因型频率无明显差异,而脑梗死与对照组则有显著差异.结论:NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T多态性可能是脑梗死的一个危险因素.
关键词： NAD(P)H氧化酶 缺血性脑血管病 p22phox亚基 多态性 -
中国上海汉族人群NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与脑卒中相关性
目的:研究NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与脑卒中的相关性.方法:收集118例脑出血患者、125例脑梗死患者和147例正常对照组,研究对象均来自上海地区汉族人群,3组在年龄、性别构成比、体质指数(BMI)等基线指标均没有明显差异,分别进行血糖、血脂等各项指标的测定,用聚合酶链反应、限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和基因测序方法比较其在不同人群中的基因突变频率.结果:脑出血组、脑梗死组CT+ TT基因型(9.3％、9.6％)和T等位基因(4.7％、5.2％),均明显高于对照组(2.0％和1.0％,P＜ 0.05),脑梗死组中发现1例TT基因型,出血组与正常对照组均未发现TT基因型,与基因测序结果一致.采用二分类Logistic回归分析p22phox亚基C242T基因多态性与脑出血的相关性(β=1.712,OR=5.537,95％CI:1.120～27.381,P=0.036),与脑梗死的相关性(B=1.432,OR=4.187,95％CI:0.934～18.774,P=0.061),表明C242T基因多态性可能是脑出血、脑梗死的危险因素.结论:NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T多态性与脑出血、脑梗死均有一定的相关性,可能是脑卒中的一个危险因素.但与高血压和饮酒等传统危险因素相比,C242T多态性对脑梗死的影响并不显著.
关键词： 脑卒中 NAD(P)H氧化酶 C242T 基因多态性 -
伊贝沙坦对兔动脉粥样硬化的实验研究
目的研究伊贝沙坦对兔氧化应激水平及其对动脉粥样硬化形成的影响.方法采用高胆固醇饲料喂饲另加牛血清白蛋白一次注射方法,建立家兔动脉粥样硬化模型.18只家兔分为正常对照组、模型组及伊贝沙坦组,每组各6只.8周后,取血清测血脂、丙二醛(MDA);取动脉行形态学检查及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的免疫组织化学染色.结果 8周末模型组及伊贝沙坦组血脂水平高于正常对照组(P<0.01),其中,伊贝沙坦组未对血脂产生影响,但血清MDA及主动脉内膜病变较模型组减少.免疫组织化学结果示伊贝沙坦组VCAM-1较模型组有显著下降(P<0.05).结论伊贝沙坦可有效抑制动脉粥样硬化的形成.该效应可能是通过抑制NAD(P)H氧化酶活性,并下调下游氧化还原敏感性基因的产物如VCAM-1而实现的.
关键词： 伊贝沙坦 动脉粥样硬化 氧化应激 NAD(P)H氧化酶 家兔 -
NOX及细胞内ROS与胶质瘤增殖及恶性程度的关系
目的 探讨NAD(P)H氧化酶(NOX)及其产物在胶质瘤组织中的表达以及两者与胶质瘤恶性程度的相关性.方法 选取本院2011年1月至2013年1月经病理组织学证实为脑胶质瘤患者48例为研究对象,并选取同期行脑外伤手术的20例非肿瘤患者的正常脑组织为对照组.采用免疫组化法测定上述各组患者脑组织中NOX1~5 mRNA、NOX蛋白的阳性表达情况,并采用流式细胞仪测定各组患者脑组织中ROS的含量.结果 与对照组相比,脑胶质瘤细胞组织中NOX1~5 mRNA以及ROS的含量显著增加,两两比较差异有统计学意义(P<0.05).经单因素分析,NOX表达量与ROS的含量呈正相关(γ=0.698,P=0.001).随着病理分级水平的增加,Nox表达阳性率显著增加,两两比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 NOX及细胞内ROS的含量与脑胶质瘤恶性程度有密切关系,两者可能在脑胶质瘤发生及发展过程中发挥重要的作用.
关键词： 活性酶族 脑胶质瘤 NAD(P)H氧化酶 -
活性氧在高血压过程中的作用
在实验性高血压以及人体高血压中均显示活性氧生成明显增多,血管中通过NADP(H)氧化酶以及NOS解偶联而产生的活性氧(ROS)参与了高血压过程中血管功能的损害及血管的炎性反应.运用抗氧化治疗有利于减小对血管的损伤,降低高血压生成的终末器官损害.
关键词： 高血压 活性氧 氧化应激 NAD(P)H氧化酶 NOS -
NAD(P)H氧化酶及其在高血压血管损害中的作用
血管活性氧簇(ROS)尤其是超氧阴离子(·O2-)的增加,在高血压引起的血管功能和结构改变中起重要作用.NAD(P)H氧化酶是血管产生·O2的主要酶,并参与了这一损伤机制.
关键词： NAD(P)H氧化酶 超氧阴离子 高血压 血管 -
降钙素基因相关肽通过p38MAPK/ Nox1通路抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖
前期研究证明,降钙素基因相关肽( CGRP)具有较强的血管扩张作用,能够抑制血管平滑肌细胞( VSMC)增殖.VSMC中,NADPH氧化酶1(Nox1)活性增加被认为是02产生的主要来源.Nox1通过介导VSMC增殖、迁移,在新生内膜的形成中发挥重要作用.实验表明,CGRP能抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠VSMC增殖与抑制ERK1/2磷酸化相关.另有研究表明,转染Nox1反义序列于VSMC中能够抑制AngⅡ诱导超氧化物产生的早期阶段,并且能够显著降低AngⅡ诱导的p38MAPK激酶的激活,但对ERK1/2的影响不大,所以AngⅡ可能通过上调Nox1表达产生内源性活性氧(ROS)参与VSMC增殖.那么,CGRP是否通过p38MAPK/Nox1通路抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖还需进一步探索.
关键词： 降钙素基因相关肤 血管平滑肌细胞 NAD(P)H氧化酶 信号通路 -
高血压病患者NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA表达与抗活性氧单位、NO水平变化实验研究
目的 探讨高血压病人血吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA的表达水平,及其与高血压氧化应激时抗活性氧单位、一氧化氮(NO)水平变化间的关系.方法 研究对象分为原发性高血压组(EH)和正常组(N).通过密度梯度离心法获取血中吞噬细胞,采用Rt-PCR技术检测吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA的表达量,比色法检测血清中NO含量及抗活性氧单位水平.结果 高血压组血吞噬细胞P22phoxmRNA较正常组高表达,高血压组血清NO含量、抗活性氧单位水平较正常组降低.统计学相关性分析两组人群血清NO含量、抗活性氧单位水平与相应的吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA表达量呈直线相关.结论 高血压组血吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA较正常组有显著的高表达,高血压患者血清NO含量、抗活性氧单位水平的变化与吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA表达密切相关.
关键词： 高血压 吞噬细胞 NAD(P)H氧化酶 氧化应激 基因 -
大鼠局灶性脑缺血再灌注脑内p47phox表达变化的研究
目的 通过观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后p47phox基因在脑内表达动态变化,探讨p47phox在局灶性脑缺血再灌注后对脑缺血损害的作用及机制,可能为p47phox基因作为脑卒中的候选基因提供理论依据.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑缺血再灌注组和假手术组再灌后第1、3、6、12和24h和正常对照组p47phox基因在脑内的表达.结果 正常对照组和假手术组大鼠脑皮质内有少量p47phox mRNA表达,组内各时间点比较无统计学意义(P＞0.05);脑缺血再灌注组,缺血再灌注1 h后p47phoxmRNA表达增加,至3h达高峰(与假手术组和正常对照组相比差异显著,P＜0.01).结论 p47phox可能参与了脑缺血再灌注后损伤,并在其中发挥了重要作用.
关键词： 脑卒中 p47phox NAD(P)H氧化酶 缺血再灌注 -
血管紧张素Ⅱ体外诱导血管内皮细胞衰老的机制研究
目的 观察血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)是否可诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)衰老,并探讨其作用机制.方法 体外培养的HUVECs分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+valsartan组,观察细胞衰老改变及超氧阴离子(O)水平,分析各组细胞AngⅡ1型和2型受体(AT1R和AT2R)、NAD(P)H氧化酶p22phox的mRNA及蛋白表达.结果 给予AngⅡ后,β-gal染色阳性细胞数增加,细胞向G0-G1期停滞,细胞p16蛋白表达增高,出现衰老的特征性改变;衰老细胞NO生成减少,O2(-·)生成增加,p22phox和AT2R的mRNA及蛋白表达增加,ATlR表达下降;valsartan处理后改善了细胞的衰老改变,下调p22phox表达,降低O2(-·)水平,对AT2R表达无明显影响.结论 AngⅡ可诱导体外培养的HUVECs衰老,AngⅡ从转录水平上调NAD(P)H氧化酶p22phox表达,进而使O2(-·)产生增加可能是诱导内皮细胞衰老的主要原因之一;Valsartan通过特异性阻断ATlR有一定的逆转内皮细胞衰老的作用.
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山茱萸果核醇提物对大鼠肾性高血压及心肌肥厚的影响
目的:观察山茱萸果核甲醇提取物对大鼠肾性高血压及其所致心肌肥厚的作用及机制.方法:建立大鼠肾性高血压(2K2C)模型.将动物分为假手术组、模型组及山茱萸果核醇提物高、低剂量组,每组10只.术后4w进行药物处理,给药4w后测各组大鼠血压及左室体质量指数(LVM/BM)、心肌形态学变化；Western blot检测心肌组织中NAD(P)H氧化酶亚基P47phox、Nox4的表达情况.结果:模型组大鼠血压及LVM/BM显著高于假手术组,室内压大上升/下降速率显著下降；给予山茱萸果核醇提物后,各组大鼠血压及LVM/BM显著降低,室内压大上卜/下降速率显著升高,心肌细胞肥大及纤维化程度显著减弱；模型大鼠P47phox、Nox4的蛋白表达较假手术组显著增加,而山茱萸果核组大鼠左心室P47phox、NOX4蛋白表达显著下降,且呈剂量依赖性.结论:山茱萸果核醇提物具有显著降压作用,并能显著抑制肾性高血压大鼠心肌中NAD(P)H氧化酶亚基P47phox和Nox4的表达,这可能是山茱萸果核醇提物改善心脏功能,减缓心肌重构的基础.
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NAD(P)H氧化酶与胶质瘤恶性程度相关性研究
目的 检测不同恶性程度胶质瘤组织NAD(P)H氧化酶(NOX)的表达及其产物ROS的含量,探讨NOX及细胞内ROS与胶质瘤增殖及恶性程度的关系.方法 收集南方医科大学珠江医院神经外科白2007年8月至2010年8月手术切除的人脑胶质瘤标本30例,其中低级别胶质瘤(Ⅰ和Ⅱ级)10例、Ⅲ级胶质瘤10例和Ⅳ级胶质瘤10例,另取10例行内减压术的脑损伤患者的正常脑组织作为对照组.RT-PCR检测4组脑组织NOX1～5 mRNA的表达,流式细胞仪测定脑组织ROS的含量,Western blotting和免疫荧光染色分别检测脑组织NOX蛋白的表达和分布.结果 4组脑标本NOX1～5 mRNA、ROS含量均不同,差异均有统计学意义(P＜0.05),且NOX4mRNA 、ROS含量在正常对照组、低级别胶质瘤(Ⅰ～Ⅱ级)、Ⅲ级胶质瘤和Ⅳ级胶质瘤中的表达逐渐增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);Westenm blotting和免疫荧光染色结果显示NOX在对照组标本中呈低表达,在胶质瘤中呈高表达,且胶质瘤恶性程度越高,表达水平越高.结论 NOX的表达及ROS含量与胶质瘤的恶性程度有关,可能对胶质瘤的发生和恶性增殖起重要作用.
关键词： 神经胶质瘤 NAD(P)H氧化酶 活性氧簇 -
NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与短暂性脑缺血发作关系的研究
目的 探讨NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与短暂性脑缺血发作(TIA)的相关性.方法 收集138例TIA患者及130例健康对照者,用聚合酶链反应(PCR)及限制性片段长度多态性分析(RFLP)的方法确定其基因型,比较其在不同人群中的分布特点.结果 TIA组和对照组的CT基因型频率分别为0.268和0.139.未发现有TT基因型.TLA组的CT基因型频率明显高于对照组.T等位基因频率亦高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 推测NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T多念性为TIA的一个危险因素.
关键词： NAD(P)H氧化酶 基因多态性 短暂性脑缺血发作 -
NADPH氧化酶在TGF-β1诱导大鼠小管上皮细胞表达炎症因子中的作用
[目的]观察转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肾小管上皮细胞单核细胞趋化因子-1(MCP-1)及白细胞介素6(IL-6)表达的影响,并探讨NADPH氧化酶在其中的作用.[方法]以大鼠.肾小管上皮细胞株(NRK-52E)为研究对象,采用TGF-β1(10 ng/mL)刺激0 h,2 h,4 h,8 h,12 h,24 h分别收取RNA;刺激0 h,12 h,24h,48 h,72 h分别收取细胞上清液;部分实验中培养的细胞在刺激前用NADPH氧化酶抑制剂DPI(0.1,1,5,10μmol/L)预处理1 h,然后含10 ng的TGF-β1无血清DMEM/F12培养液分别培养12 h(收集RNA)和24 h(收集细胞上清液).所有实验重复3次.细胞内活性氧(ROS)的产生采用激光共聚焦显微镜观察.NADPH氧化酶p22phox、gp91phox、p47phox和p67phox亚单位以及MCP-1和IL-6 mRNA的表达采用RT-PCR检测.细胞上清液中MCP-1的含量采用ELISA检测.[结果]TGF-β1可显著上调NADPH氧化酶p67phox亚单位mRNA的表达,8 h为对照的2.43倍(P<0.01),24 h达3.59倍(P<0.01).但对p22phox、gp91phox和p47phox亚单位mRNA表达无显著影响.TGF-β1可显著增加细胞内ROS产生,DPI预处理后ROS产生较TGF-β1刺激组降低了43.69%(P<0.05).TGF-β1可显著上调MCP-1和IL-6 mRNA及蛋白的表达.DPI预处理可明显逆转TGF-β1诱导的MCP-1和IL-6的上调表达.[结论]TGF-β1可促使细胞ROS产生增加.TGF-β1可能通过NADPH氧化酶依赖的ROS介导了大鼠肾小管上皮细胞MCP-1及IL-6的上调表达.
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抑制NAD(P)H氧化酶表达和活性对大鼠糖尿病肾病的影响
[目的]探讨NAD(P)H氧化酶在糖尿病肾病发病中的作用和防治方法.[方法]链脲佐菌素(STZ)诱导的大鼠糖尿病模型随机分为糖尿病组NAD(P)H氧化酶抑制剂apocynin治疗组(0.2 g·kg-1·d-1)和血管紧张素转换酶抑制剂福辛普利治疗组(10 mg-kg-1·d-1),疗程8周.用RT-PCR检测肾NAD(P)H氧化酶亚基p22phox mRNA表达;组织病理学检查观察肾病变程度;测定血肌酐(Scr)、内生肌酐清除率(Ccr)、24 h尿蛋白排泄量、肾质量指数等.[结果]糖尿病大鼠肾p22phox mRNA的表达较正常大鼠明显升高(P＜0.05),apocynin 治疗不影响肾p22phox mRNA的表达;福辛普利治疗4周,明显降低了肾p22phox mRNA表达(P＜0.05);apocynin和福辛普利均显著降低了肾小球细胞外基质蛋白、Scr、尿蛋白和肾质量指数(P＜0.05),提高了Ccr(P＜0.05),但对血糖和血压均没有显著影响.[结论]糖尿病大鼠肾组织中,NAD(P)H氧化酶的表达明显升高并参与了糖尿病肾病发病;抑制NAD(P)H氧化酶活性和表达的治疗措施可延缓糖尿病肾病的发生和发展.
