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益气通络丹对体外培养大鼠血管平滑肌细胞自分泌NO的影响
益气通络丹是补阳还五汤的化裁方, 本实验从抗大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖方面, 对其疗效机理作了如下探讨.
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血管紧张素Ⅱ激活内质网应激促进大鼠血管平滑肌细胞凋亡的研究
目的:探讨内质网应激(ERS)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡中的作用.方法:Ang Ⅱ诱导大鼠VSMC凋亡模型,并应用ERS抑制剂干预,采用流式细胞仪检测VSMC凋亡率;Western Blot检测ERS相关凋亡因子的表达变化.结果:不同浓度Ang Ⅱ(1、10、50μM)均可诱导VSMC凋亡,其总凋亡率(23.1 ±5.5)%、(30.0±2.5)%、(55.4±3.3)%与对照组(10.9±2.5)%相比显著升高(P<0.05);Ang Ⅱ可诱导大鼠VSMC细胞ERS相关凋亡因子表达升高,与对照组相比,CHOP及Caspase12水平分别升高3.15倍和2.35倍(P<0.05);与Ang Ⅱ刺激组相比,应用PERK通路抑制剂可显著降低Ang Ⅱ诱导的CHOP和Caspase12表达水平(P<0.05),并降低Ang Ⅱ诱导的总凋亡率((14.6±2.7)%,P<0.05).结论:AngⅡ可通过激活内质网应激CHOP和Caspase12通路诱导大鼠VSMC凋亡.
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过表达小窝蛋白-1对大鼠血管平滑肌细胞迁移能力及MMP-2、MMP-9表达的影响
目的:应用基因过表达质粒载体上调小窝蛋白-1(caveolin-1)的表达,观察其对大鼠血管平滑肌细胞迁移能力、基质金属蛋白酶-2( MMP-2)、基质金属蛋白酶-9( MMP-9)表达和活性的影响。
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激动Nrf 2对氧化应激所致血管平滑肌细胞损伤的影响
目的:探讨激动Nrf2对氧化应激诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)损伤的影响。
方法:原代培养大鼠VSMCs,随机分为4组:对照组、氧化损伤组、Nrf2激动剂组、Nrf2干扰慢病毒组。Western blot检测Nrf2蛋白表达变化,MTT法检测各组细胞活力,Hoechst 33342法及Annexin V/FITC法检测各组细胞凋亡情况。 -
辛伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞和内皮细胞p27蛋白表达的影响
目的:观察辛伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞(SMC)和内皮细胞(EC)p27蛋白表达的影响,筛选新一代包被洗脱支架药物。
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60Coγ射线对大鼠血管平滑肌细胞L-Arg/NO生成系统的影响
经皮腔内冠状动脉成形术(Percutaneous transluminal coronary angioplasty,PTCA)是目前治疗冠心病的有效措施之一,但其易损伤与剥脱血管内皮,导致术后血管平滑肌细胞(VSMC)增生和新生内膜增厚,约30%~50%的病人半年内发生术后再狭窄(RS)[1].
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低剂量辐射对大鼠血管平滑肌细胞RAD6基因的表达及细胞周期的影响
自80年代初,Luckey提出低剂量辐射兴奋效应概念后,人们对这方面的研究日益深入,已进入分子水平,对其机制和调控的研究已成为放射生物学研究的热点之一.我们以大鼠血管平滑肌细胞(WKY-1)为实验对象,用细胞原位杂交和流式细胞术研究了低剂量辐射时DNA 修复基因RAD6的表达和细胞周期的变化.
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黄酒中抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移成分探讨
目的:探索黄酒中具有抑制同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移作用的活性成分.方法:SD大鼠主动脉VSMCs原代细胞培养鉴定,取4~7代细胞用于实验.VSMCs分为control组、Hcy(浓度为1 mmol/L)组、低聚糖组(Hcy+黄酒低聚糖)、多肽组(Hcy+黄酒多肽)、多酚组(Hcy+黄酒多酚)、酒精组(Hcy+酒精)、黄酒组(Hcy+黄酒)共7组.MTT法检测各组VSMCs的增殖情况;划痕法和Transwell法检测各组VSMCs的迁移情况iWestern blot法检测各组VSMCs中基质金属蛋白酶-2/9(MMP-2/9)、基质金属蛋白酶的组织抑制剂-2(TIMP-2)的表达情况;明胶酶谱检测各组VSMCs中MMP-2/9的活性.结果:与control组相比,Hcy组VSMCs增殖迁移增加、MMP-2/9表达和活性增加(P<0.01).与Hcy组相比,多肽组、多酚组、黄酒组VSMCs增殖迁移减少、MMP-2/9表达和活性减少(P<0.05).各组之间TIMP-2的表达没有显著差异.结论:黄酒中的多肽类和多酚类成分具有抑制Hcy诱导的VSMCs增殖和迁移的作用.
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茶多酚抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖及相关机制研究
目的:研究晚期糖基化产物(AGEs)对大鼠血管平滑肌细胞A7R5增殖的影响及相关机制.方法:用AGEs处理A7R5细胞,相同条件BSA处理为对照组,Western blotting检测RAGE蛋白表达的变化,MTT比色法测定细胞活性.结果:AGEs处理A7R5细胞后,AGEs受体RAGE及细胞增殖水平均明显升高,但与EGCG共孵育能显著抑制AGEs诱导的RAGE表达增加及细胞增殖水平.结论:EGCG能够抑制AGEs诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖水平,这可能与EGCG抑制AGEs受体RAGE的表达相关.
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大黄对冠心病患者血清炎性因子的影响
冠心病(CHD)严重威胁着人类健康,CHD是动脉硬化性疾病的一部分,是动脉粥样硬化(AS)发展引起器官损害的结果[1].越来越多的研究表明活动性炎症是CHD发病的重要环节之一[2].有研究表明,中药大黄的主要有效成分能明显降低实验大鼠血管平滑肌细胞的异常增殖,并能使高胆固醇血症模型大鼠升高的血脂水平显著降低,具有对抗心脑血管病样作用[3].本研究观察了中药大黄对CHD患者血清中C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及IL-10表达水平的影响,以探讨其抑制CHD炎性反应的可能机制.
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IL-10基因载体对大鼠血管平滑肌细胞增殖和球囊损伤后新生内膜形成的影响
目的 探讨白细胞介素-10 (IL-10)基因载体对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞(SHRVSMC)增殖和球囊损伤后新生内膜形成的影响.方法 成功构建慢病毒IL-10基因载体.自发性高血压大鼠(SHR)随机分为4组:正常对照组、模型组、损伤+空载体组(空载体组)、损伤+慢病毒IL-10基因治疗组(IL-10基因治疗组).大鼠颈动脉球囊损伤模型建立后,取出颈总动脉下段1/3行HE染色,计算机图像分析仪测量血管壁(中膜)/腔面积比(wall area/lumen are-a,W/L).颈总动脉段上1/3检测金属基质蛋白酶-12 (matrix metalloproteinase,MMP-12)的信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)表达.结果 慢病毒IL-10基因治疗组W/L比值比模型组和空载体组明显减小;IL-10基因治疗组MMP-12的mRNA相对表达量比模型组和空载体组明显减小.结论 IL-10基因治疗能抑制大鼠体内血管平滑肌细胞增殖和球囊损伤后新生内膜形成,是有效的再狭窄治疗手段.
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雷帕霉素联用阿托伐他汀减轻大鼠血管平滑肌细胞氧化应激损伤
目的 探讨雷帕霉素与阿托伐他汀联用对大鼠血管平滑肌细胞氧化应激损伤的影响.方法 取大鼠血管平滑肌细胞进行实验,随机分为空白对照组、DMSO组、阿托伐他汀(3μmol/L)组(A3组)、雷帕霉素50 nmol/L组(R50组)、雷帕霉素100 nmol/L组(R100组)、联用组(阿托伐他汀加雷帕霉素100 nmol/L).实验各组细胞给予相应药物干预2h后,加入三丁过氧化氢(t-BHP)刺激诱导氧化应激损伤,24 h后检测各项指标.结果 与空白对照组相比,DMSO组细胞SOD活力、MDA含量及β-Gal染色率差异无统计学意义,而其细胞增殖率降低(P<0.01).各药物干预组细胞SOD活力、MDA含量、β-Gal染色率和细胞增殖率与空白对照组和DMSO组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);而A3组和R50组比较上述指标差异无统计学意义,R100组与A3组和R50组比较上述指标差异有统计学意义(P均<0.05);联用组细胞SOD活力较其余各组明显升高(P<0.01),而MDA含量、β-Gal染色率和细胞增殖率较其余各组则均明显降低(P均<0.05).而内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在大鼠血管平滑肌细胞中无表达.结论 在氧化应激状态下,阿托伐他汀及雷帕霉素均具有抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖、抗氧化损伤的作用,从而维护血管平滑肌细胞的正常功能并能延缓其衰老,两药联用的效果优于两药单独应用.
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高糖、高脂、高胰岛素血症对大鼠血管平滑肌细胞功能的影响
糖尿病是一种严重危害人民健康的常见病、多发病,而非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)患者占糖尿病发病总数的80~90%,NIDDM的基本特征是高糖血症、高脂血症和高胰岛素血症共存,导致严重的动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)性血管病变,尤其死亡率大大增高,但其发生机制尚未阐明.目的:本研究复制了高糖、高脂、高胰岛素血症的大鼠模型,采用酶法、组织培养及放射免疫分析方法观察高糖、高脂、高胰岛素血症对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)功能的影响并探讨其发病机制.
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红花、郁金对血管平滑肌细胞表型及增殖变化的影响
目的:系统观察活血化淤中药红花、郁金提取液对高糖血清培养的大鼠血管平滑肌细胞表型转变及增殖的影响,以期阐明活血化淤中药防治动脉粥样硬化的作用机制.方法:利用贴块法对大鼠血管平滑肌细胞进行原代和传代培养,取第三代血管平滑肌细胞将其分为4组:对照组、高糖组、高糖加中药组、高糖加秋水仙碱组进行培养.电镜观察各组血管平滑肌细胞超微结构改变,用[3H]-TDR掺入法测定血管平滑肌细胞内DNA合成速率,用GMIAS彩色图像分析系统进行血管平滑肌细胞图像处理,以每个细胞平均积分光密度表示血管平滑肌细胞核内DNA含量,加入脯氨酸测定细胞内胶元合成量.结果:电镜超微结构显示对照组血管平滑肌细胞为收缩表型,高糖组为合成表型,中药组和秋水仙碱组与对照组基本相似;DNA合成速率、核内DNA含量及胶元合成量高糖组均高于对照组,而中药组和秋水仙碱组均低于高糖组(P<0.05).结论:本实验结果提示红花、郁金提取液可有效的抑制体外高糖血清培养的血管平滑肌细胞表型转变与增殖变化,从而可认为红花、郁金对动脉粥样硬化形成有重要的防治作用.
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吻合术后动脉弹性蛋白原的表达
采用寡核苷酸探针原位杂交的方法了解吻合动脉的弹性蛋白原mRNA表达的变化.Wist ar大鼠60只,手术显微镜下,常规消毒铺单将大鼠右股动脉剪开并重新端端吻合,术后分笼标记饲养.实验动物分成6个时相点组和未吻合侧为对照组.于吻合后3,7,14,2 1,28,90天,切取吻合动脉和对侧动脉,冰冻切片后,以地高辛标记的寡核苷酸探针作原位杂交.根据大鼠tropoelastin cDNA序列设计出长度为26bp的反义寡核苷酸5′-GGC TCT CGG TGG TAT TGG TGG CAT CG-3′,经同源性查询,该序列与大鼠血管平滑肌细胞tropoelastin cDNA同源性高.采用MAS图像分析系统,检验各组原位杂交切片比面积,在吻合后3天的标本中可见有蓝紫色的细胞,细胞分布在吻合口周围,吻合后7天的标本可见篮紫色的细胞较多,靠近内膜,吻合14天组、21天组、30天组均可见篮紫色的细胞.吻合90天组为阴性,从统计分析可知股动脉吻合术后3d、7d、14d、21d、30d弹性蛋白原m RNA表达阳性细胞数量与正常对照组相比较(p<0.01)相差非常显著,90d组与正常对照组比较弹性蛋白原mRNA表达阳性细胞数量并无显著的升高(p<0.05).阳性细胞表达数量的高峰期在3~7d,从7d开始表达阳性细胞数量逐渐减少,在90d组与正常对照组无显著性差异.实验证明肌性动脉与弹性动脉一样,在损伤后也有tropo elastin-mRNA的表达,表达的高峰在损伤后3-7天,在30-90天后逐渐减少到不可检出的水平.此基因表达时间的长短与血管损伤的严重程度及内膜增生的程度有无相关性,目前并不清楚.血管损伤及血管手术造成了内皮细胞及中膜平滑肌细胞的损伤, 血管对损伤的后果是平滑肌细胞的移行、增殖、分泌、结果是产生血管内膜增生.从实验中可知血管平滑肌细胞具有产生tropoelastin的能力.新生内膜一方面可以重建并修复血管,另一方面它也是造成血管移植及管吻合后影响血管通畅的重要因素.弹性蛋白等基质蛋白的表达在内膜增生中起着重要的作用.
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硝苯地平导致高血压大鼠血管平滑肌细胞的凋亡