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hKu70文献资料
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DSB修复基因hKu70反义RNA真核表达载体构建
目的构建人DNA双链断裂(DSB)修复基因hKu70反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-K,为以后的hKu70基因功能和毒理学研究提供实验材料.方法提取人胚肺成纤维细胞(HLF)总RNA,逆转录酶-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增hKu70基因cDNA保守序列,经与pGEM-T载体连接、筛选、克隆、抽提质粒和双酶切后,将纯化的hKu70基因cDNA保守序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1中,筛选、克隆、抽提质粒,从而构建hKu70基因反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-K.结果经RT-PCR获得467 bp含限制性内切酶位点的DNA片段,T载体克隆后经双酶切、测序,确定该片段为hKu70基因cDNA,进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-K,并双酶切,测序确证.结论成功构建hKu70基因反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-K,为建立该基因低表达细胞株、DNA双链断裂修复缺陷和有关毒理学研究提供工具.
