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NaHS对ATP诱导大鼠小胶质细胞P2X受体表达的影响
目的:观察硫化氢(H2S)供体硫氢化钠(NaHS)对ATP致伤的大鼠小胶质细胞细胞活力、细胞膜通透性及P2X7受体表达的影响.方法:实验取对数期形态结构及生长分化良好的大鼠小胶质细胞,随机分4组,每组设3个复孔.①正常对照组:常规培养,不进行ATP处理.②ATP组:接种细胞24h后ATP处理.③NaHS+ ATP组:NaHS预先孵育30 min后再用ATP处理,并且NaHS始终存在于反应体系中.④KN-62(P2X7受体阻断剂)+ATP组:KN-62预先孵育30 min,其余同NaHS+ ATP组.MTT检测各组细胞活力,荧光染料YO-PRO-1检测各组相对荧光单位(RFU)反映膜的通透性,Western blot检测各组P2X7受体表达水平.结果:①与对照组相比,不同浓度的ATP(1、3、5、10 mmol/L)作用3h均可明显降低大鼠小胶质细胞活力,NaHS(200 μmol/L)干预后大鼠小胶质细胞活力较ATP组明显增加(P＜0.01),但NaHS达400 μmol/L浓度时,其保护作用未进一步增加.②随着ATP浓度的增加,大鼠小胶质细胞内YO-PRO-1的荧光强度显著增加,NaHS预处理可明显减少细胞对YO-PRO-1的摄取(P＜0.01).③ATP(3 mmol/L)能上调P2X7受体蛋白表达水平,而NaHS(200 μmol/L)预孵育则可明显抑制ATP引起的P2X7受体蛋白表达的上调(P＜0.01).结论:NaHS可减少ATP致伤的大鼠小胶质细胞的P2X7受体表达、降低通透性、增加细胞活力,提示调控P2X7受体的表达和功能可能是H2S神经保护作用的重要环节.
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NaHS抑制Nox4和p22p hox的表达保护小鼠脑缺血再灌注损伤
目的：探讨NaHS对小鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制。方法将105只C57小鼠随机分成假手术组（15只）、模型组（45只）和NaHS组（45只），后两组按时间点24 h、48 h、72 h再分为3个亚组，每亚组15只。采用线栓法阻塞左侧大脑中动脉制作脑缺血再灌注损伤模型。NaSH组造模前30 min、造模后24、48 h各腹腔注射NaHS一次，100μmol/kg；假手术组和模型组注射等体积生理盐水。采用Berderson改良量表评估神经功能，采用TTC染色法测量脑梗死体积，分别用PCR和免疫印迹法检查缺血脑组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4和p22-phox mRNA和蛋白表达水平。结果与假手术组比，造模后24、48、72 h，模型组脑梗死体积均明显增高（P<0.05），神经功能均显著变差（P<0.05），缺血脑组织NOX4和p22-phox mRNA和蛋白表达水平均明显增高（P<0.05），造模后48 h达高峰。而与模型组比，造模后24、48、72 h，NaHS组脑梗死体积均明显降低（P<0.05），神经功能均显著改善（P<0.05），缺血脑组织NOX4和p22-phox mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。结论NaHS可能通过抑制Nox4和p22p hox的表达保护小鼠脑缺血再灌注损伤；伤后48 h可能是脑缺血再灌注损伤发展的一个关键点。
