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骨髓增生异常综合征中西医诊治概述
骨髓增生异常综合征(MDS)为临床难治的血液系统疾病,既往认为该病为白血病前期,然而随着现代分治疗观的建立,MDS被认为是一组异质性较高的疾病,预后也随国际预后积分系统(IPSS)分组不同而有较大差异,临床需要个体化治疗.目前MDS缺乏有效的治疗手段,除造血干细胞移植(HSCT)被认为可以治愈该病外,DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂阿扎胞苷(AZA)和地西他滨、免疫调节剂雷利度胺和沙利度胺虽可取得一定的效果,然总体疗效仍不理想[1].中医药治疗MDS已经过20余年的临床实践,在改善症状、减毒增效、延缓病情发展方面有一定优势,且辨证论治思想和西医所倡导的个体化治疗有很大的相似之处,故中医药疗法为MDS治疗提供了新的手段.
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阿扎胞苷诱导多发性骨髓瘤细胞株的凋亡及其机制的研究
目的:探讨阿扎胞苷对多发性骨髓瘤细胞株U266和H929的抑制增殖、诱导凋亡的作用及其机制.方法:采用CCK-8分析阿扎胞苷对多发性骨髓瘤细胞株的增殖的抑制作用,应用吖啶橙染色和流式细胞术分析细胞DNA含量以判断阿扎胞苷对多发性骨髓瘤细胞株诱导凋亡作用,流式细胞术分析细胞周期以判断阿扎胞苷对多发性骨髓瘤细胞株细胞周期的影响,RT-PCR检测BCL-2、BAX的表达,Western blot检测caspase-3和p-ERK1/2活性以分析阿扎胞苷诱导骨髓瘤细胞凋亡的可能机制.结果:阿扎胞苷抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖,导致多发性骨髓瘤细胞BCL-2/BAX比例下降,caspase-3和p-ERK1/2活性增高,使多发性骨髓瘤细胞周期停止在G2/M期,诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡且呈剂量依赖性.结论:阿扎胞苷对多发性骨髓瘤细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,其作用机制可能与BCL-2/BAX比例下降,caspase-3活化以及影响细胞周期有关.
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心脏营养素-1促进脐带间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞时心肌α-actin、β-MHC、GATA4和 Nkx2-5基因的表达
目的：探讨心脏营养素-1（CT-1）促进经5-氮杂胞苷（5-aza）诱导的脐带间充质干细胞（UCMSCs）分化为心肌样细胞时心肌α-actin、β-MHC、GATA4、Nkx2-5基因的表达。方法分离、纯化 UCMSCs，第4代 UCMSCs 分别以普通培养基（A 组）和含0.1 nmol/L CT-1培养基（B 组）培养；经5-aza 诱导的第4代 UCMSCs 分别以普通培养基（C 组）、含不同浓度 CT-1培养基 D 组（D1组0.01 nmol/L、D2组0.1 nmol/L、D3组1.0 nmol/L）培养。应用荧光定量 PCR 检测各基因的表达。结果 UCMSCs 培养2~3 d 后细胞贴壁，逐渐由圆形变为长纤维样；经5-aza 诱导分化后可见心肌样细胞，但未见自发性搏动。RT-PCR 检测显示 B 组和 C 组α-actin、β-MHC、GATA4和 Nkx2-5基因的表达较 A 组均无明显增加；α-actin、GATA4和 Nkx2-5基因在 D 组较 A 组表达明显增加，其中α-actin 基因在 D2组表达高，GATA4基因在 D1组表达高，Nkx2-5基因在 D3组表达高，而β-MHC 基因在 D 组表达未见增加。
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小肠黏膜下层复合骨髓间充质干细胞体内形成心肌的实验研究
目的 探讨以小肠黏膜下层(SIS)为支架材料,复合经5-氮胞苷(5-Aza)诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs)在体内构建组织工程心肌的可行性.方法 将经5-Aza诱导的BMSCs接种到SIS上并将BMSCs-SIS复合物埋入裸鼠皮下,观察材料的降解、血管化,并进行病理组织学观察和免疫组织化学染色鉴定心肌特异性蛋白的表达.结果 BMSCs-SIS复合物植入裸鼠皮下4周后,SIS未见明显降解,表面有毛细血管形成,种植8周后,SIS材料被周围皮下组织包被,难以找到.取皮下4周的复合材料经HE染色观察发现SIS全层均有细胞分布,细胞在材料上生长良好.免疫组化染色结果显示复合材料心肌特异性蛋白α-actin、cTnI、connexin-43表达阳性.结论 利用小肠黏膜下层为支架材料,复合经5-Aza诱导的BMSCs,在植入裸鼠体内后可形成心肌样组织薄片.
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体外诱导间充质干细胞向心肌细胞方向分化的研究
目的 证实来源于胎儿肝脏的间充质干细胞(FMSCs)具有向心肌细胞方向分化的潜能.方法 取6～9代细胞,用不同浓度的诱导剂组合诱导细胞,分别置于不同的条件下进行培养,包括不同温度、不同氧浓度及不同培养液.结果 在使用心肌分化培养液及常规培养条件下(37℃、20%O2),5-氮胞苷(50/μmol/L)、维甲酸(10-3μmol/L)、二甲基亚砜(0.8%)的联合应用,诱导了FMSCs发生向心肌方向的分化.分化细胞呈小圆形细胞,具有相互聚集并形成球样细胞团结构的趋势,同时表达结蛋白及心肌肌钙蛋白Ⅰ.结论 FMSCs具有向心肌细胞分化的潜能,FMSCs发生向心肌方向的分化所需条件与来源于其他动物种属的间充质干细胞的分化条件不同.
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5-氮胞苷诱导大鼠骨髓基质细胞表达β肾上腺素能受体的研究
目的探讨5-氮胞苷对大鼠骨髓基质细胞β肾上腺素能受体(β受体)及其mRNA表达水平的影响.方法体外分离培养大鼠骨髓基质细胞,以5-氮胞苷诱导24 h,正常培养3周,125I-Pindolol同位素放射配基法测定β受体密度,RT-PCR法测定其β受体mRNA表达水平,并与培养乳鼠心室肌细胞相比较.结果正常培养大鼠骨髓基质细胞不表达β受体蛋白及其mRNA.5-氮胞苷诱导后的骨髓基质细胞表达β受体,随着5-氮胞苷浓度增加,骨髓基质细胞的β受体密度增加,至5×10-6mol/L时达高峰;β受体密度随着培养时间延长而逐渐增加,于4周时接近正常心肌细胞水平.结论5-氮胞苷诱导后,培养大鼠骨髓基质细胞表达β受体,并有明显的剂量和时间依赖性,分化后的细胞具有类似儿茶酚胺类激素的受体.
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5-氮胞苷诱导自体骨髓单个核细胞移植对心功能的影响
目的观察骨髓单个核细胞(BM-MNC)经化学诱导剂5-氮胞苷诱导后,移植到梗死心肌边缘,能否进一步改善心功能.方法 26只雄性家兔,随机选取21只结扎冠状动脉左前降支,建立急性心肌梗死(AMI)模型,随机分为BM-MNC+5-氮胞苷组、BM-MNC组和AMI未治疗组3组,每组7只;其余5只为假手术对照组.AMI后第3 d抽取自体股骨骨髓1.5 ml,分离单个核细胞培养;AMI后14 d将培养的单个核细胞移植至梗死心肌边缘;移植28 d后,采用超声心动图,并结合左心导管、血流动力学等参数评价心功能情况.结果 AMI后兔心功能明显受损,与假手术对照组相比,AMI后各组左室舒张末期压明显升高(P＜0.05),左室短轴缩短率、左室壁厚度、射血分数、左室收缩压、压力变化率大值显著降低(P＜0.05).细胞移植后,与AMI未治疗组相比,细胞移植组左室舒张末期压显著降低,左室短轴缩短率、左室壁厚度、射血分数,以及左室收缩压、压力变化率大值明显升高.但5-氮胞苷诱导的骨髓单个核细胞移植组与未经诱导组间各项指标差异无显著性.结论 5-氮胞苷诱导的骨髓单个核细胞移植能明显改善心功能,并防止AMI后左室重构发生;但与单纯骨髓单个核细胞移植相比差异无显著性.
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5-氮杂脱氧胞苷对子宫内膜癌细胞的生长及RASSF1A基因表达的影响
目的 探讨DNA甲基转移酶抑制剂--5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对子宫内膜癌细胞的生长及RASSF1A基因表达的影响.方法 5-Aza-CdR作用后,采用锥虫蓝染色法、流式细胞仪分别检测子宫内膜癌细胞株HEC-1B细胞的生长及凋亡情况,采用RT-PCR技术、甲基化特异性PCR(MSP)技术分别检测HEC-1B细胞中RASSF1A mRNA的表达和RASSF1A基因启动子的甲基化状态.结果 (1)HEC-1B细胞的生长及凋亡情况:5-Aza-CdR对HEC-1B细胞生长的抑制作用呈明显的剂量和时间依赖性(P＜0.01);且HEC-1B细胞的凋亡率也呈明显的剂量依赖性(P＜0.01).(2)HEC-1B细胞中BASSF1A mRNA的表达:未经5-Aza-CdR作用的HEC-1B细胞中BASSF1A mRNA表达缺失;不同浓度5-Aza-CdR(分别为0.05、0.1、1、5、10 nmol/ml)作用后,HEC-1B细胞中RASSF1AmRNA表达不同程度地上升,其相对表达水平分别为0.074±0.004、0.105±0.004、0.167±0.006、0.334±0.005、0.484±0.007,分别与未经5-Aza-CdR作用的细胞(为0)比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(3)HEC-1B细胞中RASSF1A基因启动子的甲基化状态:未经5-Aza-CdR作用的HEC-1B细胞中RASSF1A基因启动子呈高甲基化状态;加入低浓度(即0.05、0.1、1、5 nmol/ml)的5-Aza-CdR后,HEC-1B细胞中RASSF1A基因启动子的甲基化水平下降,呈半甲基化状态(即同时出现甲基化和非甲基化条带);当5-Aza-CdR浓度为10 nmol/ml时,HEC-1B细胞中RASSF1A基因启动子呈非甲基化状态.结论 (1)5-Aza-CdR可抑制HEC-1B细胞增殖、促进HEC-1B细胞凋亡.(2)5-Aza-CdR能使HEC-1B细胞重新表达RASSF1A mRNA,能逆转RASSF1A基因启动子的高甲基化状态.
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子宫颈癌细胞中RAR-β基因表达缺陷与其DNA甲基化的关系
目的 观察宫颈癌细胞中RAR-β基因表达的情况,并探讨RAR-β基因DNA甲基化与RAR-β基因表达缺陷的关系.方法 采用RT-PCR技术检测宫颈癌细胞系SiHa、HeLa、C33A和Caski细胞中RAR-β mRNA的表达,免疫荧光化学染色法及蛋白印迹法检测其RAR-β蛋白的表达,同时应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术检测宫颈癌细胞中RAR-β基因DNA甲基化状态及采用5-脱氧-2'-杂氮胞苷(5-Aza-cdR)处理后RAR-β基因DNA甲基化状态的变化,以及5-Aza-cdR处理对RAR-β基因表达缺陷的影响.四甲基偶氮唑蓝(MTY)比色法测定5-Aza-cdR对细胞增殖的影响.结果 SiHa、HeLa、Caski和C33A细胞中RAR-β mRNA的表达水平分别为0.25±0.08、0、0.60±0.19、3.12±0.92,RAR-β蛋白表达水平分别为0.23±0.07、0、0.14±0.05、0.68±0.21.SiHa、HeLa、Caski细胞中存在RAR-β基因的表达缺失或低下,而C33A细胞中存在RAR-β基因的表达.MSP技术检测发现,SiHa、HeLa、Caski细胞中存在RAR-β基因DNA甲基化,而C33A细胞为非甲基化状态.5-Aza-cdR处理后,SiHa、HeLa、Caski和C33A细胞中RAR-β mRNA的表达水平分别为1.82±0.59、2.13±0.62、1.67±0.43、2.95±0.89,RAR-β蛋白表达水平分别为0.69±0.21、0.83±0.29、0.56±0.16、0.64±0.20.5-Aza-cdR处理前后SiHa、HeLa、Caski细胞中RAR-β mRNA和蛋白的表达水平比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);C33A细胞中RAR-β mRNA和蛋白的表达比较,差异则无统计学意义(P＞0.05).5-Aza-cdR处理后能抑制宫颈癌细胞的增殖.结论 RAR-β基因的表达缺陷在宫颈癌的发生中起重要作用,RAR-β基因DNA异常甲基化是导致该基因表达缺陷的重要原因.
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地西他滨和5-阿扎胞苷在癌症研究及临床上的应用
恶性肿瘤是对人类威胁大的疾病之一,对其治疗的研究也为广泛深入.科学家们正从不同的生物学途径进行攻关,有从控制细胞周期的信息通路入手;有从控制细胞凋亡(apoptosis)过程入手;有从研究肿瘤周围血管再生入手;更有学者寻找遗传突变,尤其是肿瘤抑制基因或重要DNA修复基因的突变.近,科学家们又发现表遗传(epigenetics)原因,特别是发现DNA甲基化异常在肿瘤的发生和转化中起着重要作用.笔者着重综述DNA甲基化抑制剂在肿瘤研究和临床应用的新进展.
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治疗骨髓发育不良综合征新药--阿扎胞苷
阿扎胞苷(azacitidine,商品名VidazaTM)是一种胞嘧啶核苷类似物,于2004年5月19日被FDA批准上市,申请注册号为NDA050794,是用于治疗骨髓发育不良综合征(Myelodysplastic Syndrome,MDS)的处方药.
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地西他滨治疗中、高危骨髓增生异常综合征患者的临床研究
近年来表观遗传学的改变越来越受到国内外专家重视,DNA序列中非编码基因表达遗传学的变化具有潜在的可逆性.人们以此作为治疗的靶点,针对DNA去甲基化、组蛋白去乙酰化、RNA默认等采取了相应的药物治疗手段[1],5-脱氧阿扎胞苷(地西他滨,商品名达珂)是骨髓增生异常综合征(MDS) DNA甲基化的有效抑制剂[2].我们对15例MDS中危Ⅰ、Ⅱ型和高危患者采用地西他滨治疗的临床疗效和不良反应进行了观察,现报告如下.
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骨髓增生异常综合征（MDS）去甲基化治疗的研究新进展
《中国肿瘤临床》2015年第18期“特约综述”栏目特邀天津医科大学总医院血液内科主任邵宗鸿教授撰写，介绍骨髓增生异常综合征（MDS）去甲基化治疗的研究新进展。DNA甲基化异常是MDS常见的表观遗传学改变。抑制DNA异常甲基化可以改善部分MDS患者的病情，延长其生存期，改善生存质量，使更多患者获益。目前被批准用于MDS临床治疗的去甲基化药物主要有阿扎胞苷和地西他滨。
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骨髓增生异常综合征去甲基化治疗的研究新进展
表观遗传学异常是骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndromes，MDS）发病的重要机制之一，DNA甲基化异常是MDS常见的表观遗传学改变。抑制DNA异常甲基化可以改善部分MDS患者的病情，延长其生存期。目前被批准用于MDS临床治疗的去甲基化药物主要有阿扎胞苷和地西他滨，这两种药物在MDS患者中均显示出一定的疗效。本文对该药的应用及进展研究进行综述。
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DNA去甲基化药物的研究进展
DNA 甲基化是调节基因表达而不改变 DNA 碱基序列的表观遗传修饰，通过沉默肿瘤抑制基因在癌症发展中发挥关键作用。DNA 去甲基化药物在临床上已经显示出疗效，然而，高效性和特异性的 DNA 去甲基化药物尚未出现。目前，在市场上已有2种药物阿扎胞苷和地西他滨用于治疗骨髓增生异常综合征。寻找直接结合靶点新的抑制剂是未来的方向。从抗肿瘤活性和临床研究方面介绍了DNA去甲基化药物的研究进展。
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超声辐照微泡介导5-氮杂胞苷诱导人骨髓间充质干细胞心肌样分化的实验研究
目的 探索建立低声强脉冲超声联合SonoVue微泡培养孔内直接辐照增强5-氮杂胞苷(5-Aza)体外诱导入骨髓间质干细胞(MSCs)心肌样分化的方法,摸索超声辐照条件,为超声靶向击破微泡技术在MSCs移植治疗急性心肌梗死中的应用提供实验数据.方法 ①以不同的超声辐照强度(0.11、0.33、0.55、0.77、0.99 W/cm2)与不同的辐照时间(0、30、60、90 s)组合于六孔板培养孔内直接超声辐照MSCs,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法筛选出对其活性无明显抑制的声强-时间组;将筛选出的超声辐照强度-时间联合不同微泡数/干细胞数比例(0、10、50、100、150)对应的造影剂剂量于培养孔内直接超声辐照MSCs,用MTT筛选出对其无明显抑制的微泡数/干细胞数比例;②将MSCs随机分为4组,各自采用如下体外心肌化诱导方式:对照组、5-Aza(10μmol/L)组、超声辐照微泡组、5-Aza(10 μmol/L)+超声辐照微泡组,诱导后培养4周,倒置相差显微镜逐日观察细胞形态学变化,并于诱导后28 d免疫细胞化学染色法检测心肌特异肌钙蛋白T(cTnT)表达,计算并比较各组的心肌样细胞分化率.结果 ①无明显抑制MSCs且具有一定微泡击破效应的培养孔内直接超声辐照条件为辐照强度0.55 W/cm2,辐照时间为30 s,微泡数/干细胞数比值为50;②各组MSCs诱导后免疫细胞化学染色法检测发现5-Aza组及5-Aza+超声辐照微泡组可见cTnT表达阳性,且后组阳性率显著高于前组(13.69％对34.13％,P＜0.05).结论 声强0.55 W/cm2、辐照时间30 s、微泡数/干细胞数比50是适当的直接孔内超声辐照条件;在适当条件下的低声强脉冲超声辐照能够增强5-Aza体外诱导MSCs心肌样分化效果.
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阿扎胞苷治疗较高危骨髓增生异常综合征6例的观察护理
目的：观察阿扎胞苷治疗较高危骨髓增生异常综合征6例的不良反应及护理效果。方法：观察6例使用阿扎胞苷治疗的较高危骨髓增生异常综合征患者的用药准备、用药方法、用药后的不良反应、相关处理及护理结果。结果：阿扎胞苷配药严密，使用严谨，不良反应主要有粒细胞减少、感染、血小板减少、贫血、胃肠道反应、注射部位皮肤损坏等。6例患者经对症处理和支持治疗，相关症状大都减轻或者全部好转。结论：为患者提供针对性的护理，可以有效消除患者的顾虑，增强治疗信心，有效减轻药物的不良反应，提高疗效。
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5-氮胞苷对培养大鼠骨髓基质细胞β肌球蛋白重链表达的影响-骨髓干细胞移植与心肌修复的相关效应
目的研究 5-氮胞苷( 5- AZ)对体外培养大鼠骨髓基质细胞( BMSC)中心肌特异性β肌球蛋白重链(β- MHC)表达的影响,探讨骨髓基质细胞向心肌样细胞分化的条件.方法体外分离培养大鼠 BMSC,用不同浓度 5- AZ诱导培养,以 RT- PCR方法测定诱导前后β- MHC的表达.结果正常培养大鼠 BMSC不表达β- MHC.经 5- AZ诱导 24 h并继续培养后, BMSC表达β- MHC,第 1～ 4周内由 1.89± 0.37增至 16.41± 3.63( t=0.495～ 5.446,P< 0.01=; (1× 10- 7)～ (1× 10- 5)mol/L 5- AZ使β- MHC的表达由 7.30± 1.77增至 16.28± 3.72( t=0.442～ 2.669,P< 0.01).结论 5- AZ诱导体外培养大鼠 BMSC表达心肌特异性β- MHC,与诱导时间及浓度呈正相关,提示可诱导大鼠 BMSC向心肌样细胞分化.
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5-氮胞苷体外诱导人骨髓间充质干细胞转化为心肌样细胞的实验
目的:观察5-氮胞苷在体外诱导人骨髓间充质干细胞转化为心肌样细胞的情况及GATA-4和Nkx2.5基因的表达,从而确定人骨髓间充质干细胞体外诱导为心肌样细胞的条件、规律及转化细胞的特点.方法:实验于2005-08/2006-05在解放军沈阳军区总医院心血管外科和中国医科大学实验技术中心一部完成.取非血液疾病的5例胸科手术患者术中已切除掉的肋骨,抽取骨髓.利用淋巴细胞分离液行密度梯度离心法和差异贴壁法进行分离、提纯骨髓间充质干细胞,并进行培养扩增.用流式细胞仪对第2代的骨髓间充质干细胞表面抗原进行测定.应用10 μmol/L 5-氮胞苷对第2代的骨髓间充质干细胞诱导24 h,于诱导后1,2,3,4周,用反转录-聚合酶链反应检测GATA-4和Nkx2.5基因表达.结果:①3份第2代骨髓间充质干细胞样本重复测定,表达CD29,CD44,不表达CD34,CD45.②以5-氮胞苷诱导培养24 h后,骨髓间充质干细胞形态和排列方式发生明显变化,诱导1周后,细胞体积增大,多呈长梭行,平行排列;诱导2周后,细胞变为短柱状,突起位于两端,相邻细胞的突起紧密接触;诱导3周后,短柱状细胞的突起相互连接,部分细胞可见类肌管样结构;诱导4周后,细胞体积变小,可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构.③诱导组细胞GATA-4和Nkx2.5的聚合酶链反应产物凝胶电泳呈阳性,对照组为阴性,诱导组基因表达量均随着时间延长逐渐增加.结论:5-氮胞苷可诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞转化,其处于祖心肌细胞和分化的心肌细胞之间.
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阿扎胞苷相关性肺病研究新进展
阿扎胞苷(azacitidine)于2004-05-19被美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市,是第一个被批准用于骨髓增生异常综合征(MDS)的表观遗传学修饰治疗药物.近年发现,DNA过度甲基化(hypermethylation)可使包括p15INK4b、p21、CALC1、E-cadherin、HIC-1、RASSFIA等多种调控正常细胞生长、分化及凋亡的基因表达受到抑制,从而导致MDS的发病.因此,DNA的去甲基化治疗已经成为MDS的一个重要治疗靶点[1].作为一种胞嘧啶核苷类似物,阿扎胞苷在DNA复制时可与DNA甲基转移酶(DNMT)竞争性结合,抑制细胞中新合成DNA的甲基化,从而恢复多种与细胞增殖和分化密切相关的基因的正常功能[2].目前认为,阿扎胞苷低剂量时主要发挥去甲基化作用,而高剂量时可对骨髓异常造血细胞产生直接的细胞毒杀伤作用,从而通过这两方面发挥其抗肿瘤作用.近年来,阿扎胞苷已用于我国部分高危MDS或低危并发严重血细胞减少和(或)输血依赖性患者.其推荐剂量为75 mg/(m2·d),7d为1个疗程,每2个疗程间隔4周.
