首页 > 文献资料
-
质粒shRNA体内干扰Klotho基因对窦房结通道基因表达的影响
目的 通过质粒shRNA体内干扰,研究Klotho基因与窦房结起搏通道相关基因HCN4及HCN2之间的关系,为病窦综合征的研究提供新思路.方法 取C57BL/6J小鼠25只,分为5组,每组5只:未处理组、质粒shRNA 12 h组、质粒shRNA 24 h组、生理盐水12 h组、生理盐水24h组.质粒shRNA组为尾静脉注射质粒shRNA50μl(1μg/μl),生理盐水组为尾静脉注射生理盐水50μl,未处理组不予任何处理.分别于注射12 h及24h后取窦房结周围组织,行Western blotting检测各组小鼠的Klotho、HCN2、HCN4基因的蛋白表达水平.结果 质粒shRNA 12 h组(0.24±0.09)的Klotho蛋白水平表达量较低,与未处理组(3.19±0.42)及生理盐水12 h组(2.34±0.41) Klotho蛋白表达量相比,差异均存在统计学意义(P值均为＜0.001).质粒shRNA 12 h组(1.55±0.89)的HCN4蛋白水平表达量与未处理组(2.56±0.54)及生理盐水12 h组(3.05±0.46) HCN4蛋白表达量相比差异均存在统计学意义(P值分别为0.015及0.001).结论 小鼠Klotho基因通过其蛋白表达可能会干扰窦房结起搏基因的蛋白表达.
-
HCN2在大鼠外周神经病理性疼痛发生中的作用
目的:初步探讨超极化激活的环核苷酸门控通道2型(HCN2)在外周神经病理性疼痛发生中的作用.方法:将24只健康成年大鼠进行随机分组(n=12):假手术组(Sham)大鼠仅分离左侧14、15脊神经,模型组(SNL)分离脊神经后进行相应的结扎处理,手术7d后用行为学方法进行模型评价;将造模成功的大鼠进行随机分组(n=6):①阴性对照组(Saline),左侧足底注射生理盐水;②阳性对照组(GBPT),腹腔注射加巴喷丁;③实验组(ZD7288),左侧足底注射HCN非特异性阻断剂ZD7288.在给药前以及给药后lh、4h、24h、48h用疼痛行为学实验检测其对神经病理性疼痛的作用;分别取手术前对照组(Control)、假手术组(Sham)和模型组(SNL)大鼠的背根神经节(DRG)(n=6),利用qPCR和Western blot的方法研究造模前后大鼠DRG内HCN2的表达的变化情况.结果:①成功建立大鼠神经痛模型;②与Saline组比较,GBFr组和ZD7288组在注射1h后,均能明显的减轻大鼠神经病理性疼痛的症状(P＜0.01),而GBPT组和ZD7288组之间比较则无差异;③与Control组和Sham组相比较,SNL组大鼠DRG内的HCN2 mRNA表达量明显增加(P＜0.01);与Control组和Sham组相比较,SNL组大鼠DRG内的HCN2通道蛋白表达量显著增加(P＜0.05).结论:HCN2参与外周神经病理性疼痛的发生,并有可能成为治疗神经病理性疼痛一个潜在的新靶点.
-
大鼠骨髓间充质干细胞移植梗死心肌HCN2及HCN4基因的表达
背景:研究表明在多种心脏疾病后的心室肌中HCN2和HCN4表达异常,且与室性心律失常密切相关.骨髓间充质干细胞移植可修复受损心肌,但对梗死后心室离子通道重构的影响仍不清楚.目的:检测大鼠骨髓间充质干细胞移植入梗死心肌后左心室HCN2和HCN4的表达变化.方法:取3周龄SD大鼠5只,Percoll法分离培养骨髓间充质干细胞.成年健康雄性SD大鼠30只,随机分为4组:DMEM组、细胞移植组大鼠建立急性心肌梗死模型,假手术组只穿线不结扎,正常对照组不进行任何干预.造模后4周,DMEM组在梗死边缘区和中心区分5点注入DMEM培养液,细胞移植组同法注入第3代骨髓间充质干细胞悬液200 μL,细胞数5×10~6个.采用RT-PCR及Western-blot法检测左心室HCN2,HCN4在mRNA及蛋白水平的表达.结果与结论:正常心肌区:各组HCN2,HCN4 mRNA及蛋白的表达基本相似(P > 0.05).梗死边缘区:DMEM组HCN2,HCN4 mRNA及蛋白的表达明显多于正常对照组、假手术组(P < 0.05);细胞移植组HCN2,HCN4 mRNA及蛋白的表达明显少于DMEM组(P < 0.05).梗死中心区:DMEM组HCN2,HCN4 mRNA及蛋白的表达明显少于正常对照组、假手术组(P < 0.05);细胞移植组HCN2,HCN4 mRNA及蛋白的表达与DMEM组基本相似(P > 0.05).提示急性心肌梗死后梗死边缘区HCN2,HCN4基因在mRNA和蛋白水平的表达升高,骨髓间充质干细胞移植可能通过下调梗死边缘区HCN2,HCN4的表达来降低心律失常.
-
拉莫三嗪对GHB致失神发作大鼠脑内HCN1、HCN2表达的影响
目的:观察拉莫三嗪对γ-羟丁酸(GHB)致失神发作大鼠脑电及脑内超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN)的亚型HCN1、HCN2表达变化的影响,探讨拉莫三嗪抗失神癫痫的可能作用机制.方法:健康成年雄性SD大鼠,随机分为空白对照组,模型组,拉莫三嗪治疗组(低剂量组为8 mg/(kg·d)、中剂量组为12 mg/(kg·d)、高剂量组为24 mg/(kg· d)),每组7只.空白对照组及模型组每日应用0.25％的甲基纤维素钠溶液灌胃,治疗组每日应用0.25％的甲基纤维素钠溶液配制的浓度为2mg/mL的拉莫三嗪混悬液灌胃.手术埋罡皮层脑电电极.腹腔注射GHB的前体γ-丁内酯(GBL) 200 mg/kg制作大鼠失神发作模型,并监测脑电.免疫组化法检测皮层HCN1及丘脑HCN2的表达.结果:皮层脑电图拉莫三嗪治疗组比模型组失神发作的潜伏期延长,高波幅降低(P＜0.05).模型组皮质HCN1比空白对照组表达减少,而拉莫三嗪高、中剂量组皮质HCN1比模型组表达增加(P＜0.05).模型组丘脑HCN2表达减少,与空白对照组及治疗组相比,差异有统计学意义.结论:拉莫三嗪可以改善GHB致失神发作模型脑电图的异常表现;拉莫三嗪抗失神癫痫作用可能与调节HCN表达有关.
-
HCN2转染MSCs异体移植治疗完全性房室传导阻滞的实验研究
目的 构建HCN2重组载体并转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)以构建起搏细胞,将起搏细胞移植至完全性房室传导阻滞动物模型的左束支,从而改善心脏的传导功能.方法 体外分离并培养大鼠骨髓间充质干细胞,将体外构建的HCN2重组载体用罗氏非脂质体转染试剂转染到骨髓间充质干细胞内.采用射频消融的方法制犬的完全性房室传导阻滞模型,同时置入临时起搏器,调节起搏心率60次/分予以保护.将体外构建起搏细胞原位植入动物模型.起搏细胞移植成功后28天将动物处死,进行组织学研究.结果 体外分离培养的MSCs在含10％胎牛血清的DMEM培养基中生长良好,能够满足细胞转染及转染后细胞移植的需求.MSCs转染质粒后20 h荧光显微镜下观察,可见绿色荧光蛋白的表达,测定转染效率约为30％.组织学研究显示,干细胞可以在宿主体内存活,并表达缝隙连接蛋白CX43、CX45.结论 MSCs转染HCN2后可以有效表达HCN2通道蛋白,MSCs重组细胞心脏移植后能够存活并表达缝隙连接蛋白CX43、CX45.
-
HCN1,HCN2在功能性便秘大鼠结肠的分布及其与Cajal间质细胞的共存关系
目的:观察HCN1,HCN2在功能性便秘(function constipation,FC)大鼠模型结肠上的表达及其与结肠Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)细胞之间的关系,探讨HCN1,HCN2对FC发病的影响.方法:用复方地芬诺酯制造FC大鼠模型,利用免疫组织化学分别对模型组(n=12)、空白组(n=12)大鼠升结肠、横结肠、降结肠黏膜HCN1,HCN2及ICC的表达情况进行检测.结果:模型组和空白组升结肠、横结肠及降结肠均见HCN1,HCN2,c-Kit表达,模型组中HCN1,HCN2,c-Kit表达量明显低于空白组(P＜0.05);HCN1表达在FC大鼠结肠中主要分布在结肠环形肌和纵行肌之间的肌ICC-MY,与c-Kit表达分布基本一致;HCN2在FC大鼠升结肠、横结肠及降结肠均有分布与c-Kit荧光度变化趋势基本一致.HCN2阳性神经元与ICCs的突起距离较近,二者未见细胞共存现象.结论:HCN通道作为一种与自主起博活动密切相关的离子通道,可能参与结肠ICCs的自主起博活动.HCN1,HCN2可能参与结肠运动调控,其数量、功能及分布异常可能与FC发病机制有关.
关键词： 功能性便秘 HCN1 HCN2 结肠Cajal间质细胞 -
1型糖尿病大鼠左心室HCN2和HCN4重构
目的 探讨1型糖尿病大鼠左心室肌HCN2和HCN4的表达时空变化.方法 60只大鼠随机分为正常对照组(N组,n=20)和1型糖尿病组(T1DM组,n=40):腹腔注射链脲佐菌素制作大鼠1型糖尿病模型.90 d后,取左心室肌通过免疫荧光法检测HCN2、HCN4的定位;Western-blot、RT-PCR技术检测HCN2、HCN4在蛋白质及mRNA水平的变化.结果 免疫荧光结果显示HCN2在心室肌细胞膜上呈点状或短线状不连续表达;HCN4未见表达.Western-blot、RT-PCR结果显示T1DM组大鼠HCN2、HCN4在蛋白及mRNA水平表达升高.结论 1型糖尿病大鼠左心室出现离子通道HCN2、HCN4表达升高,导致糖尿病心脏电重构,可能与糖尿病引起的室性心律失常有关.
-
HCN2阳性细胞在小鼠胃肠道肌间神经丛内的分布
目的 探讨超级化激活环核苷酸调控的阳离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel 2,HCN2)阳性细胞在小鼠胃肠道肌间神经丛的分布.方法 成年昆明小鼠的胃肠道,包括胃、小肠、结肠,制作全层铺片,免疫细胞化学染色HCN2阳性细胞、胆碱能神经及Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal, ICCs).结果 成年小鼠胃肠道肌间神经丛的HCN2阳性细胞成簇紧密排列,多数阳性细胞为Dogiel Ⅱ型神经元,阳性产物分布在细胞质和细胞膜,每个神经节内可见数个至数十个阳性细胞;神经突起虽可见HCN2阳性产物,但主要存在于较粗的突起.HCN2阳性神经元分布密度在胃肠道各段存在较大差异(P<0.05):以结肠密度高,胃次之,小肠略低.利用胆碱能神经元标志物胆碱乙酰转移酶(ChAT)和ICCs的标志物(c-kit蛋白)分别与HCN2通道进行双重免疫染色,可见HCN2存在于胆碱能神经元,未见HCN2存在于ICCs的胞体,ICCs的突起与HCN2阳性神经元距离很近.结论 HCN2离子通道广泛表达于肌间神经丛,主要表达于胆碱能神经元,可能参与该神经元调控胃肠神经活动、神经递质的释放以及胃肠功能的调节.
-
HCN2与生物心脏起搏的研究现状
心脏的节律性活动依赖起搏细胞,其起搏特性是由超极化激活的阳离子流形成,这就是目前称为超极化激活环化核苷酸门控通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel, HCN)电流,也称之为起搏电流(funny current,If).HCN2作为HCN基因家族亚型,被认为是心脏起搏细胞产生自律性的重要基础,其中If是心脏起搏细胞产生自动节律的关键,If电流的形成离不开HCN家族基因,因HCN2与心脏起搏的形成和调节关系非常密切,故被称之为起搏基因.近年来对此基因的结构功能以及与生物心脏起搏的关系研究成为热点,就其研究进展本文做一综述.
-
螺内酯对大鼠心肌梗死后梗死周边区超极化活化环核苷酸门控通道表达的影响
目的 了解大鼠急性心肌梗死后梗死周边区心肌中HCN2、HCN4的mRNA和蛋白表达变化,探讨螺内酯对心肌梗死后梗死周边区心肌中HCN2、HCN4表达的影响.方法 通过开胸结扎冠状动脉左前降支的方法成功建立大鼠心肌梗死模型,心梗后24h存活的12只大鼠随机分为心梗组及螺内酯组,6只假手术组的大鼠仅穿线通过左冠状动脉前降支而不结扎动脉.心肌梗死后一周取心梗大鼠的梗死周边区心肌组织,而假手术组取相对应的心肌组织,用荧光定量PCR方法检测HCN2、HCN4的mRNA水平,用Western blot方法检测HCN2、HCN4的蛋白水平.结果 心梗组和螺内酯组较假手术组HCN2、HCN4的mRNA和蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),而螺内酯组较心梗组HCN2、HCN4的mRNA和蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论 急性心肌梗死后1周梗死周边区心肌组织中HCN2和HCN4通道蛋白的表达明显升高,而螺内酯能明显减少急性心肌梗死后梗死周边区心肌组织中HCN2和HCN4通道蛋白的表达.
