首页 > 文献资料
-
利用低温诱导减少大肠杆菌发酵中包含体的形成
以大肠杆菌为宿主菌的基因工程菌,在表达过程中,产物大部分形成包含体,本实验探索在发酵过程中,利用低温诱导的方法,减少包含体的形成.
-
抗人卵巢癌×抗人CD3×抗CD28VH单链三特异抗体的胞内可溶表达、纯化及体外活性测定
目的研究抗人卵巢癌(ovarian carcinoma, oc)×抗人CD3×抗CD28VH单链三特异抗体(single chain trispecific antibody, scTsAb)在大肠杆菌中的可溶表达与纯化及纯化后产物的活性测定,从而为其应用于卵巢癌治疗的临床研究打下基础. 方法将已构建的scTsAb表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3) Star菌株,采用低温(30℃)、低剂量IPTG(0.2mmol/L)诱导,进行胞内可溶表达.根据抗卵巢癌三特异抗体(oc TsAb)等电点较高(pI9.0),而菌体蛋白大多为酸性蛋白的特点,利用DEAE弱阴离子交换层析(pH8.0)进行一步纯化,并利用ELISA及FACS的方法检测纯化后抗卵巢癌三特异抗体的活性. 结果 (1) SDS-PAGE鉴定低温诱导时可溶比例达到56%.(2) 绝大多数菌体蛋白被DEAE层析柱吸附,而抗卵巢癌三特异抗体在穿透液中流出, SDS-PAGE检测纯度达到90%.(3) ELISA结果显示纯化后的抗卵巢癌三特异抗体与重组CD28纯抗原,Jurkat(CD3+)细胞膜提取抗原,SKOV3细胞膜提取抗原均有特异性结合.(4) FACS结果证明纯化后的抗卵巢癌三特异抗体与Jurkat(CD3+)活细胞、SKOV3活细胞有特异性结合. 结论低温诱导胞内可溶表达的抗人卵巢癌×抗人CD3×抗CD28VH单链三特异抗体经弱阴离子交换层析一步纯化后仍保持原有免疫学活性,这为大量制备样品,用于进一步生物活性鉴定及临床实验提供了技术基础,也为制备类似的基因工程抗体提供了参考.
-
冷休克蛋白与肿瘤的研究进展
在环境温度发生明显改变时，生物体会产生某种蛋白来调节机体功能，以适应温度变化。比如，在环境温度降低时机体会在低温的刺激下产生一些蛋白来适应环境变化，该类蛋白统称为“冷休克蛋白”（cold shock proteins，CSPs）［1］。迄今为止，CSPs已经在微生物、植物及动物细胞中发现，而且已证实CSPs在核酸结构以及蛋白质结构上具有较高的同源性，且高度保守［2］。冷诱导RNA结合蛋白（cold inducible RNA-binding protein，CIRP）和RNA结合基序蛋白3（RNA binding motif protein3，RBM3）是两种人们关注较多的CSPs。以往大多数学者对这两种蛋白的研究侧重于观察低温诱导后其表达水平升高后所引发的生理调控变化，但近年来，有关CSPs在肿瘤发生发展中的作用愈加受到关注。本文将着重介绍 CIRP 及 RBM3在恶性肿瘤方面的研究进展。
-
体外循环下低温室颤性停搏心肌损伤程度的评估
我们通过动物实验,探讨体外循环下低温诱导的室颤性停搏对心肌损伤程度的影响,为临床提供参考.研究方法 12条健康杂种犬,体重16～20kg,雌雄不拘,随机分为实验组和对照组,每组6只.全麻,气管插管连接球囊行人工通气.经左侧股动、静脉插管测动脉压及中心静脉压.右侧第4肋间进胸,建立体外循环.经左室心尖插管引流.在不同时点冠状窦插气囊导管收集冠状静脉引流液.
-
影响人截短型胰岛素样生长因子-Ⅰ在大肠杆菌中表达的因素
基因工程菌能否高效表达目的基因是基因工程技术成败的关键之一.对影响囊胰岛素样生长因子在大肠杆菌中表达的几个因素,包括宿主-载体系统的选择、基因拷贝数、诱导温度、诱导物的使用及外加药物利福平对表达的影响等问题加以讨论,着看探讨了双拷贝及利福平对表达的影响.
-
大肠杆菌发酵中包含体形成减少的实验研究
目的:减少大肠杆菌发酵过程中包含体的形成.方法:在发酵过程中,加入IPTG后,降低培养温度进行低温诱导.结果:表达产物在细胞内大部分没有形成包含体.结论:低温诱导可减少大肠杆菌发酵中包含体的形成.
-
HIV gp41基因分段低温诱导表达
人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)GP41跨膜蛋白由于具有特殊的穿膜拓扑结构,对宿主菌细胞膜产生毒性作用而使其难以在E.coli中有效表达[1].本室前期工作发现GP41蛋白中有三个区域对表达菌细胞具有毒性作用,其分别为:位于N端2/3区域(N3片段:nt7373-8006)的融合肽(aa512-527)和跨膜区(Aa 684-705),它们含有丰富的疏水性氨基酸;以及位于C端1/3区域(C片段:nt8007-8339)的慢病毒裂解肽LLP1(aa 826-854)和LLP2(aa 768-788),可形成2个两亲性α螺旋,从而对宿主菌产生较强的细胞膜毒性作用使细菌大量死亡,终致使GP41蛋白难以获得有效表达[2].为此我们尝试在低温条件(16℃)下对HIV-gp41N端2/3和C端1/3区域在大肠杆菌BL21(DE)3中进行诱导表达,并对低温条件下GP41蛋白表达对细菌细胞膜的毒性作用特征进行初步探讨.
-
体外循环低温室颤在心脏手术中的应用
体外循环低温室颤是在建立体外循环的条件下，利用低温诱导心室纤颤使心脏停跳而进行手术的一种技术。这项技术的发展经历了相当长的阶段，是在早期电诱颤技术基础上演变而成的，随着近年来其临床应用良好效果的不断报道，该项技术日益受到了人们的重视。
-
快速输注低温液体在弥漫性轴索损伤患者低温诱导中的作用
目的 探讨快速输注低温液体在缩短重型颅脑损伤患者低温诱导时间中的作用.方法 选择惠州市中心人民医院神经外科2010年2月至2012年12月收治的46例罹患弥漫性轴索损伤并行低温治疗的患者作为研究对象,将所有患者随机分为实验组(低温液体+常规低温诱导组)24例及对照组(常规低温诱导组)22例,比较两组病人低温实施至目标体温达标时间的差异.结果 实验组病人低温实施至目标体温达标时间为(30±5.6) min,对照组为(51±7.7) min,实验组具有更短的目标体温诱导时间(t=1.382,P=0.017).结论 快速输注低温液体可缩短弥漫性轴索损伤并行低温治疗的患者的低温诱导时间,使该类患者迅速进入目标低温状态,以快速实现低温的潜在脑保护作用.
-
低温诱导青蒿素生物合成
目的:研究低温处理对青蒿素及其他萜类合成通路的影响.方法:以4℃为胁迫条件,利用高效液相色谱法测定青蒿素含量；硫酸钛沉淀法和N,N-二甲基-对-亚硝基苯胺漂白测定法分别检测黄花蒿叶片过氧化氢(H2O2)和单线态氧(1O2)含量；紫外分光光度法检测过氧化氢酶(CAT)活性；实时荧光定量PCR技术定量分析青蒿素合成途径及竞争途径关键酶基因的表达.结果:4℃处理4h后黄花蒿叶片中1O2和H2O2含量升高,并伴随青蒿素含量和CAT活性逐步提高,4、24和48 h后青蒿素含量分别提高20%、65%和80%；4℃处理24h后,青蒿素合成相关基因[3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因(HMGR)、法呢基焦磷酸合酶基因(FPS)、紫穗槐二烯合酶基因(ADS)、细胞色素P4.单加氧酶基因(CYP7 1AV1)、细胞色素P450氧化还原酶基因(CPR)、青蒿醛-△11(13)双键还原酶基因(DBR2)]的表达普遍上调,其中ADS的表达提高16倍；而青蒿素合成竞争途径的β-石竹烯合酶基因(CS)表达则下调近20倍.结论:低温刺激可能通过产生高浓度活性氧(ROS)促进青蒿素合成前体转化、上调青蒿素合成相关基因表达并抑制竞争途径基因表达等途径促进青蒿素合成.
