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骨肉瘤中 WIF-1甲基化及 WIF-1、β-catenin 蛋白表达的研究
目的：检测骨肉瘤中WIF-1基因启动子区甲基化状态及WIF-1蛋白、β-catenin蛋白表达情况，探讨它们之间的相关性及其与骨肉瘤发生发展的关系，为骨肉瘤的分子靶向治疗提供理论依据。方法收集青岛大学2008年1月至2013年6月骨肉瘤组织50例，并取骨软骨瘤组织30例作为对照，应用甲基化PCR和免疫组化两种方法，检测骨肉瘤组及对照组WIF-1基因启动子区甲基化状态及WIF-1蛋白、β-catenin蛋白表达情况。结果骨肉瘤和骨软骨瘤组织的WIF-1启动子甲基化阳性率分别为70.0%和20.0%，差异具有统计学意义（P＜0.01）。WIF-1启动子甲基化阳性率随着骨肉瘤分期的增加而升高。骨肉瘤和骨软骨瘤组织中WIF-1蛋白表达率分别为42.0%和70.0%，两者之间差异有统计学意义（P＜0.05），且WIF-1启动子甲基化阳性与WIF-1蛋白表达呈明显负相关（P＜0.05）。骨肉瘤和骨软骨瘤组织中β-catenin蛋白表达率分别为70.0%和43.3%，两者之间差异有统计学意义（P＜0.05），WIF-1启动子甲基化与β-catenin蛋白表达呈正相关（P＜0.05）。结论 WIF-1基因甲基化状态可能抑制了WIF-1蛋白的表达，从而引起β-catenin蛋白在在胞质中异常积聚表达，从而使经典Wnt信号转导通路过度激活，参与细胞的生长、增殖，导致骨肉瘤的发生发展。
关键词： 骨肉瘤 WIF-1 β-catenin蛋白 免疫组织化学 -
Klotho与β-Catenin在食管癌组织中的表达及临床意义
目的:研究Klotho与β-Catenin蛋白在食管癌与癌旁组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法:采用免疫组织化学EnVision二步法,检测Klotho与β-Catenin蛋白在75对食管鳞状细胞癌与其癌旁组织芯片中的表达情况,并结合临床病理资料进行统计分析.结果:Klotho在食管癌中表达的阳性率明显低于癌旁组织(14.9％ vs 63.4％,P＜0.05),Klotho 的表达与TNM分期、浸润深度明显相关(均P＜0.05).β-Catenin在食管癌中表达的阳性率明显高于癌旁组织(80.0％ vs 16.4％,P＜0.05),β-Catenin的表达与淋巴结转移、TNM分期明显相关(均P＜0.05).Klotho与β-Catenin在食管癌中的表达成负向关(r=-0.276,P＜0.05).结论:Klotho与β-Catenin在食管鳞状细胞癌与癌旁组织中的表达阳性率不同,差异均具有显著性,联合检测癌组织中Klotho与β-Catenin的表达可为食管癌的进展与预后提供重要的参考依据.
关键词： 食管鳞状细胞癌 组织芯片 Klotho基因 β-catenin蛋白 -
色素上皮衍生因子减轻氧化低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞损伤实验
目的 研究色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,Ox-LDL)所致血管内皮细胞损伤的抑制作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),建立Ox-LDL诱导的HUVECs损伤模型.Ox-LDL诱导损伤前,给予400μg/L PEDF预处理24 h,分别用MTT法和SYTO-13/PI双染法检测细胞活力和凋亡情况,Western blot技术检测 β-连环蛋白(β-catenin)和蓬乱蛋白(disheveled-1,Dvl-1)表达水平.结果 与对照组相比,Ox-LDL浓度为25 mg/L时细胞活力开始明显下降(P<0.05),且浓度达100 mg/L时,细胞存活率下降至低为49.0%(P<0.05),成功建立Ox-LDL诱导的HUVECs损伤模型.在模型的基础上进行PEDF干预,细胞存活率提高约17%(P<0.05),细胞凋亡率降低约19%(P<0.05),β-catenin和Dvl-1表达显著下调(分别为10%、15%,P<0.05).结论 PEDF能够减轻Ox-LDL诱导的HUVECs损伤,且在减轻损伤的同时下调Ox-LDL诱导的 β-catenin和DVL-1蛋白表达,这可能与PEDF抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.
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维甲酸对高氧环境下原代培养肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护机制
目的 探讨维甲酸(RA)对高氧环境下原代培养的肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)损伤的保护机制.方法 分离、纯化孕19d的胎鼠肺组织,得到肺泡Ⅱ型上皮细胞进行细胞培养,待细胞生长至亚汇合(约占瓶底80％以上时)将细胞分为空气组、高氧组、高氧+RA组,其中高氧+RA组加入含有10-6 mol/L的RA.空气组置于空气中培养;高氧组与高氧+RA组置于37℃、95％ O2-5％CO2条件下培养24h,用测氧仪检测培养皿中的氧浓度.采用流式细胞术(AnnexinV-PI双标记)检测AECⅡ凋亡,Westem blot检测Wnt通路中β-catenin蛋白质的表达,PCR检测β-catenin 基因的表达.结果 高氧组暴露24h,AnnexinV (+)PI(-)和AnnexinV(+)PI(+)标记的AECⅡ数较空气组及高氧+RA组均显著升高(P＜0.01);与空气组比较,高氧组β-catenin蛋白质的表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01),与高氧组比较,高氧+RA组则上调高氧暴露β-catenin蛋白的表达(P＜0.01).结论 高氧环境下可导致AECⅡ大量凋亡、坏死;RA通过上调β-catenin蛋白的表达,降低AECⅡ坏死、凋亡,从而对高氧肺损伤起到保护作用.
关键词： 维甲酸 高氧 肺泡Ⅱ型上皮细胞 β-catenin蛋白 -
新辅助化疗对骨肉瘤组织中β-catenin蛋白表达的影响
目的 探讨β-catenin蛋白在新辅助化疗前、后骨肉瘤组织中的表达变化及其与骨肉瘤临床病理特征的关系.方法 通过免疫组织化学方法检测54例新辅助化疗前、后骨肉瘤组织,骨样骨瘤11例,骨母细胞瘤7例及反应性新生骨8例组织中β-catenin蛋白的表达,并结合临床资料进行相关分析.结果 β-catenin蛋白在大部分骨样骨瘤、骨母细胞瘤及反应性新生骨病例中胞膜正常表达,而在骨肉瘤病例中胞浆(核)异常表达. 新辅助化疗前骨肉瘤组织中β-catenin蛋白的异常表达率明显高于骨样骨瘤、骨母细胞瘤及反应性新生骨组织,差异具有统计学意义(P<0.01). 新辅助化疗前β-catenin蛋白异常表达率在骨肉瘤肺转移组明显高于无肺转移组(P< 0.05). 新辅助化疗后骨肉瘤β-catenin蛋白异常表达较化疗前降低或消失(P<0.01),其表达与肿瘤坏死率不存在相关性.结论 β-catenin蛋白可能成为良、恶性成骨肿瘤鉴别诊断有益的辅助指标.新辅助化疗前β-catenin蛋白高异常表达率与骨肉瘤患者肺转移关系密切.新辅助化疗可降低骨肉瘤组织中β-catenin蛋白的异常表达,可在一定程度上反映新辅助化疗的疗效.
关键词： 骨肉瘤 肺转移 β-catenin蛋白 免疫组织化学 新辅助化疗 -
β-catenin蛋白在颈椎间盘突出症中的表达及临床意义
目的：研究颈椎间盘突出症患者及正常颈椎间盘中β-catenin 蛋白的表达，从而分析其临床意义。方法采用免疫组化 SP 方法分别检测16例颈椎间盘突出症患者，5例同期因颈段脊柱创伤手术治疗患者的间盘组织中β-catenin 蛋白的表达，从而分析其临床意义。结果β-catenin 蛋白在退变颈椎间盘组织中有高表达，而对照组正常颈椎间盘组织中无表达，两组间有统计学差异（P ＜0．01）。结论颈椎间盘退变过程中β-catenin 蛋白起一定作用。
关键词： 颈椎间盘突出症 免疫组化 β-catenin蛋白 -
电针对膝关节骨性关节炎大鼠关节软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达的影响
目的:观察电针对膝关节骨性关节炎大鼠关节软骨内Wnt3a、β-catenin蛋白表达的影响.方法:32只清洁级健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、DKK1组和电针组,用4％木瓜蛋白酶诱导大鼠膝关节骨性关节炎模型,分别于造模成功后5周和7周取材,观察大鼠膝关节软骨形态变化以及Western Blot法检测大鼠关节软骨中Wnt3a、β-catenin含量的变化.结果:正常组大鼠在5周和7周时,关节软骨内Wnt3a蛋白呈低表达,分别为0.233±0.04和0.193±0.03;而各造模组大鼠,在这两个时间点,关节软骨内Wnt3a蛋白含量均有不同程度的升高,其中电针组、DKK1组均较模型组有所降低,且具有统计学意义(P＜0.05),而此两组间比较无差异(P＞0.05).正常组大鼠在5周和7周时,关节软骨内β-catenin蛋白呈低表达,分别为0.163±0.04和0.143±0.03;而各造模组大鼠,在这两个时间点,关节软骨内β-catenin蛋白含量均有不同程度的升高,其中电针组、DKK1组均较模型组有所降低,且具有统计学意义(P＜0.05),而此两组间比较无差异(P＞0.05).结论:电针可能是通过下调Wnt3a、β-catenin蛋白表达、抑制Wnt信号通路,进而保护受损的关节软骨,改善膝关节骨性关节炎大鼠的关节结构和功能状态.
关键词： 膝关节骨性关节炎 针刺 Wnt3a蛋白 β-catenin蛋白 Wnt信号通路 -
EGCG经Wnt1-β-catenin通路抑制NP69-LMP1细胞的增殖
目的:探讨表没食子儿荼素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)体外抑制潜伏性膜蛋白1转化鼻咽上皮细胞NP69 (NP69-LMPl)增殖的机制.方法:采用MTT法检测EGCG抑制NP69-LMP1细胞增殖的IC50值；选用细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验和平皿克隆形成实验观察EGCG抑制NP69-LMP1细胞增殖的作用；采用Western-blot检测Wnt1、β-catenin的表达及磷酸化.结果:EGCG抑制NP69-LMP1细胞增殖的IC50值为47.7mg· L-1; EGCG对NP69-LMP1细胞增殖的抑制作用呈浓度和时间依赖性(n=3,P＜0.05).EGCG呈浓度依赖性抑制Wnt1和β-catenin蛋白的表达,促进3-catenin蛋白的磷酸化.结论:EGCG通过降低Wnt1和β-catenin蛋白表达,增加β-catenin蛋白磷酸化水平,发挥对NP69-LMP1细胞增殖的抑制作用.
关键词： EGCG NP69-LMP1细胞 Wnt1蛋白 β-catenin蛋白 细胞增殖 -
Wnt/β-catenin信号通路在双酚A暴露对子鼠雄性生殖细胞表达
目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路蛋白在出生前后双酚A(BPA)暴露对子鼠雄性生殖表达.方法 ICR孕鼠饮水染毒,自受孕0天随机分为:溶剂对照组、100 nmol/LBPA组、300nmol/LBPA组;雄性仔鼠出生后6周处死,取睾丸组织,免疫组化检测β-catenin、DKK1蛋白的表达.结果 免疫组化结果显示,与溶剂对照组比较,BPA暴露组β-catenin、DKK1蛋白表达明显增加,多分布在精原细胞和睾丸间质细胞中,且间质细胞强阳性.结论 Wnt/β-catenin信号通路蛋白可能参与了BPA暴露对子鼠雄性生殖细胞表达影响.
关键词： 双酚A 睾丸生殖细胞 β-catenin蛋白 DKK1蛋白 -
经典Wnt信号途径相关因子与大肠癌分期的关系
目的:探讨经典Wnt信号途径相关因子与大肠癌分期的关系.方法:搜集2013年1月1日至2014年1月1日皖南医学院第一附属医院胃肠外科收治的46例大肠癌患者的临床资料、血清样本及病理组织标本,根据Dukes分期分为四组.搜集10例正常的肠黏膜组织标本作为对照组1,应用免疫组化法检测大肠癌及正常肠黏膜组织中Wnt-2蛋白、β-catenin蛋白、Axin蛋白、APC蛋白的表达.搜集15例健康人的血清样本作为对照组2,应用酶联免疫吸附试验检测大肠癌患者和对照组2血清中Wnt-2蛋白、Axin蛋白的表达.结果:Wnt-2、β-catenin在大肠癌组织中高表达,Axin、APC在大肠癌组织中低表达,且各个分期之间差异有统计学意义;46例大肠癌患者血清中Wnt-2浓度明显高于健康人,各个分期之间的差异也有统计学意义.Axin血清浓度低于健康人,但是各个分期之间的差异无统计学意义.结论:经典Wnt信号途径相关蛋白的表达与大肠癌Dukes分期有关,经典Wnt信号途径相关因子可作为大肠癌筛查的血清学辅助指标,有助于提高大肠癌检出的灵敏度.
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美洛昔康抑制人结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin信号的关系研究
目的：研究美洛昔康( meloxicam,Mel)对人结肠癌细胞LoVo增殖抑制作用及其机制。方法以人结肠癌细胞株LoVo为研究对象,体外药物敏感试验(结晶紫染色)和流式细胞术( FCM)分析Mel对细胞的增殖抑制作用；流式细胞术和HE染色检测Mel对细胞凋亡的影响；萤光素酶报告质粒检测Mel 对 Wnt/β-catenin 通路信号转导的影响；Western blot检测Mel对细胞内β-catenin蛋白水平的影响。结果与对照组相比,Mel能抑制LoVo细胞增殖,72 h、100μmol· L-1 Mel的细胞抑制率高达(57．635±3．86)%(t=10．044,P=0．001)；Mel能诱导 LoVo 细胞凋亡,24 h、60μmol · L-1 Mel的细胞凋亡率达到(33．6 ± 1．7)%( t =30．166, P =0．001)；Mel能降低TCF/LEF及Myc/Max报告质粒的萤光素酶活性,24 h、60μmol · L-1 Mel 可使 TCF/LEF 和 Myc/Mac报告的荧光素酶活性分别降至(40．05± 2．79)%( t =14．864, P =0．001)和(35．9±2．38)%( t =16．904, P =0．001)；Mel能下调细胞内β-catenin 蛋白水平,40μmol · L-1 Mel在24、48 h时,可将β-catenin蛋白水平分别降至(71±3．78)%( t =7．353, P =0．003)、(52．66±3．57)%( t =11．724,P=0．001)。结论 Mel能抑制LoVo细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与抑制 Wnt /β-catenin 通路信号转导,降低细胞内β-catenin蛋白水平有关。
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振荡电场对脊髓损伤大鼠β-catenin蛋白表达和神经元再生的影响
目的 观察振荡电场对脊髓损伤大鼠β-catenin蛋白表达规律和神经元再生的影响.方法 60只SD大鼠采用改良Allen′s打击法建立脊髓损伤模型,随机分为对照组和实验组.实验组施加振荡电场干预,对照组只置入振荡电场刺激器而不给予干预.建模成功后分别在3、7、14 d取大鼠脊髓,行HE染色观察脊髓大体形态变化,采用Western blot和免疫组化技术检测脊髓中β-catenin蛋白表达规律,行免疫荧光检测观察神经元变化情况,并在取材前对两组大鼠行Basso-Beattle-Bresnahan(BBB)行为学评分.结果 Western blot和免疫组化结果均显示,3 d时两组脊髓灰质内β-catenin蛋白均高表达,随时间延长表达量逐渐减少,同时实验组在各时间点β-catenin蛋白表达量均高于对照组(P<0.05).神经元的表达在3~14 d时呈现递增的趋势,但实验组神经元在表达数量上明显优于对照组,同时细胞形态更加规则.两组BBB评分3、7 d时差异无统计学意义,而14 d时,实验组BBB评分明显高于对照组(P<0.05).结论 振荡电场可以提高大鼠脊髓损伤区域β-catenin蛋白表达量,并促进神经元再生,从而改善受损脊髓神经功能.
关键词： 振荡电场 脊髓损伤 大鼠 β-catenin蛋白 神经元 -
β-catenin、DKK-1蛋白在出生前后双酚A暴露的子鼠雄性生殖细胞中的表达
目的：探讨 Wnt/β-catenin 信号通路主要蛋白(β-catenin、DKK-1)在出生前后双酚A(BPA)暴露的成年子鼠雄性生殖细胞中的表达及意义。方法自受孕第0天(PGD0),ICR孕鼠饮水BPA染毒,随机将孕鼠分为溶剂对照组、BPA低剂量(10 nmol/L )组、BPA中剂量(50 nmol/L)组、BPA高剂量(300 nmol/L)组,每组6只。雄性仔鼠出生后继续饮水染毒,剂量同上,6周(PGD42)处死,取睾丸组织,计算睾丸系数；免疫组化和Western blot法检测β-cate-nin、DKK-1蛋白的表达。结果 BPA暴露组较溶剂对照组仔鼠睾丸脏器系数降低,β-catenin、DKK-1蛋白表达明显增加；免疫组化显示,β-catenin、DKK-1蛋白多位于睾丸间质细胞和精原细胞中。结论β-catenin、DKK-1可能参与了出生前后BPA暴露对子鼠雄性生殖细胞发育的影响。
关键词： 双酚A β-catenin蛋白 DKK-1蛋白 睾丸生殖细胞 -
散发性结直肠腺癌APC、β-catenin基因的表达及其意义
目的探讨APC、β-catenin在散发性结直肠肿瘤发生、发展中的作用和意义.方法采用SP免疫组化方法检测55例散发性结直肠腺癌、33例结直肠腺瘤组织标本中APC、β-catenin基因蛋白产物的表达水平.结果 APC基因蛋白产物在结直肠腺癌组织中阳性表达率(23.6%)明显低于正常结直肠黏膜组织(86.7%)和结直肠腺瘤组织(72.7%),差异有显著性(P<0.05).结直肠腺瘤、结直肠腺癌组织中β-catenin阳性表达率(69.7%、81.8%)明显高于正常结直肠黏膜组织(0%),差异有显著性P<0.05.结直肠腺癌中APC的表达与β-catenin的表达呈负相关关系γ=-0.514,P<0.05.结论 APC、β-catenin基因在散发性结直肠腺癌的发生、发展过程中有重要作用.散发性结直肠腺癌组织中β-catenin细胞核聚集的主要原因可能是APC蛋白产物功能的失活.β-catenin细胞核异位表达是散发性结直肠腺癌发生发展过程中的早期改变.
关键词： APC蛋白 β-catenin蛋白 结直肠肿瘤 散发性结直肠肿瘤 免疫组织化学 -
长链非编码RNA TINCR、Wnt5a蛋白及β-catenin蛋白在重度子痫前期胎盘组织中的表达及临床意义
目的:研究重度子痫前期(SPE)患者胎盘组织中终末诱导分化长链非编码RNA-TINCR(TINCR)、Wnt5a蛋白、β-catenin蛋白的表达及临床意义.方法:选取2016年4月至2018年4月于中国医科大学附属盛京医院妇产科行剖宫产分娩的SPE患者30例(SPE组)和正常妊娠孕妇30例(对照组).Real-time PCR(RT-PCR)法检测患者胎盘组织中TINCR相对表达水平,Western blot法及免疫组化法检测胎盘组织中Wnt5a蛋白、β-catenin蛋白的表达及定位情况.分析母婴不良预后与三者表达水平的相关性.结果:RT-PCR结果显示,SPE组胎盘组织中TINCR相对表达水平高于对照组,差异有统计学意义(2.424±1.125 vs 1.128±0.536,P<0.001).Western blot结果显示,Wnt5a蛋白、β-cate-nin蛋白均表达于胎盘组织中,SPE组胎盘组织中Wnt5a、β-catenin蛋白表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001,P<0.01).免疫组化法显示,胎盘组织的细胞滋养细胞和合体滋养细胞细胞中均有Wnt5 a蛋白、β-catenin蛋白表达,其中Wnt5 a蛋白主要在合体滋养细胞的细胞质中表达,β-catenin蛋白主要在细胞滋养细胞的细胞质中表达.TINCR高表达及Wnt5 a蛋白、β-catenin蛋白低表达可能与孕妇入院平均动脉压有关.结论:TINCR高表达及Wnt5 a蛋白、β-catenin蛋白低表达可能参与PE的发病机制.
关键词： TINCR Wnt5a蛋白 β-catenin蛋白 子痫前期 滋养细胞 -
脑缺血再灌注后大鼠海马Wnt7b的表达
目的 研究成年大鼠脑缺血再灌注后海马齿状回颗粒细胞下层(SGZ) Wnt7b的表达.方法 将44只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组和脑缺血再灌注组,线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,缺血90 min,术后检测神经功能缺失和脑梗死,在脑缺血再灌注后1、3、7、14 d取大鼠海马组织.RT-PCR技术检测Wnt7b mRNA表达水平；免疫荧光技术检测海马Wnt7b蛋白及β-catenin蛋白表达水平.结果 脑缺血后,大鼠出现严重的脑梗死和神经功能障碍,随再灌注时间延长,大鼠神经功能得到修复.再灌注7d后,健侧脑组织海马Wnt7b mRNA表达上调(P＜0.05),缺血侧脑组织海马Wnt7b mRNA的表达明显上调(P＜0.01).Wnt7b主要分布于SGZ附近,阳性细胞增多(P＜0.01),且该脑区的细胞内β-catenin阳性细胞数目增多(P＜0.01).结论 缺血性脑损伤可刺激Wnt7b在成年海马SGZ的表达上调,Wnt7b可能通过经典Wnt通路参与调节脑缺血后成年海马SGZ的神经发生.
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转染miR-214抑制物的口腔鳞癌细胞SCC 15增殖、迁移、侵袭能力变化及其机制
目的：观察转染miR-214抑制剂的口腔鳞癌SCC15细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化，并探讨其机制。方法取体外培养的口腔鳞癌SCC15细胞，分为观察组、阴性对照组和空白对照组，观察组和阴性对照组分别用Lipofectamine2000转染miR-214抑制物、无关序列，空白对照组不转染。采用实时荧光定量PCR法检测转染24 h时各组细胞中miR-214的表达，用CCK-8法观察转染24、48、72 h各组细胞增殖情况，用划痕实验观察转染24 h时各组细胞迁移能力，用Transwell实验观察转染24 h时各组侵袭能力，用Western blotting法检测转染24 h时各组细胞中的Wnt通路拮抗因子Dickkopf相关蛋白-3（DKK-3）及Wnt通路关键基因β-catenin蛋白。结果转染24 h时，与阴性对照组和空白对照组相比，观察组细胞 miR-214相对表达量低，划痕愈合百分比低，穿膜细胞数少，β-catenin蛋白相对表达量低，DKK-3蛋白相对表达量高（P均＜0．05）。转染48、72 h观察组OD值低于阴性对照组和空白对照组（P均＜0．05）。结论转染miR-214抑制物的口腔鳞癌SCC15细胞增殖、迁移及侵袭能力下降。其机制可能是因为转染miR-214抑制物能抑制Wnt／β-catenin信号通路相关蛋白DKK-3、β-catenin蛋白表达。
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SIRT1-shRNA 慢病毒表达载体转染对A549细胞生物学行为的影响
目的：探讨SIRT1-shRNA慢病毒表达载体转染对人非小细胞肺癌A549细胞SIRT1基因表达、黏附能力、迁移能力及E-cadherin、β-catenin mRNA和蛋白表达量的影响。方法构建SIRT1-shRNA慢病毒表达载体，并用其转染A549细胞。对照组转染277空载体，观察组转染277-iSIRT1。用RT-PCR法检测两组细胞SIRT1 mRNA表达，用细胞黏附实验检测两组细胞黏附能力，划痕实验检测细胞迁移能力，RT-PCR法检测细胞内E-cadherin、β-catenin mRNA表达，Western blot法检测细胞内E-cadherin、β-catenin蛋白表达。结果观察组、对照组A549细胞SIRT1 mRNA分别为0．48±0．26、1．00±0．00（P＜0．05），黏附细胞数分别为（196．6±9．8）、（125．6±9．8）个（P＜0．05），细胞相对迁移率分别为65％±2％、100％±0（P＜0．05），E-cadherin蛋白表达量分别为1．27±0．16、1．00±0．00（P＜0．05），β-catenin蛋白表达量分别为1．24±0．13、1．00±0．00（P＜0．05）。结论 SIRT1-shRNA慢病毒表达载体可明显下调A549细胞SIRT1表达，提高其下游基因E-cadherin、β-catenin mRNA和蛋白表达量，增强细胞黏附能力，降低细胞迁移能力。
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ABCE1基因的siRNA转染对肺癌NCI-H446细胞E-cadherin、β-catenin表达的影响
目的 探讨ABCE1基因的siRNA转染对肺癌NCI-H446细胞E-cadherin、β-catenin表达的影响.方法 将ABCE1基因的SiRNA表达质粒Si-1、Si-N转染入肺癌NCI-H446细胞,分别为Si-1组、Si-N组.另设正常对照组.用蛋白质印迹和半定量RT-PCR法检测转染后不同时点三组细胞的ABCE1蛋白、mRNA.用免疫组化ABC法检测E-cadherin、β-catenin.结果 Si-1组转染96 h后ABCE1 mRNA仅为正常对照组的24.35%,ABCE1蛋白仅为正常对照组的40.82%.Si-1组细胞E-cadherin、β-catenin表达明显高于正常对照组和Si-N组.结论 ABCE1基因的siRNA转染能上调肺癌NCI-H446细胞黏附因子E-cadherin、β-catenin的表达.
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NK细胞对非小细胞肺癌细胞NCI-H292的杀伤作用及对其β-catenin蛋白表达的影响
目的 探讨自然杀伤(NK)细胞对肺癌细胞系NCI-H292的杀伤作用及对癌细胞中β-catenin蛋白表达的影响.方法 无菌采集健康人外周血,培养NK细胞(NK组),取培养14 d后的NK细胞,调整细胞浓度为5×106/mL,按1:5的比例接种到NCI-H292细胞(NK+NCI-H292组)培养板共培养24 h,单独培养NCI-H292细胞(NCI-H292组)24 h.采用CCK-8法测算NK细胞对肺癌细胞系NCI-H292的杀伤活性,采用Western blotting法检测NCI-H292细胞中β-catenin蛋白的表达.结果 NK细胞对NCI-H292细胞的杀伤率为96.720%±1.081%,与NK及NCI-H292组比较,NK+NCI-H292组β-catenin表达降低(P均<0.01).结论 NK细胞对NCI-H292细胞具有杀伤力,同时能够抑制NCI-H292细胞中β-catenin蛋白的表达.
