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创伤弧菌溶细胞素对小鼠肝脏CD4+T细胞线粒体数量及CD62L表达的影响
目的：研究重组创伤弧菌溶细胞素(rVvhA)对小鼠肝脏 CD4+T 细胞的细胞毒活性及其对线粒体数量和 CD62L 表达中的作用,了解其对肝脏不同类型 CD4+ T 细胞存活率的影响。方法利用大肠埃希菌表达系统重组表达创伤弧菌溶细胞素,体外作用 C57BL/6小鼠的肝脏单个核细胞,采用流式细胞术结合 CD4、CD44、CD62L、Live/ Dead、MitoTracker Red 和 JC-1等荧光抗体(或探针)检测分析 rVvhA 对肝脏 CD4+ T 细胞及其亚群的存活率、线粒体数量和线粒体膜电位的影响。结果rVvhA 体外作用6 h 后,小鼠肝脏 CD4+T 细胞的存活率下降,rVvhA 对 CD4+初始 T 细胞和效应性 T 细胞均有杀伤作用,且 CD4+T 细胞 CD62L 的表达明显下调,此外,CD4+T 细胞的线粒体数量减少,线粒体膜电位显著下降。结论重组创伤弧菌溶细胞素对 CD4+T 细胞的细胞毒活性可能与 CD62L 表达、抑制线粒体数量和膜电位有关。
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IL- 7和IL- 15自杀式基因修饰的中枢性记忆T细胞具有同种异基因反应性及自我更新的能力
白血病经同种异基因造血干细胞移植治疗后,其长期的临床缓解还依赖于同种异基因反应性记忆T细胞能否自我更新并分化成具有抗白血病作用的效应子,以对抗移植物抗宿主病(GVHD).记忆T细胞根据归巢受体CD62L和趋化因子受体CCR7的表达与否, 分为中枢性(TCM)和效应性(TEM)记忆T细胞.
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巨细胞病毒感染的肾移植受者中性粒细胞表面黏附分子的表达及意义
目的 探讨肾移植术后巨细胞病毒(CMV)感染受者体内中性粒细胞表面黏附分子CD11b、CD15和CD62L的表达及诊断价值.方法 收集2009年9月至2015年1月在解放军第三○九医院全军器官移植研究所进行同种异体肾移植手术的142例受者的血液样本,其中男95例,女47例;选取2009年9月至2015年1月在解放军第三○九医院体检中心年龄匹配的健康志愿者男22名、女9名作为健康对照组.通过外周血CMV-pp65抗原检测将肾移植受者分为CMV高活动性感染组、CMV活动性感染组和CMV阴性对照组.采用流式细胞术检测各组外周血中性粒细胞表面黏附分子CD11b、CD15和CD62L的平均荧光强度,并进行比较.绘制CD11b、CD15和CD62L在诊断肾移植受者CMV感染的受试者工作特征(ROC)曲线.结果 肾移植受者中CMV高活动性感染组(n=17)和CMV活动性感染组(n=65)的中性粒细胞CD15的平均荧光强度分别为776.31±89.53和554.39±67.89,高于CMV阴性对照组(n=60)的334.92±44.69和健康对照组(n=31)的310.56±39.67,差异有统计学意义(均P＜0.05);CMV高活动性感染组中性粒细胞表达CD11b和CD62L的比例为42.31％±6.11％和40.35％±6.47％,低于CMV活动性感染组(62.45％±5.67％和65.65％±5.33％)、CMV阴性对照组(70.74％±6.55％和70.37％±6.71％)和健康对照组(72.52％±6.48％和72.43％±6.51％),差异有统计学意义(均P＜0.05).CD11b和CD62L表达率在诊断CMV活动性感染时的佳临界值分别为56.61％和44.35％,敏感度均为100.00％,特异度为76.67％和58.06％,ROC曲线下面积为0.851和0.628;CD11b和CD62L表达率在诊断CMV高活动性感染时的佳临界值分别为66.57％和69.56％,敏感度为81.54％和87.69％,特异度为100.00％和98.33％,ROC曲线下面积为1.000和0.991.CD15荧光强度在诊断CMV高活动性感染和CMV活动性感染时的佳临界值分别为542.71和408.03,敏感度为100.00％和98.46％,特异度均为100.00％,ROC曲线下面积为1.000和0.999.结论 肾移植受者CMV感染后中性粒细胞CD15表达上调,CD11b和CD62L表达下调,可以作为辅助诊断CMV活动性感染的实验室依据.
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CD62L、MadCAM-1表达与非小细胞肺癌淋巴结转移关系
目的 初步探讨细胞粘附分子CD62L及黏膜地址素细胞粘附分子(mucosal addressin cell adhesion molicule,MadCAM-1)在非小细胞肺癌及其转移淋巴结中的表达状况及其与淋巴结转移之间的关系和意义.方法 选取肺癌60例和淋巴结转移标本30例,同时选取正常肺组织30例以及无转移淋巴结30例,利用免疫组化检测CD62L、MadCAM-1在不同组别的表达情况.结果 CD62L在肿瘤组织中表达在肿瘤细胞、脉管内癌栓、间质浸润的淋巴细胞;在转移淋巴结主要表达在转移灶肿瘤细胞、脉管内癌栓以及淋巴细胞;在正常肺组织以及无转移淋巴结主要表达在成熟淋巴细胞;CD62L在癌组织中表达高于正常肺组织(P<0.05);转移淋巴结中的表达高于无转移淋巴结表达(P<0.05); CD62L在转移淋巴结中表达与癌组织中的表达相比无差异(P>0.05);CD62L在正常肺组织表达与无转移淋巴结表达差异无统计学意义(P>0.05).MadCAM-1主要表达淋巴结滤泡间区的高内皮后微静脉内皮细胞;在癌组织中的高内皮微静脉无表达;转移淋巴结中的表达高于无转移淋巴结表达(P<0.05).CD62L及其受体MadCAM-1表达在肺癌组织以及转移淋巴结中表达之间存在密切相关(r=0.7081,P=0.002);CD62L及其受体MadCAM-1表达在肺癌组织以及无转移淋巴结中表达之间不存在切相关(P>0.05).CD62L的阳性表达水平(即灰度单位)与淋巴结转移、脉管内癌栓、临床分期之间存在密切相关(P<0.05),与肿瘤体积、细胞分化程度、侵犯肺膜无关(P>0.05);MadCAM-1的阳性表达水平与淋巴结转移、脉管内癌栓、肿瘤体积存在明显相关(P<0.05),与细胞分化、侵犯肺膜、肿瘤分期无明显相关(P>0.05).结论 CD62L及其受体MadCAM-1参与正常肺组织的淋巴细胞归巢和肺癌组织的淋巴结转移,并与肺癌的发展密切相关.
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异体肺移植后大鼠血浆及肺组织CD62L的表达
背景:肺移植后急性排斥反应的临床症状、胸片及动脉血气检查等综合反应,均于移植排斥反应发生后出现,可导致移植失败.目的:评估将血浆CD62L作为监测诊断肺移植急性排斥反应指标的可行性.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2003-07109在泰山医学院实验室完成.材料:清洁级SD雄性大鼠32只,Wistar雄性大鼠16只.环孢酶素A为福建科瑞药业有限公司产品,批号030502.方法:设立4组:正常对照组取8只SD大鼠,进行同体原位移植;同基凶移植组以8只SD大鼠为供、受鼠,进行左肺原位移植:异基因移植组取Wistar供鼠、SD受鼠各8只,进行左肺原位移植;异基因移植用药组,在前组基础上于移植后1～5 d腹腔内注射环孢酶素A 20 mg/(kg·d).采用三袖套管法建立人鼠左肺原位移植模型.主要观察指标:流式细胞仪检测外周血CD62L表达水平,免疫组化染色检测CD62L表达水平及血浆中CD62L达水平,苏木精-伊红染色观察肺组织急性排斥反应情况.结果:移植后5,10 d与正常对照组、同基因移植组比较,异基因移植组、异基因移植用药组外周血CD62L表达明显升高(P<0.01,P<0.05):各组肺组织CD62L表达水平与外周血CD62L表达基本相似.同基因移植组肺组织仅见少量单核细胞浸润;异基因移植组肺组织血管周围、支气管周围单核细胞袖套样浸润,合并血管内膜炎,可见坏死细胞、气腔出血,并存在肺实质坏死;异基因移植用药组排斥反应较前组明显减轻.移植肺组织及外周血中的CD62L表达呈正相关(r=0.766).结论:大鼠肺移植急性排斥反应中CD62L表达增高与血浆中CD62L水平相关,提示血浆中CD62L水平有望成为诊断急性排斥反应新的辅助指标.
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人外周血卡介苗(BCG)特异性中央型和效应型记忆CD4+T细胞的特征
目的:探讨正常人外周血BCG特异性记忆T细胞的特征.方法:分离PPD-和PPD+正常人PBMCs,与BCG进行培养,采用ELISA法检测细胞培养上清液中IFN-γ的水平,ELISPOT法检测分泌IFN-γ的细胞数,利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测细胞表面分子及细胞内因子IFN-γ和IL-2的表达及其关系.结果:当BCG刺激后,PPD-正常人PBMCs不产生或只产生少量的IFN-γ,而PPD+者IFN-γ产生的量和细胞数均明显增加(P＜0.05).流式细胞检测分析的结果表明,当BCG刺激后,主要是CD4+而非CD8+T细胞表达IFN-γ和IL-2,两者相比具有显著差异.在CD4+T细胞中单独产生IFN-γ的细胞占大多数,其次为IFN-γ和IL-2双阳性细胞,只产生IL-2的细胞占少数.此外,85%～95%以上的CD4+IFN-γ+T细胞为CD45RO+,其中60%以上的细胞为CCR7+,其余的为CCR7-.同样地,80%～95%左右的细胞为CD62L-.结论:BCG可以诱导抗原特异性记忆CD4+T细胞的产生,其中大多数为中央型记忆CD4+T细胞,少数为效应记忆CD4+T细胞,提示其在预防和控制结核分枝杆菌感染中发挥重要作用.
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FoxO1基因对Jurkat细胞FoxO1-KLF2-S1P1通路的调节作用
目的:通过构建FoxO1表达和干扰慢病毒载体,建立细胞内FoxO1-KLF2-S1P1信号通路调控研究模型,观察FoxO1过表达、干扰表达在Jurkat细胞内对其下游分子表达及功能的影响.方法:构建FoxO1表达和干扰表达慢病毒载体,分别感染Jurkat细胞,采用荧光定量PCR、Western blot和流式细胞术检测S1P1、CD62L、CCR7、CD69 mRNA水平和蛋白分子的表达.结果:FoxO1过表达组于感染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1和CD62L mRNA水平显著增高(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p和KLF2胞浆蛋白水平增高,S1P1+细胞和CD62L+细胞比率增高(P<0.05),CCR7+细胞和CD69+细胞未见显著改变(P>0.05).FoxO1干扰组于转染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1和CD62L mRNA水平降低(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p和KLF2胞浆蛋白水平低于对照组,S1P1+细胞百分比增多(P<0.05),但S1P1+细胞和CD62L+细胞在72 h时减少(P<0.05).结论:FoxO1表达和干扰慢病毒载体转染Jurkat细胞并调节KLF2、S1P1和CD62L等分子的表达,为开展细胞内FoxO1-KLF2-S1P1信号通路调控和细胞相关功能的研究打下了基础.
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急性动脉血栓患者中性粒细胞黏附分子表达的变化及意义
目的 探讨急性动脉血栓形成患者中性粒细胞(PMN)表面黏附分子CF62L和CD11b/CD18的表达及其意义.方法 选择急性心、脑动脉血栓患者各20例,健康志愿者30例作为对照组.运用流式细胞仪检测外周血中PMN表面黏附分子CD62L和CD11b/CD18表达.结果 相对于正常组黏,动脉血栓组黏附分子CD62L平均抗体阳性表达率显著降低(P＜0.001);CD11b/CD18平均阳性表达率显著升高(P＜0.001).动脉血栓组内部CD62L、CD11b/CD18相关分析,二者呈明显负相关(r=-0.259,P＜0.001).结论 在动脉血栓的急性期,以细胞黏附为表现的PMN活化加快了血栓的进程,可能是血栓形成的重要发病原因之一.
关键词： 急性动脉血栓形成 中性粒细胞活化 CD62L CD11b/CD18 -
清肠栓对DSS诱导结肠炎小鼠脾CD4+T细胞CD44、 CD62L表达的影响
目的 研究清肠栓对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠脾CD4+T细胞CD44、CD62L表达的影响,探讨其免疫调节机制.方法 将129S3小鼠随机分为正常组(C组)、模型组(M组)、清肠栓组(QCS组)、美沙拉嗪组(5-ASA组).除正常组饮用蒸馏水外,余组小鼠采用5％ DSS自由饮用制备结肠炎小鼠模型,7天后正常组、模型组给予蒸馏水灌胃,清肠栓组、美沙拉嗪组给予相应药物灌胃7天后处死小鼠.观察指标包括小鼠的一般情况、疾病活动指数(DAI)评分、结肠指数及长度、结肠组织病理学改变及脾脏CD4+T淋巴细胞上CD44、CD62L的表达情况.结果 与正常组比较,模型组DAI评分明显升高(P＜0.05);清肠栓组DAI评分较模型组下降(P＜0.05).与正常组比较,模型组脾CD4+效应T细胞(CD4+ CD44highCD62Llow)比例增高(P＜0.01)、脾CD4+记忆T细胞(CD4+ CD44high CD62Lhigh)比例下降(P＜0.01).与模型组比较,清肠栓组、美沙拉嗪组CD4+效应T细胞比例明显下降(P＜0.01);清肠栓组脾CD4+记忆T细胞比例较模型组明显升高(P＜0.01),较美沙拉嗪组亦升高(P＜0.05).结论 清肠栓可能是通过下调脾脏CD4+效应T细胞、上调CD4+记忆T细胞,从而达到改善溃疡性结肠炎症状的目的.
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四种刺激剂对日本血吸虫感染小鼠脾脏CD8+T细胞内细胞因子及表面分子CD62L的影响
目的 探讨4种常用刺激剂佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,P)、离子霉素(ionomycin,I)、布雷非德菌素A (brefeldin A,B)和莫能霉素(monensin,M)对日本血吸虫(Schistosoma japonicum)感染小鼠脾脏CD8+T细胞内细胞因子及表面分子CD62L的影响.方法 21只C57BL/6雌性小鼠腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴, (20±2)条/鼠.感染后第8周和第12周,分别取小鼠脾脏制备单细胞悬液,用P(50ng/ml) +I(1μmol/L)+M(2μmol/L)体外刺激4h,采用流式细胞术检测分泌γ干扰素(IFN-γ)的CD8+T细胞比例,同时检测细胞表面CD62L的表达情况.制备感染后4周的小鼠脾脏单细胞悬液,按I组(1μmol/L)、P组(50 ng/ml)、B组(1 μg/ml)、M组(2μmol/L)、P+I组、P+I+M组、P+I+B组、P+I+M+B组分组,用对应刺激剂体外刺激4h后,利用细胞因子微球检测法检测各组培养上清中白细胞介素4(IL-4)、IL-17A、IFN-γ、IL-10、IL-1β和集落刺激因子(G-CSF)等细胞因子水平,同时用流式细胞术检测CD8+T细胞表面CD62L的表达情况,计算平均荧光强度(MFI).结果 流式细胞术检测结果显示,小鼠感染日本血吸虫后第8周和第12周,产生IFN-γ的CD8+T细胞比例分别降至(1.3±0.8)％和(0.7±0.2)％,均低于未感染对照组的(5.6±0.8)％(P＜0.05),但两者差异无统计学意义(P＞0.05).健康对照组和感染组小鼠CD8+T细胞表面均未检测到CD62L阳性群.不同组合刺激剂作用感染后4周,小鼠脾脏细胞培养上清细胞因子的检测结果显示,P+I组和P+I+M组的IL-4水平分别为(177.2±56.0)和(13.7±2.2) pg/ml;P+I组和P+I+M组的IL-17A浓度分别为(361.8±81.3)和(33.7±2.9) pg/ml;P+I组和P+I+M组上清中的IFN-γ浓度分别为(1 534.0±316.6)和(135.3±16.1) pg/ml;P+I组、P组和I组上清中IL-10的浓度分别为(705.5±179.6)、(34.8±13.9)和(43.1±13.9) pg/ml;P组和P+I组中G-CSF的浓度为(44.6±8.0)和(21.7±2.9) pg/ml;P组、I组和P+I+M组中IL-1β的浓度分别为(3.9±1.0)、(6.4±0.2)和(3.7±0.3) pg/nl;上述各组与其对应的对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).流式细胞术检测结果显示,P+I组、P+I+B组、P+I+M组和P+I+B+M组中CD62L峰较对照组明显左移,MFI分别为2.7±0.1、2.6±0.2、2.5±0.1、2.5±0.1,低于对照组(P＜0.01).结论 日本血吸虫感染晚期,小鼠脾脏细胞产生IFN-γ的CD8+T细胞比例减少,经P+I刺激后,CD62L表达明显下调.
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脓毒症时中性粒细胞功能相关表面分子的作用
背景 机体发生感染时中性粒细胞表面多种功能分子的表型发生变化与炎症的发生、发展及恶化存在潜在联系. 目的 探讨中性粒细胞表面功能分子表型的生物学效应及意义. 内容 研究中性粒细胞3大主要功能,黏附、趋化和吞噬.研究相关的多种细胞表面功能分子变化现状. 趋向 随着对中性粒细胞细胞表面功能分子变化的相关机制研究地不断深入,为早期诊断和治疗脓毒症患者提供了新的方向.
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细胞粘附分子在糖尿病病人外周血单个核细胞上的表达及临床意义
目的通过检测1型和2型糖尿病病人外周血单个核细胞上细胞粘附分子的表达,探讨细胞粘附分子在两型糖尿病中表达的不同及其临床意义.方法使用流式细胞术(FCM)检测1型糖尿病(T1DM)病人20例和2型糖尿病(T2DM)病人45例,正常健康体检者(CONTROL)20例外周血单个核细胞上CD54和CD62L的阳性表达率,进行两两比较.结果T1DM组CD54和CD62L的阳性率(%)分别为69.32±11.03;和66.21±7.79;T2DM组为65.43±10.54和68.43±6.03;CONTROL组分别为60.98±9.13和45.49±5.41.T1DM和T2DM糖尿病病人组和正常对照组比较有显著差异(t=7.44～9.77～7.07～14.59,P＜0.01);但两型DM组比较,两种粘附分子差异不显著(t=1.35～1.25,P＞0.05);在T2DM组中单纯糖尿病组和合并大血管病变组CD54和CD62L,差异显著(t=2.01～3.41,P＜0.05～0.01).结论细胞粘附分子CD54、CD62L在T1DM和T2DM病人外周血单个核细胞上的表达显著升高,推测两者可能与糖尿病的发生和发展有关;T2DM组中单纯糖尿病病人和合并大血管病变者有显著差异,说明CD54和CD62L参与了大血管病变的发生.
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原发性下肢静脉曲张患者曲张静脉组织CD62L表达的意义
目的:探讨CD62L在正常大隐静脉组织和曲张大隐静脉组织中的表达及其与原发性下肢静脉曲张的关系.方法:采用免疫组织化学技术检测CD62L在正常大隐静脉组织及曲张大隐静脉组织中的表达水平,利用H检验法分析其与大隐静脉曲张的关系.结果:正常大隐静脉组织中CD62L的表达(78.1400±2.3642)显著低于曲张静脉组织平均值(119.5354±35.5332) (P＜0.05)；曲张静脉组织CD62L的表达与软组织有无水肿、皮肤色素沉着、愈合性及活动性溃疡有关(均P＜0.05).结论:细胞黏附分子CD62L在曲张静脉组织中呈高表达,且其高表达与患肢软组织水肿、皮肤色素沉着、愈合性及活动性溃疡的发生有密切关系.
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记忆T细胞亚群与抗感染和肿瘤免疫
根据细胞表面分子CD45RA(或CD45RO)、CD62L、CCR7的表达情况,可将记忆T细胞分中央记忆T细胞和效应记忆T细胞等,这对研究记忆T细胞的功能、组织分布及抗肿瘤和抗感染的免疫特点有重要的价值.在抗感染及抗肿瘤免疫中,通过恢复抗原特异性记忆T细胞的功能,调节炎症及肿瘤组织局部免疫微环境,对感染性疾病和肿瘤的免疫治疗及相关疫苗的开发有着重要意义.
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氯胺酮影响嗜中性粒细胞CD18和CD62L的表达
[目的] 探讨氯胺酮是否影响人嗜中性粒细胞(PMN)粘附分子表达.[方法] 对分离的人全血细胞用甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(FMLP)或豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)刺激,加入不同浓度氯胺酮后孵化,用针对CD18或CD62L的单抗标定,再通过流式细胞计数了解CD18或CD62L在PMN表面的表达情况.[结果] FMLP或PMA刺激PMN可引起细胞表面的CD18表达和CD62L蜕落增加,氯胺酮对此具浓度依赖性抑制作用,且对CD18表达的抑制用与立体构型无关.[结论] 氯胺酮具抗粘附作用,该作用不似通过与特异受体的反应实现的,在趋炎性反应亢进的病人的麻醉镇痛时可以优先考虑选用该药.
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槲皮素对LPS诱导中性粒细胞活性化效应的抑制作用
目的研究槲皮素(Quercetin,Que)对细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的中性粒细胞(Polymorphonuclear,PMN)活化效应的影响.方法运用免疫荧光法和流式细胞术,对接受1 h LPS刺激的PMN表面黏附分子(CD62L,CD11b/CD18)的表达进行测定,同时应用MTT法对不同状态下的PMN活性进行测定.结果Que对LPS诱导的中性粒细胞活化效应有明显抑制作用,表现为抑制细胞表面黏附分子CD62L的表达和促进CD11b/CD18的表达,同时Que对LPS增加细胞活性的效应有抑制作用.结论槲皮素通过对抗LPS对PMN黏附分子CD62L,CD11b/CD18的表达的影响,抑制LPS诱导的中性粒细胞活化效应,从而阻止PMN对血管内皮细胞的黏附,减少炎症细胞向炎症局灶的浸润,这可能是槲皮素发挥抗炎作用的一个重要机制.
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CD11b在小鼠脾脏和淋巴结细胞中的差异表达及其功能
目的 研究CD11b在小鼠脾脏和淋巴结细胞的差异表达及其生物学特性.方法 流式细胞术分析CD11b在C57BL/6小鼠脾脏和淋巴结细胞、不同T细胞亚群的表达及其与T细胞活化的关系.结果 CD11b在脾脏细胞的表达(19.9±2.5)％略高于淋巴结的细胞(16.0±4.2)％(P=0.026).脾脏中CD11b主要表达于CD3-细胞(14.93±0.94)％,淋巴结中CD11b主要表达于CD3+细胞(12.52±1.32)％;在脾脏和淋巴结T细胞亚群中,CD11b均主要表达于CD4+T细胞.进一步分析发现,CD4+ CD11b+细胞高表达CD44和CD62L,且Freund完全佐剂(CFA)激活后的CD4+T细胞高表达CD11b.结论 CD11b主要表达于脾脏的非T细胞和淋巴结的T细胞.T细胞中CD11b主要表达于CD4+T亚群,且CD11b表达与T细胞活化有关.
