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吃蔬菜的学问:每天多一点
营养学家对吃蔬菜提出了科学建议,归纳起来为"三个一点"与"每天一份".每天多一点蔬菜品种不少家庭每天吃的蔬菜品种单调,餐桌上大白菜、黄瓜、茄子、西红柿、豆角等是经久不衰的"主角".其实,大自然赐予人类的蔬菜可谓品种繁多、纷呈多彩,不同的蔬菜含有的营养素不相同,有不同的口感与滋味,吃的蔬菜品种越丰富,摄取的营养素就越全面,其对修复基因及构建健康基因都将发挥着不可小觑的作用.新近被美国科学家推荐的10大抗衰老蔬菜为甘蓝(卷心菜)、菠菜、芽甘蓝、西兰花、苜蓿芽、甜菜、红椒、洋葱、嫩玉米、茄子.被日本国立癌症预防研究所推荐的防癌蔬菜为红薯、芦笋、花椰菜、甘蓝、芥菜、茄子、甜椒、胡萝卜、金针菜、芥菜、番茄、大葱、大蒜、黄瓜、大白菜.营养学中一个基本的真理就是,世上没有不好的蔬菜.新近营养界流行的超级食物中就有三种极佳的蔬菜代表.
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hMTH1缺陷细胞株建立及生物学特性研究
目的建立hMTH1缺陷细胞株,观察该缺陷所引起的生物学效应.方法用hMTH1基因反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP-C1-T)转染人胚肺成纤维细胞(HLF),半定量RT-PCR鉴定其对hMTH1基因mRNA表达的抑制效果.同时观察转染细胞生长形态,绘制生长曲线,用流式细胞术观察细胞周期,软琼脂培养法鉴定恶性程度.结果 pEGFP-C1-T载体在转染细胞内可较稳定表达,缺陷细胞株hMTH1 mRNA表达水平比HLF细胞下降了47%.hMTH1缺陷细胞生长形态无明显变化,细胞倍增时间为0.89 d,与HLF细胞0.93 d接近,细胞周期各时相未受影响,软琼脂培养未见细胞集落.结论 hMTH1缺陷细胞株成功建立,该缺陷不足以单独引起可观察的生物学效应.
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DSB修复基因hKu70反义RNA真核表达载体构建
目的构建人DNA双链断裂(DSB)修复基因hKu70反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-K,为以后的hKu70基因功能和毒理学研究提供实验材料.方法提取人胚肺成纤维细胞(HLF)总RNA,逆转录酶-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增hKu70基因cDNA保守序列,经与pGEM-T载体连接、筛选、克隆、抽提质粒和双酶切后,将纯化的hKu70基因cDNA保守序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1中,筛选、克隆、抽提质粒,从而构建hKu70基因反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-K.结果经RT-PCR获得467 bp含限制性内切酶位点的DNA片段,T载体克隆后经双酶切、测序,确定该片段为hKu70基因cDNA,进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-K,并双酶切,测序确证.结论成功构建hKu70基因反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-K,为建立该基因低表达细胞株、DNA双链断裂修复缺陷和有关毒理学研究提供工具.
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hMTH1修复基因研究进展
氧自由基可攻击许多重要生物大分子,如核酸、蛋白质.DNA受到攻击后,产生20多种修饰碱基,其中8-OH-G数量多,该氧化损伤具有遗传毒性[1],并可能在肿瘤形成及衰老过程发挥重要作用[2].当DNA合成或修复时,碱基C和A可与DNA中8-OH-G以相同效率配对,由此造成G:C→T∶A颠换,8-OH-G还可引起相邻碱基错配,频率是8-OH-G 位点的1%[3].G氧化也可发生在细胞核苷酸池,实验发现以自由核苷酸形式存在G更容易氧化,且产物8-OH-dGTP是合成DNA的强致突变底物[4].在DNA复制或修复时,8-OH-dGTP能以相同效率合成到DNA上碱基A和C对位,引起A∶T→C∶G及G∶C→T∶A颠换[5].在哺乳动物细胞中,相当数量的自发性突变与8-OH-G有关,因此DNA及核苷酸池中G氧化损伤产物的修复对DNA合成高保真性致关重要.经研究,人体主要由hOGG1、hMYH及hMTH1修复基因联合参与8-OH-G的修复,其中hOGG1蛋白与hMYH蛋白作用于DNA上8-OH-G位点,hMTH1蛋白即8 -OH-dGTP酶则负责清除核苷酸池8-OH-dGTP[6].
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生物芯片系统在肿瘤研究中的应用
1 背景介绍肿瘤是一种高度复杂的疾病,肿瘤的治疗也一直是困扰医学界的难题之一.目前研究表明,肿瘤是细胞多种基因突变累积的结果,这些基因突变主要发生在癌基因、抑癌基因和DNA修复基因上.
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X-射线交错互补修复基因2 C41657T、G4234C多态与卵巢上皮性癌发病风险的关联研究
X-射线交错互补修复基因2(X-ray repair crosscomplementing gene 2,XRCC2)在细胞分裂过程中通过参与同源重组修复DNA链的断裂和交联损伤,具有维持遗传物质稳定性的重要作用[1].XRCC2定位于人体染色体的7q36.1[2].
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利用基因缺陷细胞模型探讨hOGG1和hMTH1的替补作用
目的 通过建立基因缺陷细胞模型,探讨修复基因hOGG1与hMTH1在DNA氧化性损伤中的作用与关系.方法 利用慢病毒感染人胚肺成纤维细胞(HFL),分别建立hOGG1基因和hMTH1基因缺陷细胞模型.将HFL细胞在100 μmol/L的H2O2中孵育12h,分别利用高压液相色谱串联电化学检测技术及RT-PCR技术分析8-羟基-脱氧鸟嘌呤(7,8-dihydro-8-oxoguanine,8-oxo-dG)水平及hOGG1和hMTH1基因表达水平.结果 用高滴度慢病毒感染靶细胞后得到hOGG1基因和hMTH1基因缺陷细胞模型,hOGG1 mRNA表达水平(0.09±0.02)比正常HFL细胞(1.00±0.04)下降了91%,hMTH1 mRNA表达水平(0.41±0.04)比正常HFL细胞(1.02±0.06)下降了60%;用100 μmol/L的H2O2诱导12 h,hOGG1基因缺陷细胞的hMTH1基因表达水平(1.26±0.18)相比对照组(1.01±0.07)提高了25%,hMTH1基因缺陷细胞的hOGG1基因表达水平(1.54±0.25)提高了52%;hOGG1基因缺陷细胞的8-oxo-dG水平(2.48±0.54)是对照组(0.80±0.16)的3.1倍,差异有统计学意义(P<0.01),hMTH1基因缺陷细胞(1.84±0.46)的8-oxo-dG水平是对照组(0.80±0.16)的2.3倍,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 利用基因缺陷细胞模型,发现在氧化诱导作用下,修复基因hOGG1与hMTH1在DNA损伤修复活动中可能分别表现出一定的协同性替补作用,hOGG1的替补作用强于hMTH1.
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肿瘤相关纤维母细胞与肿瘤关系的研究进展
近年研究表明,肿瘤的发生与演进不仅与肿瘤细胞本身发生原癌基因激活、肿瘤抑制基因灭活或丢失、凋亡调节基因和DNA修复基因功能紊乱等有关,也与肿瘤间质密切相关。肿瘤间质包括间质细胞(巨噬细胞、炎性细胞、内皮细胞及肿瘤相关纤维母细胞等)和细胞外基质( ECM )。肿瘤细胞及肿瘤间质共同构成肿瘤的微环境。肿瘤相关纤维母细胞( cancer-associated fibroblasts , CAF )是肿瘤间质中重要的细胞成分,我们对其与肿瘤关系的研究进展加以综述。
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DNA损伤修复基因与胶质瘤的发生及个体化治疗
胶质瘤足中枢神经系统常见、也是难根治的原发性肿瘤.国内外资料表明,原发性胶质瘤发生率为(7.8~12.5)/10万人,脑胶质瘤约占颅内肿瘤的35.3%~61.0%.由于胶质瘤具有侵袭性生长、不能全切、术后易复发、复发后恶性程度增高等生物学特性,严重地威胁着患者的生命健康.
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DNA损伤和修复生物标记物的检测研究
DNA是生命活动中重要的遗传物质,易受各种因素的作用而出现损伤,导致DNA完整性的改变,引起细胞及机体损害.对DNA损伤进行修复则是机体抵御各种损害的基础.由于DNA损伤和修复的直接检测过于复杂和困难,一般需采用间接的灵敏可行的生物标记物法.生物标记物是指生物系统内直接或间接与环境暴露相关的、可测量的生化、生理、细胞、免疫或分子变化,以及可测量的体液或房室中的代谢物水平[1].DNA损伤修复的生物标记物可主要分为3种:特异性酶和代谢产物、特异性修复基因、DNA加合物[1,2].根据不同的生物标记物,可采用不同的检测方法.
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APE1 D148E、PARP1 V762A、XRCC1 R399Q的多态性与结直肠癌的易患性
目的:探讨APE1 D148E、PARP1 V762A及XRCC1 R399Q的碱基切除修复基因单核苷酸多态位点对结直肠癌发病风险的修饰作用.方法:选取158例健康对照与123例原发性结直肠癌患者,提取外周血基因组DNA,用基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱技术对SNP位点进行基因分型,在各混杂因素配比下,采用X2检验比较病例组与对照组中各SNP的基因型分布差异以及多SNP的联合基因型分布差异,从而分析他们对结直肠癌风险的修饰程度OR值.结果:3个SNP在本研究中均符合Hardy-Weinberg平衡,其中只有XRCC1 R399Q的GA/AA变异(V)型与结直肠癌发病有正相关性,OR值为1.633(95%CI:1.011-2.640.P=0.045);而APE1 D148E、PARP1 V762A的SNP变异单独对结直肠癌风险未见明显影响(P>0.05).联合基因型在两组比较显示,携带APE1(V)-PARP1(W)-XRCC1(V)者,结直肠癌发病风险是其他联合基因型携带者的2.604倍(95%CI:1.066-6.361,P=0.031);而其他联合基因型对结直肠癌风险的修饰作用则不明显.结论:XRCC1 rs25487的GA/AA变异型是结直肠癌的危险因素;BER和SNP存在交互作用;携带联合基因型APE1(V)-PARP1(W)-XRCC1(V)者患结直肠癌的风险可能较高.
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DNA高甲基化与抑癌基因
哺乳动物基因组中,DNA甲基化是指CpG二核苷酸中的胞嘧啶第5位碳原子被甲基化.DNA甲基化是一种基因外修饰,不改变DNA的一级结构;他在细胞正常发育、基因表达模式以及基因组稳定性中起着至关重要的作用.全基因组低甲基化,维持甲基化模式酶的调节失控和正常非甲基化CpG岛的高甲基化是人类肿瘤中普遍存在的现象.DNA高甲基化是导致抑癌基因失活的又一个机制.本文综述了抑癌基因的高甲基化、DNA修复基因的高甲基化、甲基化与转录的关系以及导致转录失活可能存在的作用机制、寻找甲基化相关基因的依据原则、甲基化的检测方法、肿瘤甲基化图谱的特征、甲基化与突变的相互作用、导致甲基化产生的原因、及其广泛的应用前景.
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胃癌DNA甲基化谱研究进展
肿瘤的发生与多基因的异常有关,其中,DNA甲基化作为基因表达调控的一种方式,其甲基化状态的改变与基因的异常表达相关.胃癌的发生亦系多因素、多阶段、多基因异常累积的过程.本文就与胃癌有关的肿瘤抑制基因(p14ARF、pi6INK4a、APC、pS2、p15INK4b和RASSF1等)、DNA修复基因(MGMT和hMLHl)和其他与肿瘤转移和侵袭有关的基因(CDHl和TIMP-3)的CpG岛甲基化情况作一综述,说明了胃癌的发生与DNA甲基化的关系,揭示了胃癌的形成与DNA甲基化有一定的关系,探讨利用基因甲基化的检测作为胃癌早期诊断的生物学标记的可能性.
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DNA修复基因多态性与膀胱肿瘤的关系
DNA修复基因多态性对维持基因组的稳定性有重要作用,基因突变与膀胱肿瘤的发生、发展关系密切.近年来,DNA修复基因多态性在肿瘤发生中的作用成为研究热点.
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survivin及caspase-3基因在非小细胞肺癌中的表达和相关性
恶性肿瘤的发生是一个长期的多因素形成的分阶段的过程.包括癌基因的激活,肿瘤抑制基因的失活,以及凋亡调节和DNA修复基因的改变,其中对细胞的凋亡调节是分子肿瘤学中备受瞩目的课题,也对肿瘤的临床诊断治疗和预后有一定的指导意义.本文综述了凋亡基因caspase-3与凋亡抑制基因survivin在非小细胞肺癌中的表达及相关性.
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辐射的细胞和分子生物效应研究进展
放射生物学在20世纪取得了许多重要的研究成果,其中在细胞和分子水平上的进展更是迅速.进入21世纪以来,作为放射医学国家级重点学科的主要科研方向之一,苏州大学放射医学与公共卫生学院在辐射的细胞和分子生物学效应方面开展了一系列深入研究,其中包括对体细胞和生殖细胞的DNA损伤及修复,辐射敏感基因和DNA修复基因的表达及调控,以及辐射分子生物剂量计等,下述文章就是这些研究的部分反映.
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地西他滨和5-阿扎胞苷在癌症研究及临床上的应用
恶性肿瘤是对人类威胁大的疾病之一,对其治疗的研究也为广泛深入.科学家们正从不同的生物学途径进行攻关,有从控制细胞周期的信息通路入手;有从控制细胞凋亡(apoptosis)过程入手;有从研究肿瘤周围血管再生入手;更有学者寻找遗传突变,尤其是肿瘤抑制基因或重要DNA修复基因的突变.近,科学家们又发现表遗传(epigenetics)原因,特别是发现DNA甲基化异常在肿瘤的发生和转化中起着重要作用.笔者着重综述DNA甲基化抑制剂在肿瘤研究和临床应用的新进展.
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RAD18基因在多种细胞及大鼠多种组织中的表达
RAD18基因是人类基因组计划研究的重要模式生物--啤酒酵母的复制后修复上位显性组的重要成员,其编码的产物RAD18蛋白与RAD6蛋白在体内形成紧密的复合物.鉴于DNA修复基因在进化上具有很强的保守性,为探讨RAD18基因在高等动物细胞中存在的意义,我们以全长的RAD18基因为探针,应用染色体原位杂交技术及RNA印迹技术对多种细胞如KGY444(裂殖酵母)、S2(果蝇)、NIH3T3(小鼠)、A10(大鼠)、COS-7(猴)、293(人)等及Wistar大鼠多种组织进行了研究.染色体原位杂交结果显示,上述各种细胞均有很强的RAD18基因杂交信号,而质粒载体片段杂交对照则无信号.RNA印迹杂交结果表明,上述各种细胞及Wistar大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑等组织均有RAD18基因表达.这说明RAD18基因无论是在生物进化上,还是在维持细胞的正常功能方面均具有重要意义.本工作为今后克隆哺乳动物及人类该基因同源基因提供了理论依据.
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人类DNA修复蛋白hR24Lp具有转录激活作用
hR24L是本实验室首次用遗传互补法克隆出的人类DNA修复基因,它与酵母RAD24L(又称RAD24)基因同源.人类hR24L基因能校正酵母RAD24L突变株的紫外线敏感表型和X线敏感表型,参与DNA切除修复和重组修复.
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低剂量辐射对大鼠血管平滑肌细胞RAD6基因的表达及细胞周期的影响
自80年代初,Luckey提出低剂量辐射兴奋效应概念后,人们对这方面的研究日益深入,已进入分子水平,对其机制和调控的研究已成为放射生物学研究的热点之一.我们以大鼠血管平滑肌细胞(WKY-1)为实验对象,用细胞原位杂交和流式细胞术研究了低剂量辐射时DNA 修复基因RAD6的表达和细胞周期的变化.