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益生菌及肠内外营养对重症急性胰腺炎大鼠肠道黏附分子及免疫屏障的影响
目的:观察益生菌及肠外、肠内营养对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠道黏附分子MAdCAM-1及免疫屏障的影响.方法:经胆胰管逆行注射50 g/L牛磺胆酸钠制作SAP模型24 h后,分别给予肠外营养(PN组),肠外+肠内营养(PN+EN组),肠外+肠内营养+益生菌(益生菌组),持续6 d,7 d时处死,检测腹腔脏器组织菌群易位率,免疫组化法测定末端回肠和Peyer结MAdCAM-1,CD4,CD8,IgA.结果:益生菌组、PN+EN组CD4、CD8 T细胞数量及IgA,MAdCAM-1表达高于PN组(P＜0.05);益生菌组Peyer结MAdCAM-1,CD8表达高于PN+EN组(P＜0.05).PN组菌群易位率(70.2%)、7 d死亡率(75.6%)高于益生菌组(27.5%,50.0%)、PN+EN组(30.5%,52.4%)(P＜0.01或P＜0.05),但后两组间差异无显著性意义.结论:EN能增加MAdCAM-1表达,提高SAP时肠免疫屏障,减少菌群易位,提高生存率.加用益生菌后总体改善不明显.
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MAdCAM-1及NF-κB在小鼠恶唑酮结肠炎中的表达及一氧化氮供体的干预作用
目的:探讨MAdCAM-1在恶唑酮结肠炎中的表达及一氧化氮供体DETA NONOate和GTN 对恶唑酮结肠炎的干预作用.方法:32只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(A)、恶唑酮结肠炎组(B)、GTN干预组(C)和DETA NONOate干预组(D).除正常对照组外,其余3组均建立小鼠恶唑酮结肠炎模型,两个一氧化氮供体干预后处死小鼠.评价DAI、大体评分和组织学评分;免疫组织化学法检测MAdCAM-1及NF-κB;硝酸还原酶法测定血清中NO含量:测定结肠组织MPO活性.结果:B组小鼠DAI评分自灌肠之日起逐渐增高,而D组则变化不明显.B组小鼠大体评分、组织学评分、NF-κB的表达、MAdCAM-1的表达、MPO活性(3.13±0.84,20.31±2.63,30.29±8.68,17.60±6.53,3.83±0.60)均分别高于A组(0.38±0.52,0.88±0.83,7.38±2.29,4.08±1.30,1.75±0.25,P＜0.01)和D组(1.38±0.52,11.13±1.48,12.60±3.54,8.42±2.16,2.76±0.48,P＜0.01),而C组则与B组相近.B组小鼠血清NO浓度高于A组(54.51±22.28vs 32.17±14.88,P＜0.05),而低于D组和C组(54.51±22.28 vs 88.53±24.77,80.12±19.79,均P＜0.05).B组MAdCAM-1的表达与组织学评分、MPO活性、NF-κB P65 IA值呈正相关(r=0.786,r=0.833,r=0.833,P＜0.05).结论:小鼠恶唑酮结肠炎中结肠固有层MAdCAM-1的表达增加,DETA NONOate可能是治疗溃疡性结肠炎的有价值药物.
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CD62L、MadCAM-1表达与非小细胞肺癌淋巴结转移关系
目的 初步探讨细胞粘附分子CD62L及黏膜地址素细胞粘附分子(mucosal addressin cell adhesion molicule,MadCAM-1)在非小细胞肺癌及其转移淋巴结中的表达状况及其与淋巴结转移之间的关系和意义.方法 选取肺癌60例和淋巴结转移标本30例,同时选取正常肺组织30例以及无转移淋巴结30例,利用免疫组化检测CD62L、MadCAM-1在不同组别的表达情况.结果 CD62L在肿瘤组织中表达在肿瘤细胞、脉管内癌栓、间质浸润的淋巴细胞;在转移淋巴结主要表达在转移灶肿瘤细胞、脉管内癌栓以及淋巴细胞;在正常肺组织以及无转移淋巴结主要表达在成熟淋巴细胞;CD62L在癌组织中表达高于正常肺组织(P<0.05);转移淋巴结中的表达高于无转移淋巴结表达(P<0.05); CD62L在转移淋巴结中表达与癌组织中的表达相比无差异(P>0.05);CD62L在正常肺组织表达与无转移淋巴结表达差异无统计学意义(P>0.05).MadCAM-1主要表达淋巴结滤泡间区的高内皮后微静脉内皮细胞;在癌组织中的高内皮微静脉无表达;转移淋巴结中的表达高于无转移淋巴结表达(P<0.05).CD62L及其受体MadCAM-1表达在肺癌组织以及转移淋巴结中表达之间存在密切相关(r=0.7081,P=0.002);CD62L及其受体MadCAM-1表达在肺癌组织以及无转移淋巴结中表达之间不存在切相关(P>0.05).CD62L的阳性表达水平(即灰度单位)与淋巴结转移、脉管内癌栓、临床分期之间存在密切相关(P<0.05),与肿瘤体积、细胞分化程度、侵犯肺膜无关(P>0.05);MadCAM-1的阳性表达水平与淋巴结转移、脉管内癌栓、肿瘤体积存在明显相关(P<0.05),与细胞分化、侵犯肺膜、肿瘤分期无明显相关(P>0.05).结论 CD62L及其受体MadCAM-1参与正常肺组织的淋巴细胞归巢和肺癌组织的淋巴结转移,并与肺癌的发展密切相关.
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靶向MAdCAM-1超声造影剂的制备及其体外寻靶实验研究
目的:制备适用于炎症性肠病超声诊断并靶向MAdCAM-1的长循环脂膜超声造影剂,并鉴定其物理性状及体外寻靶能力.方法:采用超声破碎法制备长循环脂膜超声微泡,通过“生物素-亲和素”法桥接超声微泡与抗MAdCAM-1单克隆抗体(MECA-367).对制备出的靶向微泡造影剂进行物理性状检测;通过光镜和激光共聚焦显微镜观察该靶向造影剂对TNF-α诱导的炎症性肠病细胞模型的结合能力.同法制备携同型对照抗体IgG2a微泡作对照.结果:制备的靶向超声微泡形态好且粒径较均匀,平均粒径(464.5±85.7)nm,Zeta电位(-19.3±2.5)mV.SVEC4-10细胞MAdCAM-1的表达与TNF-α刺激时间成正相关.并且,当TNF-α浓度达到20 ng/ml时,MAdCAM-1的表达达到峰值.体外寻靶试验表明,该靶向造影剂较多并牢固地黏附到表达MAdCAM-1的细胞周围;携IgG2a的同型对照组未见明显结合.结论:成功制备出桥连MECA-367的靶向长循环脂膜超声造影剂,该造影剂在体外对高表达MAdCAM-1的炎性细胞模型有较强的特异性亲和力;TNF-α诱导SVEC4-10细胞建立炎症性肠病细胞模型的方法简便易行.
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早期肠内营养在大鼠重症急性胰腺炎肠道免疫屏障中的作用
[目的]探讨早期肠内营养在大鼠重症急性胰腺炎肠道屏障中的作用及机制.[方法]将60只SD大鼠随机分成3组:正常对照组即假手术组(SO组),肠外营养组(TPN组),肠内营养组(EEN组),每组20只.各组于造模后1d检测血清淀粉酶(AMY),第6天统计死亡率后处死大鼠并收集标本,回肠HE染色评估肠黏膜病理损伤,免疫组化法测定末端回肠Peyer结的MAdcAM-1、CD4+、CD8+的含量,检测内毒素含量和细菌移位率.[结果]①死亡率:SO组(0％)明显低于TPN组(50％)和EEN组(25％),EEN组明显低于TPN组,均P＜0.05;②AMY含量:TPN组、EEN组与SO组比较,EEN组与TPN组比较,均差异有统计学意义(P＜0.01);③回肠黏膜组织评分:TPN组、EEN组与SO组比较,EEN组与TPN组比较,均差异有统计学意义(P＜0.05);④末端回肠Peyer结CD4+、CD8+、MAdcAM-1:TPN组、EEN组与SO组比较,EEN组与TPN组比较,均差异有统计学意义(P＜0.05);⑤血内毒素水平:TPN组、EEN组与SO组比较,EEN组与TPN组比较,均差异有统计学意义(P＜0.05);⑥各种细菌易位率:TPN组、EEN组与SO组比较,EEN组与TPN组比较,均差异有统计学意义(P＜0.01).[结论]早期肠内营养在维护大鼠重症急性胰腺炎肠道屏障方面的作用效果显著.
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人粘膜血管定居因子/GST融合基因表达载体的构建与表达
目的构建hMAdCAM-1/GST融合基因表达载体并进行表达.方法采用PCR技术扩增hMAdCAM-lcDNA5'端615 bp的基因片段,将其插入pGEM-T质粒中,经全自动序列分析仪测序证实后,再亚克隆至表达载体pGEX-2T,转化大肠杆菌DH5a表达.结果 sDS-PAGE检测显示,表达出相对分子量52 000 u的融合蛋白,占菌体总蛋白的31%左右.Western blot分析表明,表达蛋白能与抗hMAdCAM-1多抗特异性结合.结论 hMAdCAM-1/GsT融合基因表达载体的构建和表达,为深入研究MAdCAM-1提供了材料.
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粘膜免疫系统的研究进展
粘膜免疫系统(mucosal immune system,MIS)是指广泛分布于呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道粘膜下及一些外分泌腺体处的淋巴组织,是执行局部特异性免疫功能的主要场所.粘膜免疫系统在结构和功能上均有别于传统的系统免疫系统,主要表现在以下几个方面:(1)MIS是大量免疫细胞和免疫分子弥散在粘膜上皮内或粘膜下固有层(弥散淋巴组织),或由单个或多个淋巴滤泡聚集成的粘膜相关淋巴组织(mucosalassociated lymphoid tissues,MALT),包括:肠相关淋巴组织(GALT)、支气管相关淋巴组织(BALT)和鼻相关淋巴组织(NALT)等.机体50%以上的淋巴组织和80%以上的免疫细胞集中于粘膜免疫系统.(2)MIS分泌的是一类粘膜相关的免疫球蛋白,即分泌型IgA(secretory IgA,sIgA)和sIgM.
