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非清髓异基因外周血造血干细胞移植后供体细胞植入证据的研究
采用染色体荧光原位杂交(FISH)并结合常规染色体和染色体分带等方法,观察并比较了4例血液病人非清髓异基因外周血干细胞移植(NAPBSCT)后的植入情况。结果4例病人均有不同程度的植入,全部形成混合性嵌合体,其中2例转化为完全植入。统计结果分析表明,FISH分析中期分裂相与间期细胞的结果无统计学差异。与常规染色体检查结果相比较,FISH分析中期分裂相或间期细胞的植入率高,但无统计学差异。但FISH具有操作简单、实验周期短、结果敏感可靠等优点,适合用于性别不合的NAPBSCT后植入证据检测。
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RAD18基因在多种细胞及大鼠多种组织中的表达
RAD18基因是人类基因组计划研究的重要模式生物--啤酒酵母的复制后修复上位显性组的重要成员,其编码的产物RAD18蛋白与RAD6蛋白在体内形成紧密的复合物.鉴于DNA修复基因在进化上具有很强的保守性,为探讨RAD18基因在高等动物细胞中存在的意义,我们以全长的RAD18基因为探针,应用染色体原位杂交技术及RNA印迹技术对多种细胞如KGY444(裂殖酵母)、S2(果蝇)、NIH3T3(小鼠)、A10(大鼠)、COS-7(猴)、293(人)等及Wistar大鼠多种组织进行了研究.染色体原位杂交结果显示,上述各种细胞均有很强的RAD18基因杂交信号,而质粒载体片段杂交对照则无信号.RNA印迹杂交结果表明,上述各种细胞及Wistar大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑等组织均有RAD18基因表达.这说明RAD18基因无论是在生物进化上,还是在维持细胞的正常功能方面均具有重要意义.本工作为今后克隆哺乳动物及人类该基因同源基因提供了理论依据.
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异种移植供体猪α-1,3GT基因打靶引导序列获得及其染色体定位
目的:为阻止异种抗原靶分子的生成,抑制或减轻HAR发生,试图对异种抗原的合成酶α-1,3GT基因进行打靶灭活,以产生α-1,3GT表型缺乏且具有抗HAR反应能力的异种供体(猪).方法:以α-1,3GT基因的cDNA片段为探针,采用噬茵斑原位杂交结合PCR技术筛选猪gDNA文库,经酶切、Southern杂交、测序鉴定所得片段,并采用荧光原位杂交定位.结果:获7个片段,均在8kb以上,且包含第三内含子,其中3个片段测序证实包括第三、第四外显子;荧光原位杂交证实该基因位于猪染色体1q2.10~q2.11.结论:研究表明所得片段可作为该基因打靶引导序列,染色体定位明确了基因打靶位点,PCR技术可以用于快速筛选gDNA文库.
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β地中海贫血异基因脐血移植术后继发急性髓系白血病1例
患者,男,14岁,因出生后3个月开始出现进行性贫血,确诊重型β地中海贫血,基因型为28/41-42双重杂合子,Hb靠不定期输血维持.4年前行HLA全相合胞妹冻存脐血移植.预处理方案为白消安16 ng/kg、环磷酰胺50mg/kg和抗淋巴细胞球蛋白90mg/kg,移植物抗宿主预防单用环孢霉素A,输入脐血有核细胞数为2.8×106/kg.半年后经性别染色体原位杂交荧光技术检查提示移植失败,自身造血恢复,患者仍需不定期输血.