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JWA基因通过NFI结合位点特异性
目的众多研究已证明氧化应激造成的DNA损伤与多种重要疾病包括癌症的发生有关.JWA基因不仅与多种化学药物诱导白血病细胞定向分化有关,且可活跃地应答多种环境因素的刺激,如热休克、氧化应激等,JWA可能是一个新的重要的环境应答基因.本研究旨在深入探讨JWA应答环境应激的分子机制.
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青黛复方对K562细胞bcr/abl及JWA基因表达的影响
为了研究不同浓度青黛复方对K562细胞株增殖、凋亡及bcr/abl、JWA基因表达水平的影响,为临床治疗提供理论依据,以不同浓度药物(2.5、5、7.5、10和20 mg/ml)处理K562细胞24小时后,光学显微镜下观察形态学改变;采用半定量RT-PCR技术检测各组bcr/abl及JWA基因在mRNA水平表达的变化.结果发现,随药物作用浓度升高,K562细胞逐渐呈典型凋亡形态学改变;bcr/abl及JWA基因表达呈浓度依赖性下降.结论:青黛复方能部分抑制K562 bcr/abl及JWA基因的表达,其对CML的疗效可能是通过促进细胞凋亡而实现的.
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全反式维甲酸对人肺动脉平滑肌细胞表型和迁移的影响及可能机制
目的探讨全反式维甲酸(atRA)对培养的人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)表型和迁移的影响及可能机制.方法培养的人PASMC株随机分成8组:对照组(A组)、溶媒组(B组)、10%胎牛血清干预组(C组)、atRA干预组分别加入浓度为0.001 μmol/L (D组)、0.01 μmol/L(E组)、0.1 μmol/L(F组)、1 μmol/L(G组)、10 μmol/L (H)组的atRA,干预24 h后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞JWA基因mRNA表达,用改良Boyden小室法检测各组迁移细胞数,用RT-PCR法及免疫细胞化学法检测各组细胞内平滑肌细胞α肌动蛋白(SM-α-actin) mRNA及蛋白表达.结果人PASMC内JWA mRNA表达量A、B、C组分别为0.125±0.014、0.164±0.018、0.164±0.006,3组间比较差异无统计学意义(P均＞0.05);而D组(0.326±0.018)、E组(0.440±0.033)、F组(0.460±0.040)、G组(0.589±0.024)、H组(0.821±0.050)分别与A、B、C组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01);迁移细胞数C组为(30.4±7.4)个/高倍视野(HP),与A组[(7.2±1.9)个/HP]、B组(6.8±2.3)个/HP]比较差异有统计学意义(P均＜0.01);而D组[(21.8±2.9)个/HP]、E组[(17.2±2.3)个/HP]、F组[(14.4±3.5)个/HP]、G组[(12.6±3.4)个/HP]、H组[(8.8±2.4)个/HP]与C组比较差异有统计学意义(P均＜0.01);但G、H组与A、B组比较差异无统计学意义(P均＞0.05);细胞内SM-α-actin 蛋白表达量C组为0.219±0.018,与A组(0.319±0.011)、B组(0.325±0.005)比较差异均有统计学意义(P均＜0.01); E组 (0.328±0.016)、F组(0.386±0.025)、G组(0.442±0.017)、H组(0.501±0.018)与C组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01);而F、G、H组与A、B组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01); 细胞内SM-α-actin mRNA表达量C组为0.144±0.009, 与A组 (0.299±0.023)、B组(0.296±0.041)比较差异有统计学意义(P均＜0.01);而D组(0.487±0.014)、E组(0.501±0.020)、F组(0.611±0.018)、G组(0.774±0.013)、H组(0.851±0.026)与A、B、C组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 atRA能诱导人PASMCs内JWA基因表达增加,使细胞表现为收缩表型,细胞迁移受到抑制.
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新的环境应答蛋白JWA在MCF-7细胞应答氧化应激中的表达
目的研究氧化应激诱导MCF-7细胞氧化损伤过程中,JWA表达的调节规律及其作用,尤其是与热休克蛋白(HSPs)间的关系.方法以不同浓度的H2O2(0.01、0.10、1.00mmol/L)分别处理MCF-7细胞10、30、60、180 min,建立MCF-7细胞氧化损伤模型并用DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定;用四唑蓝(MTT)法分析H2O2对MCF-7细胞的相对细胞增殖率和细胞毒性的影响;采用Western-blot方法检测JWA、HSP70、HSP27和热休克转录因子(HSF1)蛋白表达水平的变化.结果H2O2对MCF-7细胞的增殖抑制和细胞毒性呈时间和剂量依赖关系,MCF-7细胞在高剂量、长处理时间(1.00mmol/L、180 min)时,细胞增殖几乎完全受抑制.H2O2活跃地调节JWA的表达,氧化损伤使JWA、HSP70和HSF1表达上调并呈剂量依赖关系,而且JWA、HSP70和HSF1的表达规律相似,而HSP27表达似乎与氧化应激的信号调节无关.结论在H2O2致MCF-7细胞氧化应激时,JWA作为有效的环境应答蛋白,其与HSP70共同参与的信号通路可能受HSF1调控.
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氯化高铁血红素和热应激对JWA基因表达的影响
目的探讨JWA基因在氯化高铁血红素(hemin)和热应激单独或联合作用下的表达规律.方法用Western blot方法检测JWA蛋白表达;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测JWAmRNA表达变化;用氯霉素乙酰转移酶-酶联免疫吸附试验(CAT-ELISA)方法检测hemin和热应激对JWA基因近端启动子转录活性的影响.结果50 μmoL/L hemin处理K 562细胞1周可使JWA蛋白表达增高(3.23±0.57)倍;而30 μmol/L hemin处理K 562细胞48 h可使JWA mRNA表达增加(1.37±0.06)倍.42℃处理K 562细胞2 h可使JWA蛋白表达增高(8.00±1.73)倍;42℃处理K 562细胞30min可使JWA mRNA表达明显升高(1.87±0.13)倍.hemin和热应激联合作用于K 562细胞后,JWA蛋白和mRNA的表达均低于单独处理.CAT-ELISA结果显示hemin及热应激单独处理可上调各自反应元件的应答,但二者联合作用后反应元件的应答似乎呈现一种部分拮抗的作用.结论hemin和热应激可能分别通过JWA近端启动子上各自的反应元件而调节JWA基因的表达.
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诱导分化剂和热应激对K562细胞JWA和热应激蛋白70表达的影响
目的研究诱导K562细胞分化和热应激过程中,JWA表达的特点,探讨JWA与热应激蛋白(Hsp70)表达的关系以及参与诱导分化和热应激可能的机制.方法分别建立K562细胞诱导分化和热应激模型,采用Western-blot方法检测JWA、Hsp70、热休克转录因子(HSF1)、HSF2蛋白表达水平.结果(1)佛波酯(TPA,100 ng/ml)、氯化高铁血红素(hemin,3×10-5 mol/L)、阿糖胞苷(Ara-C,80ng/ml)、阿霉素(adriamycin,4×10-8 mol/L)、全反式维甲酸(ATRA,1×10-6 mol/L)、三氧化二砷(As2O3,1×10-6 mol/L)分别诱导K562细胞48 h,JWA、Hsp70蛋白表达水平均明显增加;HSF2在hemin、Ara-C、ad-fiamycin诱导下表达增加;(2)在42℃不同时间(10、20、30、45、60、90 min)和不同温度(39℃、42℃、45℃)处理下,Hsp70表达水平的变化与JWA蛋白表达水平的变化趋势基本相似,且HSF1在热应激早期表达.结论在诱导分化、热应激过程中,JWA与Hsp70蛋白表达水平均明显上调,且变化趋势有一定的相似,但所涉及的细胞内信号转导通路可能不是惟一的.JWA表达与HSF1或HSF2似乎没有直接的特征性联系.
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JWA在N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍诱导的人支气管上皮细胞凋亡中的作用
目的探讨JWA在化学致突变物烷化剂N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导人支气管上皮(HBE)细胞凋亡中的作用及其可能机制.方法用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率,用Hoechst染色法检测细胞凋亡,用Western blot法检测JWA蛋白表达,用Southwestern印迹分析法检测JWA基因近端启动子的结合蛋白.结果MNNG处理HBE细胞24h均可诱导细胞发生凋亡,并呈现明显的剂量-效应关系;MNNG诱导HBE细胞凋亡过程中伴随着JWA蛋白表达升高.进一步用2.0μg/mlMNNG处理HBE细胞24h后,用Southwestern方法从HBE细胞核蛋白中检测出一与JWA近端启动子能特异性结合的转录因子.结论MNNG激活HBE细胞中核转录因子与JWA近端启动子结合后可能激活了细胞内凋亡的信号通路.
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染铅大鼠脑组织JWA mRNA表达变化与氧化应激损伤的关系
目的：探讨铅暴露对大鼠大脑皮质、小脑、海马组织JWA mRNA表达的影响及其与脑组织氧化应激损伤的关系。方法40只刚断乳雄性SD大鼠，按体重随机区组法分为5组（对照组和4个乙酸铅剂量组），各组自由饮用不同浓度的乙酸铅溶液（0、100、200、400、800 mg／L）。连续染毒60 d后取大鼠脑组织，RT－PCR技术检测脑组织JWA mRNA的表达量，并测定脑组织铅含量、过氧化氢（ H2 O2）水平、丙二醛（ MDA）及8－羟基脱氧鸟苷（8－OHdG）含量。结果与对照组相比，各染铅组大鼠大脑皮质、小脑和海马组织 JWA mRNA 表达水平明显降低，而脑组织铅含量及H2O2、MDA及8－OHdG水平均增加（P＜0．05）；脑组织JWA mRNA的表达量与其铅含量、H2O2、MDA、8－OHdG水平呈负相关（P＜0．05）。结论饮水铅暴露可导致大鼠脑组织JWA mRNA的表达变化，并与脑组织氧化应激损伤密切相关。
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JWA蛋白时间分辨荧光免疫层析检测方法的建立
目的:建立时间分辨荧光免疫层析法检测JWA蛋白的体系,并对该法进行评价.方法:运用EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)-NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)活化时间分辨荧光微球,活化的时间分辨荧光微球按 100 μg Ab∶1 mg 微球标记JWA单克隆抗体7C3;将荧光标记的抗体运用于免疫层析检测.结果:时间分辨荧光微球成功标记JWA单克隆抗体,荧光标记的7C3可以准确识别JWA多肽;测量范围可从20 ng·mL-1至1500 ng·mL-1,线性范围可达100 ng·mL-1～1000 ng·mL-1,回收率在95%以上,高、中、低浓度的重复性检测离散度(CV)均小于10%,加速稳定性亦较好,同时可以检测出胃癌细胞中的JWA蛋白.结论:本研究建立的时间分辨免疫荧光层析法测定JWA蛋白,各项分析性能良好,且便捷准确、快速经济,为检测JWA蛋白提供了一种高效的新途径.
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JWA抑制人肝癌细胞的黏附和迁移侵袭潜能
目的:探讨JWA蛋白在人肝癌细胞黏附和迁移侵袭过程中的作用.方法:应用小于扰RNA下调低转移潜能人肝癌细胞株MHCC97L中JWA蛋白表达水平,MTT法检测MHCC97L增殖；应用细胞小室检测MHCC97L在JWA不同蛋白水平时的迁移及侵袭潜能变化；黏附试验检测MHCC97L细胞黏附能力变化.结果:研究发现人肝癌细胞株MHCC97L中的JWA表达水平下降后,肝癌细胞迁移及侵袭能力明显增强,细胞对细胞外基质纤维连接蛋白的黏附力增加.结论:RNA干扰JWA引起肝癌细胞的JWA蛋白表达水平下降,导致肝癌细胞的黏附、迁移及侵袭能力增强,结果提示JWA可能抑制人肝癌细胞侵袭和转移.
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JWA在急性髓系白血病中的表达及意义
目的：研究JWA在急性髓系白血病（AML）患者白血病细胞中的表达，评价其在AML发生、发展及疾病转归中的作用。方法：观察22例AML患者的治疗转归情况，并检测其在初发时及完全缓解后 JWA在RNA及蛋白质水平的表达水平。结果：在RNA及蛋白质水平，AML患者细胞中均有JWA的表达。 JWA蛋白在初发AML患者细胞中表达高，达完全缓解后，表达下降（P＜0．05）。 JWA的表达水平与AML的治疗转归：JWA表达水平较高患者的完全缓解率（87．5％）与表达水平较低患者的完全缓解率相近（83．3％），表达水平较高的患者1疗程完全缓解率（31．25％）要低于表达较低的患者（66．7％），表达水平较高的患者早期复发率（42．86％）则高于表达较低的患者（20．00％）。结论：JWA可能参与了AML的发生，JWA表达增高可能是AML难治复发的原因之一。
关键词： 急性髓系白血病 JWA RT-PCR Western blot -
铁过载小鼠心肌组织JWA基因mRNA的表达及其与氧化应激损伤的关系研究
目的 探讨铁过载对雄性小鼠心肌组织JWA基因mRNA表达的影响及其与氧化应激损伤的相关性.方法 40只雄性小鼠按体重随机分成4组(对照组和3个铁过载组),各组隔天腹腔注射不同剂量(0、50、100、150 mg/kg·wb)的右旋糖苷铁,持续注射4周后,眼球取血测定血清铁;处死小鼠,取肝脏组织测肝组织铁,取心肌组织,RT-PCR技术测心肌组织JWA基因mRNA表达量,并测心肌组织丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化氢(H2O2)、羟自由基和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量.结果 与对照组相比,3个过载组血清铁及肝组织铁含量均显著升高(P值均＜0.05);100 mg/kg· wb剂量组、150 mg/kg· wb剂量组铁过载小鼠心肌组织的JWA基因mRNA表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).心肌组织JWA基因mRNA表达量与其CAT活力、过氧化氢含量、GSH-PX水平和羟自由基活力呈负相关关系,而与MDA含量呈正相关关系(P＜0.05).氧化应激水平显示,与对照组相比,3个铁过载组心肌匀浆MDA含量均升高(P＜0.05);而CAT活力、H2O2含量、羟自由基活力、GSH-PX均降低(P＜0.05).结论 铁过载导致小鼠心肌组织JWA基因mRNA高表达,并与心肌组织氧化应激损伤密切相关.
