首页 > 文献资料
-
Klotho基因对糖尿病肾病细胞凋亡作用及百令胶囊对其影响研究
目的 研究抗衰老基因Klotho、p21和p53凋亡基因对糖尿病肾病(DN)细胞凋亡的作用,以及百令胶囊对其的影响.方法 将124例DN患者随机分为常规组(61例)和观察组(63例),另收集65例同意受试的健康体检人员为对照组.常规组给予降糖、降脂等基础治疗,观察组在此基础上口服百令胶囊,对照组口服淀粉安慰剂.采静脉血分析三组治疗前后Klotho蛋白和Klotho-mRNA、p21蛋白和p21-mRNA、p53蛋白和p53-mRNA表达.收集尿液检测肾损伤标志性蛋白[尿白蛋白(U-Alb)、尿β2微球蛋白(U-β2-MG)、尿视黄醇结合蛋白(U-RBP)、尿白蛋白排泄率(UAER)]及尿糖、尿磷(UP)、空腹血糖(FBG)和肾小球滤过率(GFR)等指标情况.结果对照组所有检测指标治疗前后比较,差异无统计学意义(P>0.05).观察组治疗10周后,Klotho蛋白和Klotho-mRNA高表达,p21蛋白和p21-mRNA低表达,且U-Alb、U-RBP、U-β2-MG和UAER下降,UP增高,与常规组比较,差异有统计学意义(P<0.05).但FBG、尿糖值常规组与观察组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 Klotho蛋白和Klotho-mRNA高表达,p21蛋白和p21-mRNA低表达可延缓DN病理进程,百令胶囊可能通过上调K-mRNA表达,抑制肾p21表达而降低肾小管上皮细胞凋亡率,同时还能提高UP排泄,降低蛋白尿而达到肾脏的保护作用.
-
基于Klotho基因的生物学效应探讨“肾藏精”的科学内涵
Klotho基因是一种与抗衰老有关的基因,该基目对人体衰老、生长发育、生殖、骨及脂类代谢等均有重要作用.Klotho基因的生物学效应与中医学“肾藏精”理论有着众多相近之处,如主生长发育、主生殖、主水液代谢、主骨代谢等.从该基因的生物学效应探讨Klotho基因与肾精的关系,认为Klotho基因是肾精的重要成分.
-
福辛普利和缬沙坦抑制Ang Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞klotho基因表达下调
目的 探讨福辛普利(Fos)和缬沙坦(Val)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)抑制NRK-52E细胞klotho基因表达的干预作用及klotho与转化生长因子-β1(TGF-β1)的关系.方法 将大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)分为对照组、AngⅡ(10-7mol/L)组、AngⅡ分别再加Fos(10-5mol/L)组、Val(10-5mol/L)组和Fos+Val组,培养24 h后,用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测klotho和TGF-β1 mRNA表达;用免疫组织化学法和Western blot检测klotho和TGF-β1蛋白表达.对klotho和TGF-β1蛋白表达进行直线相关分析.结果 (1)AngⅡ诱导NRK-52E中TGF-β1mRNA表达上调,同时使klotho mRNA表达下调,经Fos或Val或Fos+Val干预后,TGF-β1 mRNA表达明显受抑制,而klotho mRNA显著上调表达(P<0.05).(2)Fos、Val和Fos+Val均明显上调AngⅡ诱导的klotho蛋白低表达(P<0.05),同时抑制TGF-β1蛋白高表达(P<0.05).(3)klotho和TGF- β1蛋白表达呈直线负相关(r=-0.717,P<0.05).结论 福辛普利和缬沙坦可上调AngⅡ诱导的klotho基因低表达,抑制TGF-β1高表达,klotho基因mRNA表达增强可能与TGF-β1表达下调有关.
-
Klotho基因过表达对小鼠急性肾损伤肾脏血管内皮生长因子表达的影响
目的 通过观察Klotho基因过表达对肾脏血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响,进一步探讨Klotho基因对小鼠急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的保护作用机制.方法 构建可稳定高效表达Klotho基因的慢病毒载体,通过病毒转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)技术获得高表达Klotho基因的BMSCs (overexpression of Klotho gene in BMSCs,BMSCs-Klotho)和对照空载体BMSCs(expression of empty vector in BMSCs,BMSCs-EV).采用小鼠双侧股肌内注射50％甘油(8 ml/kg)导致横纹肌溶解的方法建立AKI模型.30只雄性C57BL/6小鼠随机分为5组,每组6只:正常对照(control,CON)组、PBS干预(AKI with PBS intervention,AKI+PBS)组、BMSCs-Klotho干预(AKI with BMSCs-Klotho intervention,AKI+BMSCs-Klotho)组、BMSCs-EV干预(AKI with BMSCs-EV intervention,AKI+BMSCs-EV)组和BMSCs干预(AKI with BMSCs intervention,AKI+BMSCs)组,所有干预均在造模后6h实施.各组小鼠均在干预治疗3天后处死.常规生化检测血清肌酐(serum creatinine,Scr)及尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平,利用免疫组织化学法、蛋白印迹法检测肾脏VEGF的表达.结果与 CON组比较,AKI+PBS组、AKI+BMSCs-Klotho组、AKI+BMSCs-EV组和AKI+BMSCs组血清检测Scr (F =370.705,P＜0.001;P＜0.001;P＜0.001;P＜0.001)和BUN(F=307.656,P＜0.001;P＜0.001;P＜0.001;P＜0.001)水平均升高;AKI+BMSCs-Klotho组上述指标低于AKI+PBS组、AKI +BMSCs-EV组及AKI+BMSCs组(Scr:P＜0.001;P＜0.001;P＜0.001;BUN:P＜0.001;P＜0.001;P＜0.001).蛋白印迹法与免疫组织化学法均检测到AKI+PBS组的肾脏VEGF的表达明显低于CON组(蛋白印迹:P＜0.001;免疫组化:P＜0.001).AKI+BMSCs Klotho组的肾脏VEGF表达高于AKI+PBS组、AKI+BMSCs-EV组和AKI+BMSCs组(蛋白印迹:P＜0.001;P＜0.001;P＜0.001;免疫组化:P＜0.001;P＜0.001;P＜0.001),与CON组比较无统计学差异(蛋白印迹:P=0.884;免疫组化:P=0.809). 结论 Klotho可能通过上调肾脏VEGF表达对AKI小鼠起肾脏保护作用.
-
Klotho 基因及其与心血管疾病关系研究进展
Klotho 基因是一种与人类衰老密切相关的新基因,其主要在肾脏和脑脉络膜中表达,其分泌性蛋白是一种与衰老有关的激素,为此推测该基因表达可能对衰老相关性疾病(如老年高血压、冠心病、动脉硬化等)的发生发展起作用.本文就该基因与心血管疾病的关系研究新进展进行综述分析,以探寻其在心血管疾病中的发病分子生物学机制,为开展基因水平上预防和早期干预心血管疾病研究提供新线索.
-
Klotho基因在胃癌组织中的表达及意义
目的:探讨Klotho基因在胃癌与癌旁组织中蛋白表达水平的差异及其与胃癌临床病理特征的关系.方法:采用免疫组织化学EnVision二-步法,检测Klotho蛋白在75对胃腺癌与其癌旁组织芯片中的表达情况,并结合临床病理资料进行统计分析.结果:胃癌组织中Klotho蛋白表达阳性率(76.0％)低于癌旁组织(90.7％)(P＜0.05).胃癌组织中Klotho的蛋白表达与胃癌的临床分期、淋巴结转移呈负相关(P＜0.05),与患者性别、年龄、肿瘤大小、病理分级等的相关性无统计学意义(P＞0.05).结论:Klotho基因在胃腺癌中低表达,可能参与了胃癌的转移与进展,这为判断胃癌预后及有无淋巴结转移提供参者依据.
-
Klotho与β-Catenin在食管癌组织中的表达及临床意义
目的:研究Klotho与β-Catenin蛋白在食管癌与癌旁组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法:采用免疫组织化学EnVision二步法,检测Klotho与β-Catenin蛋白在75对食管鳞状细胞癌与其癌旁组织芯片中的表达情况,并结合临床病理资料进行统计分析.结果:Klotho在食管癌中表达的阳性率明显低于癌旁组织(14.9％ vs 63.4％,P＜0.05),Klotho 的表达与TNM分期、浸润深度明显相关(均P＜0.05).β-Catenin在食管癌中表达的阳性率明显高于癌旁组织(80.0％ vs 16.4％,P＜0.05),β-Catenin的表达与淋巴结转移、TNM分期明显相关(均P＜0.05).Klotho与β-Catenin在食管癌中的表达成负向关(r=-0.276,P＜0.05).结论:Klotho与β-Catenin在食管鳞状细胞癌与癌旁组织中的表达阳性率不同,差异均具有显著性,联合检测癌组织中Klotho与β-Catenin的表达可为食管癌的进展与预后提供重要的参考依据.
关键词： 食管鳞状细胞癌 组织芯片 Klotho基因 β-catenin蛋白 -
Klotho基因多态性与老年高血压患者靶器官损害的相关性分析
目的 通过分析klotho G395A,F352V,C370S三个位点的等位基因与单核苷酸多态性(SNP)在老年性高血压人群中的分布情况,探究klotho基因对高血压患者造成靶器官损害的相关特性.方法 选取2013年1月~2016年1月于河北港口集团有限公司港口医院神经内科老年高血压患者104例,其中男性54例,女性50例,平均年龄(67.32±7.32)岁.按是否合并冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病,CHD)分为两组,即高血压合并CHD组(n=57,男性30例,女性27例)和高血压未合并CHD组(n=47,男性24例,女性23例).再按是否发生肾损害分为高血压合并肾损害组(n=66,男性35例,女性31例)和高血压未合并肾损害组(n=38,男性19例,女性19例),分别统计各组患者临床资料及klotho的等位基因的分布情况,分析其与心、肾靶器官损害的相关性.结果 在合并CHD和未合并CHD两组患者中,合并CHD组患者年龄较高,而性别,糖尿病及血脂等方面,则无显著差异(P>0.05);对klotho基因G395A SNP的三个等位基因GG,GA,AA的比较中,合并CHD和未合并CHD两组中患者无显著差异;性别比较显示:男性患者AA基因型在合并CHD组中显著高于未合并CHD组,差异有统计学意义(P<0.05).klotho基因F352V SNP中,FV基因型的频率在高血压并发CHD组中较未并发CHD的患者更低,在男性分层中这一差距依然存在,差异有统计学意义(P<0.05);klotho基因SNP C370S的各个等位基因CC,CS,SS在两组中均无显著差异,按性别分层后仍无显著差异(P>0.05).结论 男性高血压患者伴klotho基因G-395A SNP AA等位基因易并发CHD,而携带F352V FV等位基因的男性高血压患者患CHD的概率更低;高血压合并肾损害与klotho基因的相关性不明显.
-
Klotho基因在慢性心力衰竭患者心肌中的表达
目的：探讨慢性心力衰竭（ CHF）患者心肌组织中Klotho基因的表达及其与心肌纤维化的关系。方法心肌组织样本取材于2013年8月至2014年8月在成都军区昆明总医院心脏外科建立体外循环的60例CHF患者，按照纽约心脏联合会（ NYHA）心功能分级将其分为：NYHAⅠ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组，每组患者各20例。运用实时荧光定量反转录－聚合酶链反应（ RT－PCR）检测Klotho基因表达量，同时采用酶联免疫吸附测定（ ELISA）方法检测上述60例患者血清中Ⅰ型C端胶原前肽（PⅠCP）的浓度。并对正常心肌组织及CHF患者心肌组织进行HE染色。结果（1）HE染色显示CHF患者心肌胶原增生；（2）与NYHAⅠ级组比较，Klotho基因在NYHAⅡ级、NYHAⅢ级组的心肌组织中表达明显减少（均P＜0．05），且在NYHAⅢ级组中的表达较NYHAⅡ级组明显减少（P＜0．05）；（3）NYHA Ⅲ级组患者血清中PⅠCP的含量高于Ⅱ级、Ⅰ级组（均P＜0．05），NYHAⅡ级组高于Ⅰ级组（P＜0．05）。结论 CHF患者心肌组织Klotho基因的表达减少可能与随着心功能恶化，其抗衰老作用及抗心肌纤维化作用逐渐减弱有关。
-
骨髓间充质干细胞及Klotho基因移植对慢性缺氧大鼠心脏重构的影响
目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)及抗衰老基因(Klotho基因)移植对慢性缺氧大鼠心脏重构的影响.方法 建立慢性缺氧28 d大鼠心脏重构模型,分为模型组、BMSCs组和Klotho组,并另设正常对照组不给予缺氧处理.分离、培养、鉴定大鼠BMSCs;重组慢病毒介导Klotho基因.模型建立结束后分别通过尾静脉移植BMSCs及Klotho基因至慢性缺氧大鼠体内,4周后用ELISA法检测血清和心肌中Ⅰ型前胶原羟基端肽(PⅠCP)和Ⅲ型前胶原羟基端肽(PⅢCP)的浓度,HE染色法观察心肌细胞的形态,MASSON染色检测心肌胶原含量,Tunel检测心肌细胞凋亡率.采用SPSS 17.0软件进行数据处理.计量资料以均数±标准差(±s)表示,组间比较采用t检验.结果 移植BMSCs和Klotho基因4周后,BMSCs组和Klotho组血清和心肌中的PⅠCP及PⅢCP浓度、胶原容积分数(CVF)和心肌细胞凋亡率均较模型组显著降低(P<0.01).与Klotho组比较,BMSCs组心肌细胞凋亡率显著降低(P<0.01).结论 BMSCs和Klotho基因移植均能有效逆转心脏重构,BMSCs在抗心肌细胞凋亡方面优于Klotho基因.
-
重组腺病毒介导Klotho基因转导对大鼠心力衰竭心肌重构的影响
目的 探讨重组腺病毒介导的Klotho基因转染对大鼠心力衰竭(心衰)进程以及心肌重构的影响,并探讨其机制.方法 SPF级SD大鼠,随机数表法分为5组,即正常对照组(对照组,未给予任何干预),心衰组(只做心衰模型,不给予其他干预),生理盐水组(在心衰模型的基础上尾静脉注射生理盐水,0.5 ml/只),腺病毒载体介导的增强荧光蛋白组(Ad.EGFP组,在心衰模型的基础上用腺病毒载体介导增强荧光蛋白,2×1010 pfu,0.5 ml/只),以及腺病毒载体介导的目的基因组(Ad.Klotho组,在心衰模型的基础上用腺病毒载体介导目的基因,2×1010pfu,0.5 ml/只),每组5只.异丙肾上腺素连续腹腔注射法建立大鼠心衰模型.构建重组腺病毒载体pDC316-CMV-EGFP-rKlotho,标记为Ad.Klotho,并将其转导至相应的心衰大鼠模型.建模第6周,采用超声心动图测定各组大鼠的左心室射血分数(LVEF);多道生理记录仪测定各组大鼠血液动力学变化;检测各组大鼠心肌组织病理学改变;冰冻切片后镜下观察各组大鼠心肌组织荧光蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应评估各组大鼠心肌组织中Klotho基因的表达水平,以及心肌纤维化相关因子Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达水平;ELISA法检测各组大鼠血浆中B型利钠肽(BNP)的表达水平.结果 心衰组、生理盐水组、Ad.EGFP组和Ad.Klotho组大鼠心肌组织苏木素伊红染色均可见心肌细胞断裂、心肌间质增生、心肌细胞肥大和结构改变.对照组大鼠心肌组织病理切片未见上述改变.通过比较发现,Ad.Klotho组大鼠心肌纤维化程度、重构程度以及心肌细胞肥大程度均较心衰组、生理盐水组和Ad.EGFP组低.建模第6周,Ad.Klotho组和Ad.EGFP组大鼠心肌组织中仍可见EGFP绿色荧光表达,而对照组、心衰组和生理盐水组则未见.各组大鼠心肌组织中Klotho、胶原Ⅰ a1和Ⅲa1 mRNA均有表达.其中,对照组和Ad.Klotho组Klotho mRNA表达水平较高,与其他3组比较差异均有统计学意义(P均＜0.05),而心衰组、生理盐水组和Ad.EGFP组间Klotho mRNA表达水平差异无统计学意义.心衰组、生理盐水组和Ad.EGFP组胶原Ⅰ a1、Ⅲa1 mRNA表达水平均较对照组和Ad.Klotho组高(P均＜ 0.05),且三组间比较差异无统计学意义.超声心动图结果示心衰组、生理盐水组、Ad.EGFP组和Ad.Klotho组大鼠总体LVEF为(42.27±3.22)％低于对照组的(72.13±2.97)％(P＜0.01).对照组和Ad.Klotho组心率均高于心衰组、生理盐水组和Ad.EGFP组(P均＜0.05).对照组和Ad.Klotho组左心室内压均高于心衰组、生理盐水组和Ad.EGFP组(P均＜0.01).对照组和Ad.Klotho组左心室舒张末压均低于心衰组、生理盐水组和Ad.EGFP组(P均＜0.01).对照组和Ad.Klotho组左心室内压大上升速率(+dp/dtmax)均大于心衰组、生理盐水组和Ad.EGFP组(P均＜0.05).对照组和Ad.Klotho组左心室内压大下降速率(-dp/dtmax)亦均大于心衰组、生理盐水组和Ad.EGFP组(P均＜0.05).心衰组、生理盐水组、Ad.EGFP组和Ad.Klotho组大鼠心脏体质量指数分别为(6.50±0.32)、(6.46±0.18)、(6.34±0.15)和(5.23±0.19) g×l 000/g均明显高于对照组(2.84±0.25)g×1 000/g,P均＜0.05,但Ad.Klotho组又明显低于心衰组、生理盐水组和Ad.EGFP组(P＜0.05),心衰组、生理盐水组和Ad.EGFP组间差异则无统计学意义.心衰组、生理盐水组、Ad.EGFP组和Ad.Klotho组大鼠血清中BNP水平均明显高于对照组(P均＜0.01),但Ad.Klotho组明显低于心衰组、生理盐水组和Ad.EGFP组(P均＜0.05).结论 腹腔注射异丙肾上腺素可成功建立大鼠心衰模型.Klotho基因可抑制心肌纤维化、心肌肥大及胶原纤维增生.
-
Klotho 基因多态性与老年人低骨量的相关性研究
目的 研究klotho基因G395A、F352V位点与新疆维、汉两民族老年人(≥60岁)低骨量的相关性,探讨该基因多态性在维、汉两民族中的分布差异. 方法 收集入住新疆医科大学第一附属医院干部病房的维、汉老年患者324例,其中低骨量病例组(骨量减低组 +骨质疏松组) 164 例,对照组(骨量正常值) 160 例. 采用多重 SNaPshot SNP ( Single nucleotide polymorphisms)分型技术对klotho基因G395A、F352V位点进行基因分型. 结果 (1)Klotho基因多态性在病例组与对照组间整体比较,差异无统计学意义(P>0.05). (2)在维、汉两民族间整体比较,G395A多态性的分布差异无统计学意义(P>0.05),维吾尔族人群F352V多态性基因型TT及等位基因T分布频率均低于汉族,差异具有统计学意义(P<0.05);汉族人群TG、GG基因型及等位基因G频率均低于维吾尔族,差异具有统计学意义(P<0.05). (3)在男、女性别间比较,G395A、F352V多态性分布差异均未见有统计学意义(P>0.05). 结论 Klotho基因G395A、F352V位点多态性可能不是新疆地区维、汉老年人群低骨量发生的危险因子,F352V多态性在维、汉不同民族中的分布具有差异性.
-
Klotho蛋白对草酸钙肾结石大鼠肾脏氧化应激的影响
目的 探讨Klotho蛋白对草酸钙肾结石大鼠肾小管上皮细胞氧化应激的影响及其机制.方法 2016年11-12月选取30只6～8周龄雄性SD大鼠,分为正常组、结石组、药物组,每组10只.正常组每天生理盐水灌胃;结石组使用1％乙二醇和2％氯化铵诱导法建立大鼠肾草酸钙结石模型;药物组自由饮水,并用含1％乙二醇和2％氯化铵溶液灌胃的同时,给予2.5 mg福辛普利+15.0 mg缬沙坦溶于蒸馏水,每次2ml灌胃.喂养4周后处死各组大鼠.采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠肾组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽(GSH)的含量;RT-PCR法检测Klotho基因和核因子E2相关因子2(Nrf2)基因mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测Klotho和Nrf2蛋白表达水平.结果 结石组MDA含量(12.43±0.43) μmol/mg,明显高于正常组(8.67±0.84)μmol/mg和药物组(7.97±0.81) μmol/mg(均P＜0.05),而药物组与正常组比较差异无统计学意义(P＞0.05).正常组、结石组、药物组的SOD分别为(247.89±2.45)、(109.54 ±4.21)、(189.74±10.47) U/mg,GSH分别为(38.98 ±4.55)、(26.87±3.92)、(31.29±2.54) μmol/mg,CAT分别为(138.47±8.74)、(119.87±8.45)、(127.46±7.45) U/mg,结石组SOD、GSH、CAT含量均低于正常组和药物组(P＜0.05),而正常组和药物组比较差异无统计学意义(均P＞0.05).结石组Klotho mRNA(0.208 ±0.036)和Nrf2 mRNA(0.499±0.086)表达水平明显低于正常组[分别为(1.011 ±0.174)和(1.023 ±0.139),均P＜0.05]和药物组[分别为(1.123±0.248)和(1.148 ±0.089),均P＜0.05].结石组肾组织中Klotho蛋白(0.341±0.127)和Nrf2蛋白(0.201±0.030)低于正常组[分别为(0.750 ±0.140)和(0.558±0.095),均P＜0.05]和药物组[分别为(0.841 ±0.288)和(0.450±0.153),均P＜0.05].结论 福辛普利和缬沙坦可通过上调乙二醇诱导的Klotho基因低表达,降低肾小管上皮细胞损伤,抑制草酸钙晶体黏附成石;Klotho的抗氧化损伤作用可能与Keap1-Nrf2-ARE信号通路被激活有关.
关键词： Klotho基因 核因子E2相关因子2 草酸钙结石 氧化应激 -
Klotho基因超甲基化在硫酸吲哚酚诱导的血管平滑肌细胞成骨转化中的作用机制
目的：从细胞层面探讨Klotho基因超甲基化在硫酸吲哚酚（IS）诱导的血管平滑肌细胞成骨转化中的作用和相关机制。方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞（HASMC），以IS按0、200、500、1000μmol ／L的浓度梯度干预6 d，采用茜素红染色观察钙盐沉积，Real-time 聚合酶链式反应（PCR）和Western 印迹检测平滑肌细胞肌动蛋白α（α-SMA）、smoothin、骨桥蛋白（OPN）、碱性磷酸酶（ALP）、核结合因子α1（Cbfα1）、Klotho和不同DNA甲基化转移酶（DNMT）的mRNA和蛋白表达水平，同时利用焦磷酸测序方法检测HASMC的Klotho基因甲基化率；在IS 1000μmol／L组培养基中加入不同浓度梯度的5-氮杂脱氧胞苷（5Aza-2dc）进行干预，观察茜素红染色、各基因表达水平和Klotho基因甲基化率的改变。组间均数比较采用独立样本t检验，组间率的比较采用卡方检验。结果IS 1000μmol／L组HASMC细胞外基质呈红色，细胞结节处浓染，为钙盐沉积染色阳性。IS可以下调HASMC的α-SMAmRNA和蛋白及 smoothin 表达水平，上调OPN、ALP的mRNA和蛋白表达水平，使HASMC逐渐丧失平滑肌细胞表型而发生成骨转化。与对照组比较，IS 200、500、1000μmol ／L刺激6 d可显著升高HASMC的Klotho基因甲基化率（9±1％与4±0．7％，t＝5．38，P ＜0．01；18±1．3与4±0．7％，t＝6．92，P＜0．01；41±2％与4±0．7％，t＝9．26，P＜0．001）。IS 500、1000μmol ／L可显著下调HASMC 的Klotho mRNA和蛋白表达水平。同时IS 1000μmol ／L可显著上调 HASMC 的DNMT1 mRNA和蛋白表达水平。5Aza-2dc 10μmol ／L干预可减轻IS诱导的细胞外钙盐沉积，上调α-SMA蛋白、smoothin表达水平并下调Cbfα1蛋白表达水平，同时减低HASMC的Klotho基因甲基化率（20±1％与41±2％，t＝6．98，P＜0．01）、上调HASMC的Klotho 蛋白表达水平。结论 IS可通过上调血管平滑肌细胞DNMT表达，启动 Klotho 基因超甲基化，进而下调 Klotho 基因转录和表达，诱导血管平滑肌细胞成骨转化。
-
富血小板血浆对兔来源脂肪间充质干细胞wnt3基因和klotho基因表达的影响
目的 探讨自体富血小板血浆(PRP)对兔来源脂肪间充质干细胞(ADSCs) wnt3基因和klotho基因启动表达的影响.方法 获取新西兰大白兔附睾脂肪组织中的脂肪干细胞,采用形态学及诱导分化进行细胞鉴定,将细胞培养至第4代,取新西兰大白兔腹主动脉血通过传统2次离心法制备PRP、贫血小板血浆(platelet-poor plasma,PPP),将脂肪干细胞在含PRP(实验组)、含PPP(对照组)及空白全培(空白组)各5％的培养液中分别培养24、48、72h,将各组细胞裂解提取总RNA,做RT-PCR检测2种目的基因wnt3和klotho启动情况.结果 (1)提取的原代兔脂肪干细胞随着细胞增殖,呈梭形漩涡状生长.(2)分别用油红O染色和茜素红染色,均能成功着色.(3)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)结果显示,实验组wnt3基因和klotho基因量明显增多(P＜0.05).结论 通过分离、体外培养所得的细胞经形态学和多向诱导分化,确定为兔来源ADSCs.PRP可促进兔脂肪干细胞增殖并明显提高wnt3基因和klotho基因的表达.
-
雷帕霉素诱发低磷酸盐血症和胰岛素抵抗与mTORC2激活和Klotho基因表达相关
雷帕霉素能够影响肾移植受者体内磷酸盐平衡,诱发胰岛素抵抗,延长动物模型存活时间.Klotho基因是主要的抗衰老基因之一,也能够调控磷酸盐代谢和胰岛素敏感性.因此意大利学者从分子水平分析了雷帕霉素对Klotho基因表达的影响.该研究共纳入100例肾移植受者,分为长期使用雷帕霉素组(50例,试验组1)和长期使用钙调磷酸酶抑制剂组(环孢素48例、他克莫司2例,试验组2);对照组为20名健康人.比较各组间磷酸化和胰岛素抵抗水平以及Klotho基因表达的差异.
-
人类衰老性疾病与Klotho基因的密切关系
Klotho基因是与人类衰老密切相关的基因,该基因表达产物有膜结合型和分泌型2种蛋白异构体,二者分别是体液调节信号蛋白和膜结合受体.klotho基因缺陷鼠可出现一系列与人类衰老相似的多种行为和病理变化:如寿命缩短、性功能障碍、痴呆、白内障、运动失调、肺气肿、动脉粥样硬化、骨质疏松以及免疫功能降低等.使用一定的方法使小鼠重新获得基因,各种症状均能缓解.研究者认为klotho基因敲除鼠是目前研究人类衰老及多种老年病发生、预防和治疗的合适的动物模型.
-
质粒shRNA体内干扰Klotho基因对窦房结通道基因表达的影响
目的 通过质粒shRNA体内干扰,研究Klotho基因与窦房结起搏通道相关基因HCN4及HCN2之间的关系,为病窦综合征的研究提供新思路.方法 取C57BL/6J小鼠25只,分为5组,每组5只:未处理组、质粒shRNA 12 h组、质粒shRNA 24 h组、生理盐水12 h组、生理盐水24h组.质粒shRNA组为尾静脉注射质粒shRNA50μl(1μg/μl),生理盐水组为尾静脉注射生理盐水50μl,未处理组不予任何处理.分别于注射12 h及24h后取窦房结周围组织,行Western blotting检测各组小鼠的Klotho、HCN2、HCN4基因的蛋白表达水平.结果 质粒shRNA 12 h组(0.24±0.09)的Klotho蛋白水平表达量较低,与未处理组(3.19±0.42)及生理盐水12 h组(2.34±0.41) Klotho蛋白表达量相比,差异均存在统计学意义(P值均为＜0.001).质粒shRNA 12 h组(1.55±0.89)的HCN4蛋白水平表达量与未处理组(2.56±0.54)及生理盐水12 h组(3.05±0.46) HCN4蛋白表达量相比差异均存在统计学意义(P值分别为0.015及0.001).结论 小鼠Klotho基因通过其蛋白表达可能会干扰窦房结起搏基因的蛋白表达.
-
高表达Klotho基因对胃癌细胞株GC-7901生长的影响
目的 观察高表达Klotho基因对胃癌细胞株GC-7901生长的影响.方法 构建Klotho载体,胃癌GC-7901细胞分为Klotho组(GC-7901细胞转染pZsGreen1-C1-Klotho载体)、阴性对照组(GC-7901细胞转染空病毒载体)、空白对照组(GC-7901细胞未转染载体).Western blot检测细胞中Klotho蛋白表达,CCK-8法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期.结果 胃癌细胞株GC-7901细胞中Klotho蛋白表达量(0.19±0.01)低于正常胃细胞株GES-1细胞(0.62±0.04),P＜0.05;Klotho组胃癌细胞中Klotho蛋白的表达量(0.81 ±0.12)明显高于阴性对照组(0.24±0.06)和空白对照组(0.22±0.04),P＜0.05;Klotho组胃癌细胞增殖率[(62.26±13.24)％]明显低于阴性对照组[(99.14±21.53)％]和空白对照组[(100.00±1.03)％],P＜0.05;Klotho组胃癌细胞凋亡率[(23.31±2.54)％]明显高于阴性对照组[(4.76±0.15)％]和空白对照组[(4.67±0.13)％],P＜ 0.05;Klotho组胃癌细胞G0/G1期比例[(25.26±2.63)％]明显高于阴性对照组[(4.91±0.17)％]和空白对照组[(4.83±0.16)％],P＜0.05.结论 胃癌细胞中Klotho蛋白呈低表达,Klotho基因的高表达能够降低胃癌细胞增殖,促进胃癌细胞凋亡,抑制细胞周期.
-
Klotho基因及其多态性在肿瘤中的研究进展
人类Klotho基因位于染色体13q12区域，全长约50 kb。 Klotho基因敲除小鼠表现出多种类似人类衰老的相关表型，并且与肿瘤抑制作用密切相关，其基因表达下调及基因多态性与多种肿瘤易患性之间有明显联系，如肺癌、胃癌、胰腺癌、宫颈癌等，反映其在临床诊疗中的重要应用价值。Klotho基因在少数肿瘤中显示出促癌效应，如卵巢癌，这种促癌效应可能与 Klotho 基因涉及众多信号通路，进而在肿瘤发生、发展中表现出组织特异性有关。
